一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法技术

本发明专利技术涉及一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法，属于植物组织培养技术领域，本发明专利技术包括以下步骤：1）萌发培养：以塔黄种子作为外植体，消毒后接种于萌发培养基上，种子萌发后继续培养获得无菌小苗；2）增殖培养：将无菌小苗接种于增殖培养基上进行从芽增殖；3）生根诱导：将增殖得到的丛芽分成单株接种到诱导培养基上进行生根诱导；4）离体保存：将生根后的植株接种到离体保存培养基上进行离体保存。本发明专利技术通过外植体种子的萌发、丛芽增殖、生根诱导、离体保存，建立了塔黄的快繁和离体保存体系，继代周期达18个月以上，为高山重要野生植物资源的收集保护、引种驯化、开发利用提供技术支撑。供技术支撑。供技术支撑。

【技术实现步骤摘要】
一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法


[0001]本专利技术属于植物组织培养
，具体的说，涉及一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法。

技术介绍

[0002]塔黄（Rheum nobile），隶属于蓼科（Polygonaceae）大黄属（Rheum），多年生高大草本，国内主要分布于西藏喜马拉雅山麓及云南西北部，生于海拔4000
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4800m的高山流石滩及湿草地。植株根状茎及根长而粗壮，茎单生直立，基生叶呈莲座状，茎生叶及大型叶状圆形，近革质，上部有包裹起层层叠叠的半透明黄色苞片，远望像一座金黄色的宝塔，故此而得名，是一种极具观赏价值的珍稀濒危高山花卉。塔黄是我国重要的药用植物资源，其根茎入药，民间应用广泛，收载于《藏药志》，具有泻热、导滞、散瘀、消肿的功效，主要用于致泻和治疗黄水病，疗效显著，近年来由于大量采挖，种群数量急剧减小。塔黄需要经过5
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7年营养生长才能开花，种子成熟后，便会枯萎死亡，自然环境条件恶劣种子萌发率低，严重影响种群维持及更新。加之在全球变暖的背景下，大量高山植物的适宜生境正在丧失，高山植物多样性面临巨大的威胁，采取必要的措施保护高山植物多样性成为摆在保护生物学家面前的一个紧迫的课题。
[0003]植物离体保存是指利用组织培养技术，将植物的组织和器官（如根、茎、叶、成熟或未成熟的胚等）在人工条件下进行保存，使其分化后重新生长为完整植株。离体培养技术可以快速、大量地实现植物个体的克隆快繁，对不能通过种子库保存、以及珍稀濒危的物种保存和快速繁殖提供了一种高效途径。开展塔黄种质资源保存方法相关研究，促进收集高山极端环境下形成的特殊物种及其所携带的基因信息，将对进一步深入研究高原地区植物适应性演化具有重要意义，以及为高山药用、观赏野生植物种质资源的保护，引种驯化和栽培提供理论基础和技术支持。目前，关于塔黄的组织培养技术进行离体保存相关方面未见报道。

技术实现思路

[0004]为了克服
技术介绍
中存在的问题，本专利技术提供了一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法，通过外植体种子的萌发、丛芽增殖、生根诱导、离体保存，建立了塔黄的快繁和离体保存体系，继代周期达18个月以上，为高山重要野生植物资源的收集保护、引种驯化、开发利用提供技术支撑。
[0005]为实现上述目的，本专利技术是通过如下技术方案实现的：所述的高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法具体包括以下步骤：1）萌发培养：以塔黄种子作为外植体，消毒后接种于萌发培养基上，种子萌发后继续培养获得无菌小苗，所述萌发培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括NAA0.5mg/L、蔗糖20g/L和琼脂6g/L，pH为5.8；2）增殖培养：将无菌小苗接种于增殖培养基上进行从芽增殖，所述增殖培养基以
MS培养基为基本培养基，还包括BA2.0mg/L、TDZ0.1mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L，pH为5.8；3）生根诱导：将增殖得到的丛芽分成单株接种到诱导培养基上进行生根诱导，所述诱导培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括NAA1.0mg/l、蔗糖20g/L和琼脂6g/L，pH为5.8；4）离体保存：将生根后的植株接种到离体保存培养基上进行离体保存，所述的离体保存培养基包括花宝1号2g/L、TDZ0.1mg/l、蔗糖20g/L和琼脂6g/L，pH为5.8。
[0006]作为优选，步骤1）所述的消毒包括用无菌水浸泡种子48h，然后用75%乙醇浸泡20s，2%NaClO消毒6min，无菌水漂洗5
‑
6次，再将种子置于无菌滤纸上晾干。
[0007]作为优选，步骤1）所述萌发培养的培养条件为光照强度1600lx，光照时间12h/d，温度23
±
2℃。
[0008]作为优选，步骤4）所述离体保存条件为光照强度1600lx，温度20℃。
[0009]本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法，以塔黄种子为材料，通过外植体消毒，萌发培养得无菌小苗，并对其进行从芽增殖、生根诱导和离体保存，建立了塔黄的快繁和离体保存体系，继代3次后增殖系数高达1:20.17，离体保存继代周期可达18个月以上。该方法有效地解决了塔黄的组培快繁问题，大大延长了离体保存周期，为高山重要野生植物资源的收集保护、引种驯化、开发利用提供技术支撑。
附图说明
[0010]图1是本专利技术塔黄的组培及离体保存过程；图中，a表示塔黄种子，b表示萌发培养得到的无菌小苗，c表示从芽增殖情况，d表示生根诱导情况，e表示离体保存。
具体实施方式
[0011]为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面将结合附图，对本专利技术的优选实施例进行详细的说明，以方便技术人员理解。
[0012]本专利技术提供了一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法，具体包括以下步骤：1）萌发培养：以塔黄种子作为外植体，用无菌水浸泡种子48h，然后用75%乙醇浸泡20s，2%NaClO消毒6min，无菌水漂洗5
‑
6次，再将种子置于无菌滤纸上晾干，然后接种于萌发培养基上，种子萌发后继续培养获得无菌小苗，所述萌发培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括NAA0.5mg/L、蔗糖20g/L和琼脂6g/L，pH为5.8；萌发培养条件为光照强度1600lx，光照时间12h/d，温度23
±
2℃。
[0013]2）增殖培养：将无菌小苗接种于增殖培养基上进行从芽增殖，所述增殖培养基以MS培养基为基本培养基，还包括BA2.0mg/L、TDZ0.1mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L，pH为5.8。
[0014]3）生根诱导：将增殖得到的丛芽分成单株接种到诱导培养基上进行生根诱导，所述诱导培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括NAA1.0mg/l、蔗糖20g/L和琼脂6g/L，pH为5.8。
[0015]4）离体保存：将生根后的植株接种到离体保存培养基上进行离体保存，所述的离
体保存培养基包括花宝1号2g/L、TDZ0.1mg/l、蔗糖20g/L和琼脂6g/L，pH为5.8，离体保存条件为光照强度1600lx，温度20℃。
[0016]实施例1以塔黄（Rheum nobile）种子为材料，2021年9月采自云南滇西北。首先用无菌水浸泡种子48h，然后75%乙醇浸泡20s，2%NaClO消毒6min，无菌水漂洗5
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6次，种子置于无菌滤纸上晾干，接种于萌发培养基（1/2MS+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L，pH为5.8）上，种子5
‑
7d后萌发，继续培养获得无菌小苗，培养条件为光照强度1600lx，光照时间12h/d，温度23
±
2℃。
[0017]以切除根部的整株无菌小苗为材料，接种于增殖培养基（MS+BA2.0mg/L+TDZ0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH为5.8）上进行从芽增殖，继代周期30d，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法，其特征在于：具体包括以下步骤：1）萌发培养：以塔黄种子作为外植体，消毒后接种于萌发培养基上，种子萌发后继续培养获得无菌小苗，所述萌发培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括NAA0.5mg/L、蔗糖20g/L和琼脂6g/L，pH为5.8；2）增殖培养：将切除根部的无菌小苗整株接种于增殖培养基上进行从芽增殖，所述增殖培养基以MS培养基为基本培养基，还包括BA2.0mg/L、TDZ0.1mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L，pH为5.8；3）生根诱导：将增殖得到的丛芽分成单株接种到诱导培养基上进行生根诱导，所述诱导培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括NAA1.0mg/l、蔗糖20g/L和琼脂6g/L，pH为5.8；4）离体保存：将生根后的植株接种到离体保存培养基...

【专利技术属性】
技术研发人员：李村富，何俊，李春芳，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：