本发明专利技术提供了一种提高口蹄疫疫苗抗原稳定性的缓冲液，含有乳欧液，氯化钠，山梨醇，甘氨酸，K2HPO4.3H2O，KH2PO4，该缓冲液在4℃和37℃条件下具有提高146S抗原热稳定性的作用和明显抑制146S抗原降解的作用，在4℃条件下，缓冲液重悬的抗原和配制的疫苗可长期保存。另外，该缓冲液易于配制、溶解，既可作为重悬FMD抗原的介质，又是一种很好的FMD抗原和疫苗热稳定性保护剂，能用于大规模生产中，实用性强，能明显降低口蹄疫疫苗中有效抗原在保存条件下及极端条件下的降解率，显著提升产品质量。显著提升产品质量。
【技术实现步骤摘要】
一种提高口蹄疫疫苗抗原稳定性的缓冲液
[0001]本专利技术属于兽用生物制品
，涉及一种提高口蹄疫疫苗抗原稳定性的缓冲液。
技术介绍
[0002]口蹄疫病毒（Foot
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and
‑
mouth disease FMDV）引起的口蹄疫（Foot
‑
and
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mouth disease,FMD）是一种传染性极强的动物疫病，发病极快，其易感动物为偶蹄动物，牛、羊和猪的主要临床症状为口腔上皮、蹄部皮肤产生水疱。FMD 传播速度极快，未感染动物和染病动物接触极易被感染，养殖场内一个动物被感染，所有养殖动物都将面临极大威胁，养殖场会因此蒙受巨大的经济损失。幼龄动物被感染后多半会因心肌炎而死亡。FMDV 遍布世界各国，也因为 FMDV的存在，相关易感动物的肉制品出口贸易数量会大幅下降，各国经济往来也会因此受到阻碍。因此，各国都极为重视 FMD 的防控工作，它也是全球被列为最难以消灭的传染病之一。当前，由于国际贸易往来日趋频繁，动物性食品的进出口贸易总额也在急剧攀升，这就使得 FMD 防控工作更为重要，世界各国为了控制 FMD 都付出了不小的代价。
[0003]FMDV 由 1 条单股正链基因组核糖核酸（ribose nucleic acid，RNA）和 4 种结构蛋白组成。FMDV 内部含有少量的 VP2 和 VP4 裂解前体，以及 1 个由 23～24 个氨基酸残基构成的基因组关联蛋白Vpg，Vpg与病毒基因组 RNA 的 5'末端进行共价结合。FMDV 与其他的小 RNA 病毒基因组结构相似，其基因组中含有约 8 500 个核苷酸。它的遗传基因 RNA 通过很长的开放式阅读框（Open reading frame, ORF）翻译出一个多聚蛋白，此多聚蛋白经过一系列翻译、裂变后形成中间产物以及各种完整的结构蛋白和非结构蛋白。
[0004]抗原稀释技术作为疫苗的下游生产技术之一，国内相关技术可以说是少之又少。现用稀释液未能达到理想的抗原保护效果，故有效期内（12个月）有效抗原含量损失较快（降解率大于50%）。口蹄疫灭活疫苗抗原146S的提升及长期稳定一直是各生产厂家重点攻克的技术难点，目前各疫苗生产厂家均将抗原稀释液列为重点研发领域，以提升产品竞争力。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的是提供一种提高口蹄疫疫苗抗原稳定性的缓冲液。
[0006]一种提高口蹄疫疫苗抗原稳定性的缓冲液，该缓冲液的溶质包含以下浓度的组分：乳欧液55~65mL/L，氯化钠7~9g/L，山梨醇25~30g/L，甘氨酸0.4~0.5g/L，K2HPO4.3H2O 4.32 g/L，KH2PO4 0.144 g/L；其中乳欧液的溶质包含以下浓度的组分：氯化钠 6.8 g/L，氯化钾0.4 g/L，硫酸镁0.2 g/L，磷酸二氢钠0.16 g/L，无水葡萄糖1 g/L，无水氯化钙0.2 g/L，水解乳蛋白5 g/L ，上述组分用水溶解，用碳酸氢钠调节乳欧液pH至7.6
‑
7.8。
[0007]所述缓冲液的pH为7.9~8.1（优选8.0）。所述缓冲液的溶剂为水。所述缓冲液为磷
酸盐缓冲液。所述缓冲液添加成分为乳欧液。
[0008]本专利技术缓冲液的各组分的溶质浓度优选为：乳欧液60mL/L，氯化钠8g/L，山梨醇30 g/L，甘氨酸0.4g/L，K2HPO4.3H2O 4.32 g/L，KH2PO40.144 g/L；其中乳欧液的溶质包含以下浓度的组分：氯化钠 6.8 g/L，氯化钾0.4 g/L，硫酸镁0.2 g/L，磷酸二氢钠0.16 g/L，无水葡萄糖1 g/L，无水氯化钙0.2 g/L，水解乳蛋白5 g/L ，上述组分用水溶解，用碳酸氢钠调节乳欧液pH至7.6
‑
7.8。
[0009]本专利技术的缓冲液既可作为重悬FMD抗原的介质，又是一种很好的FMD抗原和疫苗热稳定性保护剂。
[0010]口蹄疫灭活疫苗抗原146S的提升及长期稳定一直是各生产厂家重点攻克的技术难点，疫苗产品质量关系到公司的未来发展前景，本专利技术能大幅度提升产品竞争力。随着本专利技术的实施，公司口蹄疫疫苗品质在各个方面指标保持领先地位，具有很强的商业卖点和免疫效果保证。本专利技术着力提升抗原稳定性，延长保存期，可在疫苗配方中添加较少抗原含量以降低产品成本，市场价值较大。
[0011]本专利技术相对于现有技术的有益效果：本专利技术的缓冲液在4℃和37℃条件下具有提高146S抗原热稳定性的作用和明显抑制146S抗原降解的作用，在4℃条件下，缓冲液重悬的抗原和配制的疫苗可长期保存。另外，该缓冲液易于配制、溶解，既可作为重悬FMD抗原的介质，又是一种很好的FMD抗原和疫苗热稳定性保护剂，能用于大规模生产中，实用性强，能明显降低降低有效抗原在保存条件下及极端条件下的降解，提升产品质量。
[0012]缓冲液配制疫苗加速试验（37℃水浴96h）条件下146S下降不超过5%（现用缓冲液加速试验损失＞40%）；缓冲液配制疫苗保存12个月146S下降≤5%（现用缓冲液疫苗保存12个月146S下降＞60%）；缓冲液配制疫苗与现有疫苗对比，其抗体水平、效力检验均不低于现有水平。
具体实施方式
[0013]下面通过具体实施对本专利技术作进一步说明。
[0014]实施例1缓冲液的配制为提高口蹄疫（FMD）抗原和疫苗的稳定性，采用正交试验设计L18（35），乳欧液、氯化钠、山梨醇和甘氨酸的添加量以及以缓冲液的pH（通过K2HPO4.3H2O和KH2PO4的加入量调节）作为考察因素如表1设置因子水平，以口蹄疫抗原或疫苗在37℃条件下146S抗原降解为0时保存的时间作为评价指标，以0.02mol/L PBS缓冲液（pH值8.0）作为对照，筛选对FMD146S抗原具有最佳热稳定性作用的化学试剂。
[0015]正交试验各组分具体含量如表2。
[0016]通过正交试验设计 L18（35），以溶液 pH 值和乳欧液、氯化钠、山梨醇和甘氨酸4种组分质量浓度作为考察因素，以 FMD 抗原配制疫苗在 37 ℃条件下146S 抗原降解为 0 时保存的时间作为评价指标。结果如表2，通过正交表极差分析方法可得A2B2C2D3E1为最佳组合，即得到最佳的1升稀释液配方如表4：缓冲液配制方法：将 6 种组分按任意顺序加入烧杯中，加注射用水使其充分溶解，定容至1000 mL即可。
[0017]实施例2 稀释液配制疫苗加速试验（37℃水浴96h）缓冲液配制疫苗方法：向上述缓冲液中添加抗原终浓度146S为30ug/ml组成疫苗水相，水相和SEPPIC ISA 206佐剂按照水相：油相=1:1质量比进行疫苗乳化。将水相、油相置于35℃恒温水浴箱中预热至32℃
±
1℃（10min中间晃动数次使温度均匀），然后将水相抗原加到油相中开始计时350RPM搅拌10min完成乳化，乳化结束后将疫苗混匀分装后冷藏2℃
‑
8℃保存。对照试验为现本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种提高口蹄疫疫苗抗原稳定性的缓冲液，其特征在于：该缓冲液的溶质包含以下浓度的组分：乳欧液55~65mL/L，氯化钠7~9g/L，山梨醇25~30g/L，甘氨酸0.4~0.5g/L，K2HPO4.3H2O 4.32 g/L，KH2PO4 0.144 g/L；其中乳欧液的溶质包含以下浓度的组分：氯化钠 6.8 g/L，氯化钾0.4 g/L，硫酸镁0.2 g/L，磷酸二氢钠0.16 g/L，无水葡萄糖1 g/L，无水氯化钙0.2 g/L，水解乳蛋白5 g/L ，上述组分用水溶解，用碳酸氢钠调节乳欧液pH至7.6
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7.8。2.根据权利要求1所述的提高口蹄疫疫苗抗原稳定性的缓冲液，其特征在于：所述缓冲液的pH为7.9~8.1。3.根据权利要求1所述的提高口蹄疫疫苗抗原稳定性的缓冲液，其特征在于：所述缓冲液的溶剂为水。4.根据权利要求1所述的提高口蹄疫疫苗抗原稳定性的缓冲液，其特征在于：所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。5.根据权利要求1所述的提高口蹄疫疫苗抗原稳定性的缓冲液，其特征在于：所述缓冲液添加成分为...
【专利技术属性】
技术研发人员：马爱荣，芮弦，李征军，脱浩亮，
申请(专利权)人：中牧实业股份有限公司兰州生物药厂，
类型：发明
国别省市：
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