一种具有体内抗氧化活性的枸杞蛋白肽及其制备方法技术

一种具有体内抗氧化活性的枸杞蛋白肽，由以下氨基酸残基组成：亮氨酸

【技术实现步骤摘要】
一种具有体内抗氧化活性的枸杞蛋白肽及其制备方法


[0001]本专利技术属于农产品精深加工
，具体涉及一种具有体内抗氧化活性的枸杞蛋白肽及其制备方法。

技术介绍

[0002]枸杞是茄科多年生落叶小灌木，是我国重要的药食两用植物，具有较高的保健功效，枸杞中富含蛋白质、氨基酸、维生素、微量元素、黄酮类化合物、生物碱、多糖、萜类化合物等多种营养成分和生物活性物质，枸杞具有极高的食用价值，因其抗氧化、抗衰老、抗糖尿病、抗癌、调节免疫等功能。
[0003]自由基是指一类含有未配对电子的独立的物质，包含分子、原子、原子团或离子。若其含氧基团含有不配对电子则称为氧自由基，主要类型为超氧阴离子、过氧化氢、羟自由基、单线态氧等。国内外大量的研究证实，氧自由基对生物体有强大的毁坏作用，因而它被认为是许多疾病产生的根本，体内自由基与机体的许多疾病的发生密切相关，自由基的增加，会引起体内氧化应激的增加，氧化应激的增加与糖尿病的代谢综合征有关，同时也与微血管等方面的疾病息息相关，因而改善氧化应激可以减少糖尿病的并发症。
[0004]人体补充蛋白质，需要分解成小肽的形式，才能进一步被人体吸收利用。蛋白肽就是通过先进的生物酶解工艺从天然植物蛋白中提取，分子量在1000道尔顿左右的小分子活性肽。蛋白肽是营养性与功能性的结合，可以直接被人体吸收，对补充优质蛋白营养、提高免疫力、修复细胞、激活细胞、抗疲劳等有功能性作用，而制备枸杞蛋白肽则可以更好的发挥枸杞的有益生理性作用。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种具有体内抗氧化活性的枸杞蛋白肽及其制备方法。
[0006]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供的技术方案是：一种具有体内抗氧化活性的枸杞蛋白肽，由以下氨基酸残基组成：亮氨酸
‑
丙氨酸
‑
酪氨酸
‑
亮氨酸
‑
谷氨酸
‑
苏氨酸
‑
天冬氨酸
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苯丙氨酸
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谷氨酸
‑
苏氨酸
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精氨酸。
[0007]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供的技术方案是：一种具有体内抗氧化活性的枸杞蛋白肽的其制备方法，其特征在于：包括下列步骤：
[0008]步骤1：对枸杞饼粕进行脱脂，干燥后粉碎得到枸杞脱脂粉；
[0009]步骤2：将枸杞脱脂粉与水混合，然后调节pH值至9
‑
11，加热并在搅拌条件下进行提取，得到的提取液离心取上清液，接着调节pH值至3.3
‑
3.7，搅拌1
‑
2h，离心取沉淀，水洗沉淀后调节pH值至中性后冻干，得枸杞蛋白；
[0010]步骤3：将枸杞蛋白与水混合，得到枸杞蛋白溶液，85
‑
95℃水浴5
‑
15min，然后调pH值至8
‑
9，添加风味蛋白酶后，于45
‑
55℃水解4
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7h，期间维持pH值，酶解结束后灭酶终止反应，得到枸杞蛋白水解液；
[0011]步骤4：枸杞饼粕蛋白肽分离纯化，具体包括：
[0012]首先，使用3kDa的超滤膜对枸杞蛋白水解液进行分级分离，取分子量小于3kDa的组分，浓缩后进行冷冻干燥，得枸杞小肽组分；
[0013]其次，采用DEAE纤维素离子交换柱对所述枸杞小肽组分进行洗盐处理，再经葡聚糖凝胶色谱柱分离，获得枸杞蛋白肽亚组分；各亚组分进行体外抗氧化活性检测，获得具有体外抗氧化活性的枸杞蛋白小肽；
[0014]再次，将具有体外抗氧化活性的枸杞蛋白小肽配制成溶液，再使用反相高效液相色谱进行分离；所述反相高效液相色谱采用Hypersil C18柱；洗脱流速0.5mL/min，进样体积20μL，流动相A：超纯水，含0.5％ TFA；流动相B：乙腈，含0.5％ TFA，线性洗脱0
‑
20min，B(5％
‑
60％)，检测波长220nm；收集组分峰进行体内抗氧化活性测定，将具有显著体内抗氧化活性的枸杞蛋白小肽进行氨基酸序列测定。
[0015]步骤5：枸杞活性蛋白肽氨基酸序列测定
[0016]使用液质联用系统进行多肽序列分析；肽段样品通过自动进样器吸入后结合至C18捕获柱，然后被洗脱至分析柱进行分离；利用两个流动相；流动相A：H2O含有0.1％甲酸；流动相B：乙腈含有0.1％甲酸；建立30min的分析梯度：
[0017][0018]液相的流速设置为300μL/min；
[0019]鉴定结果，该活性肽为含11个氨基酸残基的小肽：亮氨酸
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丙氨酸
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酪氨酸
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亮氨酸
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谷氨酸
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苏氨酸
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天冬氨酸
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苯丙氨酸
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谷氨酸
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苏氨酸
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精氨酸。
[0020]优选的技术方案为：步骤1中，取枸杞籽提油后的副产物枸杞饼粕，用正己烷以1g:6
‑
15mL的料液比，在搅拌条件上提取，然后进行抽滤，取滤渣重复用正己烷提取至滤液无色透明时收集滤渣，用蒸馏水洗净滤渣后放入恒温干燥箱中烘干，得枸杞脱脂粉，置于4℃冰箱冷藏备用。
[0021]优选的技术方案为：步骤2中，将枸杞脱脂粉与水按质量比1:8
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12混合，然后调节pH值至9
‑
11；加热至50
‑
60℃并在搅拌条件下提取1
‑
2h，得到的提取液以5000
‑
9000r/min离心10
‑
20min，取上清液，接着调节pH值至3.3
‑
3.7，搅拌1
‑
2h，以5000
‑
9000r/min离心10
‑
20min，取沉淀，水洗沉淀后调节pH值至中性后冻干，得枸杞蛋白。
[0022]由于上述技术方案运用，本专利技术与现有技术相比具有的优点是：
[0023]本专利技术制得的枸杞蛋白小肽是营养性与功能性的结合，可以直接被人体吸收，对补充优质蛋白营养、提高免疫力、修复细胞、激活细胞、抗疲劳等有功能性作用，而制备枸杞蛋白肽则可以更好的发挥枸杞的有益生理性作用。
附图说明
[0024]图1为枸杞小肽高效液相色谱分离结果。
[0025]图2为本专利技术蛋白小肽测序结果。
具体实施方式
[0026]以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本实施例所表述的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效。
[0027]请参阅图1
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2。须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本专利技术可实施的限定条件，故不本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有体内抗氧化活性的枸杞蛋白肽，其特征在于：由以下氨基酸残基组成：亮氨酸
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丙氨酸
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酪氨酸
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亮氨酸
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谷氨酸
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苏氨酸
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天冬氨酸
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苯丙氨酸
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谷氨酸
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苏氨酸
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精氨酸。2.一种具有体内抗氧化活性的枸杞蛋白肽的其制备方法，其特征在于：包括下列步骤：步骤1：对枸杞饼粕进行脱脂，干燥后粉碎得到枸杞脱脂粉；步骤2：将枸杞脱脂粉与水混合，然后调节pH值至9
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11，加热并在搅拌条件下进行提取，得到的提取液离心取上清液，接着调节pH值至3.3
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3.7，搅拌1
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2 h，离心取沉淀，水洗沉淀后调节pH值至中性后冻干，得枸杞蛋白；步骤3：将枸杞蛋白与水混合，得到枸杞蛋白溶液，85
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95℃水浴5
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15 min，然后调pH值至8
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9，添加风味蛋白酶后，于45
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55℃水解4
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7 h，期间维持pH值，酶解结束后灭酶终止反应，得到枸杞蛋白水解液；步骤4：枸杞饼粕蛋白肽分离纯化，具体包括：首先，使用3 kDa的超滤膜对枸杞蛋白水解液进行分级分离，取分子量小于3kDa的组分，浓缩后进行冷冻干燥，得枸杞小肽组分；其次，采用DEAE纤维素离子交换柱对所述枸杞小肽组分进行洗盐处理，再经葡聚糖凝胶色谱柱分离，获得枸杞蛋白肽亚组分；各亚组分进行体外抗氧化活性检测，获得具有体外抗氧化活性的枸杞蛋白小肽；再次，将具有体外抗氧化活性的枸杞蛋白小肽配制成溶液，再使用反相高效液相色谱进行分离；所述反相高效液相色谱采用Hypersil C18柱；洗脱流速0.5 mL/min，进样体积20μL，流动相A：超纯水，含0.5% TFA；流动相B：乙腈，含0.5% TFA，线性洗脱0
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20 min，B (5%
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60%)，检测波长220 nm；收集组分峰进行体内抗氧化活性测定，将具有显著体内抗氧化活性的枸杞蛋白小肽进行氨基酸序列测定；步骤5：枸杞活性蛋白肽氨基酸序列测定使用液质联用系统进行多肽序列分析：肽段样品通过自动进样器吸入后结合至C18捕获柱，然后被洗脱至分析柱进行分离；利用两个流动相；流动相A：H2O含有0.1%甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏兆军，倪志婧，王薇，
申请(专利权)人：北方民族大学，
类型：发明
国别省市：