一种在非超低温下保持病毒活力的病毒保存液及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种在非超低温下保持病毒活力的病毒保存液及其制备方法，病毒保存液组成为：6.5

【技术实现步骤摘要】
一种在非超低温下保持病毒活力的病毒保存液及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物试剂
，具体涉及一种在非超低温下保持病毒活力的病毒保存液及其制备方法。

技术介绍

[0002]大部分病毒是一种病原体微生物，能够使宿主发病并在生物体内传播而具备传染性，但病毒一般在离开宿主细胞之后很快失活，病毒完整性会被破坏，病毒外壳崩解，核酸发生降解。然而，对于病毒形态、致病机理、变异程度、传染力等的研究则需要保证病毒的活性和结构完整性。因此，需要特定的保存液对采集到的病毒样本进行保存，用于后续的病毒培养、病毒形态、致病机理、遗传变异、传染力、表面抗原和疫苗等研究工作。
[0003]中国专利申请公开号CN113046412B公开一种高安全性的非灭活型病毒保存液及制备方法，在其保存液中加入病毒后，需在
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70℃条件下进行保存，且6天后，病毒感染力下降至60%左右。可见该病毒保存液对病毒活力的维持效果并不佳；此外，在病毒在采集、运输的过程中，若要一直保存于
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70℃的温度环境中，则该条件过于苛刻，会大大增加采集和运输的成本。
[0004]中国专利申请CN 112501253 A提供一种具有保存能力的病毒保存液，包括：硫酸镁0.1
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0.9g、氯化钙2.0
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3.6g、氯化钾0.7
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1.5g、氯化钠6.0
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10.0g、D
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葡萄糖0.5
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2.5g、磷酸二氢钾0.01r/>‑
0.23g、十二水合磷酸氢二钠0.05
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0.15g、牛血清白蛋白0.5
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1.5g、双抗3.0
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8.0mL（青霉素（碱）和链霉素（碱））、甘油50
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90mL、苯酚红5.0
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7.0mg、消泡剂0.1
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0.3mL、L
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谷氨酸0.28
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2.95g、HEPES
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Na 2.0
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6.0g。实验证明该病毒样本保存液也可4℃运输保存病毒样本约3天，在25℃室温情况下保存病毒样本2天，在第3天时，病毒量样本测定浓度由第0天的8.41ng/μL下降到1.43左右，已不具有感染细胞的能力。

技术实现思路

[0005]（一）要解决的技术问题鉴于现有技术的上述缺点、不足，本专利技术提供一种在非超低温下保持病毒活力的病毒保存液及其制备方法，所述病毒保存液保存病毒时在常温条件（25℃）或2
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8℃条件下较大程度且较长时间地保持病毒样本的活性（感染力）和抗原/核酸的完整性，大大降低了保存病毒的条件要求，优化了采集、运输过程中的样本保存条件，降低采集保存运输的成本，有利于研究人员展开对病毒的培养、鉴定、测序及致病机理等的研究工作。本专利技术还涉及该病毒保存液的制备方法。
[0006]（二）技术方案第一方面，本专利技术提供一种在非超低温下保持病毒活力的病毒保存液，其由包含以下溶质的水溶液所组成：KCl、NaH2PO4、Na2HPO4、HEPES溶液、牛血清白蛋白、丙三醇、葡萄糖、硫酸庆大霉素、多粘菌素、制霉菌素、消泡剂、苯酚红；其中，KCl的浓度为6.5
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9.5g/L，NaH2PO4的浓度为0.4
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0.6g/L；Na2HPO4的浓度为2.4
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3.4g/L，HEPES溶液的添加浓度为20
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30mM，牛血清白蛋白的浓度为0.8
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1.2g/L，葡萄糖的浓度为0.8
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1.2g/L，硫酸庆大霉素的浓度为180
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220mg/L，多粘菌素的浓度为3.2
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4.8mg/L，制霉菌素的浓度为8
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12mg/L，苯酚红的浓度为20
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30mg/L，丙三醇的添加量为85
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115mL/L，消泡剂的添加量为0.1
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0.4mL/L。
[0007]作为本专利技术的一个较佳实施例，所述病毒保存液中，KCl的浓度为7.5
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8.5g/L，NaH2PO4的浓度为0.45
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0.55g/L；Na2HPO4的浓度为2.8
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3.2g/L，HEPES溶液的添加浓度为23
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27mM，牛血清白蛋白的浓度为0.9
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1.1g/L，葡萄糖的浓度为0.9
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1.1g/L，硫酸庆大霉素的浓度为195
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205mg/L，多粘菌素的浓度为3.8
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4.2mg/L，制霉菌素的浓度为9
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11mg/L，苯酚红的浓度为23
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27mg/L，丙三醇的添加量为90
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110mL/L，消泡剂的添加量为0.2
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0.3mL/L。
[0008]作为本专利技术的一个较佳实施例，所述病毒保存液中，KCl的浓度为8g/L，NaH2PO4的浓度为0.5g/L；Na2HPO4的浓度为3g/L，HEPES溶液的添加浓度为25mM，牛血清白蛋白的浓度为1g/L，葡萄糖的浓度为1g/L，硫酸庆大霉素的浓度为200mg/L，多粘菌素的浓度为4mg/L，制霉菌素的浓度为10mg/L，苯酚红的浓度为25mg/L，丙三醇的添加量为100mL/L，消泡剂的添加量为0.2
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0.3mL/L。
[0009]作为本专利技术的一个较佳实施例，所述病毒保存液的pH=7.4
±
0.2。
[0010]第二方面，本专利技术提供一种在非超低温下保持病毒活力的病毒保存液的制备方法，其包括：S1、按照病毒保存液的组成，量取HEPES溶液至配液容器中；S2、分别将准确称量的NaH2PO4、Na2HPO4、KCl、牛血清白蛋白、葡萄糖、苯酚红加到配液容器中进行溶解；S3、量取丙三醇、消泡剂加入配液容器中，采用纯化水润洗量取工具2
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3次，将每次的润洗水加到配液容器中；S4、称取硫酸庆大霉素、多粘菌素和制霉菌素，加至配液容器中；S5、向配液容器中加入纯化无菌水定容，摇匀，调酸碱度至23
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28℃测量的pH=7.4
±
0.2；S6、使用0.22微米孔径的过滤装置进行过滤，以5L/min速率过滤进行除菌除杂，在121℃，0.1Mpa条件下高压灭菌30min；冷却后室温放置保存。
[0011]第三方面，本专利技术还提供一种非低温下的病毒非灭活保存方法，将病毒放置到第一方面任一项所述的在非超低温下保持病毒活力的病毒保存液中进行保存，保存温度条件为：室温环境下、密封保存≤72小时；或者2
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8℃环境温度下、密封保存≤168小时。
[0012]（三）有益效果（1）与目前的≤
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种在非超低温下保持病毒活力的病毒保存液，其特征在于，由包含以下溶质的水溶液所组成：KCl、NaH2PO4、Na2HPO4、HEPES溶液、牛血清白蛋白、丙三醇、葡萄糖、硫酸庆大霉素、多粘菌素、制霉菌素、消泡剂、苯酚红；其中，KCl的浓度为6.5
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9.5g/L，NaH2PO4的浓度为0.4
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0.6g/L；Na2HPO4的浓度为2.4
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3.4g/L，HEPES溶液的添加浓度为20
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30mM，牛血清白蛋白的浓度为0.8
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1.2g/L，葡萄糖的浓度为0.8
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1.2g/L，硫酸庆大霉素的浓度为180
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220mg/L，多粘菌素的浓度为3.2
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4.8mg/L，制霉菌素的浓度为8
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12mg/L，苯酚红的浓度为20
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30mg/L，丙三醇的添加量为85
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115mL/L，消泡剂的添加量为0.1
‑
0.4mL/L。2.根据权利要求1所述的在非超低温下保持病毒活力的病毒保存液，其特征在于，所述病毒保存液中，KCl的浓度为7.5
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8.5g/L，NaH2PO4的浓度为0.45
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0.55g/L；Na2HPO4的浓度为2.8
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3.2g/L，HEPES溶液的添加浓度为23
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27mM，牛血清白蛋白的浓度为0.9
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1.1g/L，葡萄糖的浓度为0.9
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1.1g/L，硫酸庆大霉素的浓度为195
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205mg/L，多粘菌素的浓度为3.8
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4.2mg/L，制霉菌素的浓度为9
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11mg/L，苯酚红的浓度为23
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27mg/L，丙三醇的添加量为90

【专利技术属性】
技术研发人员：黄洁兰，谭选平，李银超，钱广，蒋威，李印军，于洪波，
申请(专利权)人：深圳市梓健生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：