一种细胞培养肉的制备方法技术

本公开提供一种生产细胞培养肉的方法，包括：根据细胞贴壁能力的区别，分别从动物的肌肉组织、脂肪组织中分离肌肉前体细胞、脂肪前体细胞；将肌肉前体细胞和脂肪细胞混合，导入细胞外基质薄层，进行3D培养扩增，获得细胞肉培养薄层；将多个细胞肉培养薄层叠加，用生长培养液培养，然后用成肌分化培养液培养，得细胞培养肉。本公开的方法分离前体细胞效率高，成本低，培养过程很好地保持前体细胞的特性，分化成肌肉纤维更有效和粗壮，脂肪细胞和肌肉细胞共培养改善了细胞培养肉的口感和营养，所得的细胞肉为宠物食品提供了更安全、健康和环保的选择。保的选择。保的选择。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞培养肉的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其细胞应用领域，具体涉及一种利用动物高活性肌肉和脂肪前体细胞生产细胞培养肉的方法。

技术介绍

[0002]人造肉，即细胞培养肉（cell
‑
based meat, CBM），近几年来得到全球舆论和市场的广泛关注。联合国粮食及农业组织（FAO）预测，到2050年，全球肉类需求将达到4.55亿吨，比2005年增长76％。由于当前的大型畜牧业的生产方法与公共卫生问题的复杂性，以及肉类生产相关的温室效应、环境退化和动物福利等问题，全球的不断增长的肉类需求引起了越来越多的担忧和负面后果。畜牧业的大规模发展与食源性疾病、抗生素抗性和传染性疾病的规模化流行相互关联，密切影响了人类的身体健康。畜牧业也加剧了环境问题，包括温室气体排放，以及土地和水资源利用。还有动物福利和伦理问题，每年有数十亿动物被人类食品系统的运转所直接或间接消灭。
[0003]猫天生喜好捕食鼠，鼠肉富含大量的蛋白质和均衡的氨基酸、维生素，能让猫毛色鲜亮，精力焕发。而且鼠肉富含牛磺酸，能加强猫夜视能力，如果长期缺乏就会患夜盲症。鼠肉的营养成分对于猫而言相对比较健康，但野生鼠容易携带病原体，并不适合作为现代家养宠物的食物。现阶段的宠物食品，例如猫粮，主要来源于鸡肉、鱼肉、牛肉等，这些肉类是猫的常见的食物过敏原，而且其成分与猫的营养需求不完全匹配，需要额外添加营养成分。另外，宠物肉类食品很多可能是来自动物内脏和骨头，甚至是由病死的动物肉制成，质量难以控制。目前宠物肉类食品的生产并不能令人满意。

技术实现思路

[0004]专利技术要解决的问题现有的肉类食品生产伴随着环境、公共卫生、动物福利和伦理问题，供宠物食用的肉类产品存在质量控制困难、成分不够健康等问题。本专利技术提供一种细胞培养肉的生产方法，以解决现有技术一方面或多方面的问题。
[0005]用于解决问题的方案为实现上述目的，本公开提供一种生产细胞培养肉的方法，包括以下步骤：I. 从动物的肌肉组织中分离肌肉前体细胞，从动物的脂肪组织中分离脂肪前体细胞；II. 将所述肌肉前体细胞和所述脂肪前体细胞混合，导入细胞外基质薄层，进行3D培养扩增，获得细胞肉培养薄层；III. 将多个所述细胞肉培养薄层叠加，用生长培养液培养，然后用成肌分化培养液培养，得细胞培养肉。
[0006]在本公开进一步的方案提供的方法中，在所述步骤I中，利用肌肉前体细胞较慢地贴壁生长的特性，将肌肉前体细胞与快速贴壁生长和不贴壁生长的肌肉内其它细胞分离；
利用脂肪前体细胞较快地贴壁生长的特性，将脂肪前体细胞与慢速贴壁生长和不贴壁生长的脂肪组织内其它细胞分离。
[0007]在本公开进一步的方案提供的方法中，从动物的肌肉组织中分离肌肉前体细胞的过程为：将肌肉组织酶解，将所得的细胞悬液接种在胶原蛋白包被的培养容器中，接种2~4小时后，将含有未贴壁细胞的培养液转移到另一个胶原蛋白包被的培养容器中，继续培养24~36小时后，洗去未贴壁细胞，保留贴壁生长的细胞，得到肌肉前体细胞，通过2D表面培养来初步扩增肌肉前体细胞。
[0008]在本公开进一步的方案提供的方法中，从动物的脂肪组织中分离脂肪前体细胞的过程为：将脂肪组织酶解，将所得的细胞悬液接种在胶原蛋白包被的培养容器中，接种6~12小时后，洗去未贴壁细胞，保留贴壁生长的细胞，得到脂肪前体细胞，通过2D表面培养来初步扩增脂肪前体细胞。
[0009]在本公开进一步的方案提供的方法中，所述细胞外基质薄层由以下方式制备：将可食用植物切割为小片，用5%~15%十二烷基硫酸钠浸泡 2~4天，再用0.1%~0.3% TritonX
‑
100浸泡1~3天，经水洗、灭菌备用。
[0010]在本公开进一步的方案提供的方法中，所述肌肉前体细胞和所述脂肪细胞的混合比例为1.5:1 ~ 10:1。
[0011]在本公开进一步的方案提供的方法中，在所述步骤II中，进行3D培养扩增时所用的培养液中含有5~10 ng/ml的Jagged1多肽。
[0012]在本公开进一步的方案提供的方法中，在所述步骤III中，细胞肉培养薄层叠加的层数为4~6层。
[0013]在本公开进一步的方案提供的方法中，在所述步骤III中，将多个所述细胞肉培养薄层叠加，用生长培养液培养3~5天，然后用成肌分化培养液培养4~6天。
[0014]在本公开进一步的方案提供的方法中，所述生长培养液含有5~10 ng/ml的Jagged1多肽，所述成肌分化培养液含有4~8 ng/ml的follistatin 344蛋白。
[0015]专利技术的效果综上所述，本专利技术具备以下优点：1、本专利技术利用特定细胞贴壁性质的差异，从组织中分离肌肉前体细胞、脂肪前体细胞，操作简便快速，目标细胞收率高，分离出的细胞具有良好的活性。
[0016]2、本专利技术以植物来源的细胞外基质作为动物细胞生长和分化的载体，可有效承载肌肉和脂肪细胞的培养，成本低，来源广泛，制备方便。
[0017]3、本专利技术将脂肪细胞和肌肉细胞共培养，有效地改善了细胞培养肉的口感和营养。
[0018]4、本专利技术分离得到的前体细胞更多地保留了体内原始组织的生物学特征和生物营养成分，且不需要外源转基因成分的辅助，节省了诱导干细胞转化的过程，用时少，成本低。
[0019]5、本专利技术在细胞培养的不同阶段针对性地使用特定的培养液，在培养前期保持前体细胞的生长分化潜力，促进细胞快速分裂生长，在培养后期促进肌肉纤维快速成熟和增大，实现了细胞培养在时间和空间上的协调。
[0020]6、本专利技术提供的细胞培养肉的生产过程符合动物福利，细胞肉产品卫生可靠，营
养全面，为宠物食品提供了更安全、健康和环保的选择。
附图说明
[0021]参考以下附图，根据一个或多个不同实施例对本公开进行详细描述。 提供的附图是为了便于理解本公开，而不应认为是对本公开的广度、范围、尺寸或适用性的限制。为了便于说明，附图不一定按比例绘制。
[0022]图1为实施例1体外分离培养的田鼠的肌肉和脂肪前体细胞的光镜图像。
[0023]图2为实施例1的田鼠细胞在体外长成肌肉组织的Masson三色染色图。
[0024]图3为实施例2的大鼠细胞在体外长成肌肉组织的Masson三色染色图。
实施方式
[0025]本专利技术提供一种生产细胞培养肉的方法，包括以下步骤：I. 获得肌肉前体细胞和脂肪前体细胞肌肉前体细胞、脂肪前体细胞可分别从动物的肌肉组织、脂肪组织获取。所述动物可以是啮齿类动物，包括但不限于田鼠、大鼠、小鼠、豚鼠等。组织供体优选健康的年轻动物个体。动物经适当麻醉或人道处死后，常规地进行表面消毒，分离出所需的组织，例如肌肉组织、脂肪组织。
[0026]将肌肉组织剪碎，进行酶解。细胞解离后，除去碎片，将细胞悬液接种在胶原蛋白包被的培养皿或培养瓶中。其中，对于培养器皿的表面处理，优选每75cm2的培养面积以4~8ml的0.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生产细胞培养肉的方法，包括以下步骤：I. 从动物的肌肉组织中分离肌肉前体细胞，从动物的脂肪组织中分离脂肪前体细胞；II. 将所述肌肉前体细胞和所述脂肪前体细胞混合，导入细胞外基质薄层，进行3D培养扩增，获得细胞肉培养薄层；III. 将多个所述细胞肉培养薄层叠加，用生长培养液培养，然后用成肌分化培养液培养，得细胞培养肉。2.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述步骤I中，利用肌肉前体细胞较慢地贴壁生长的特性，将肌肉前体细胞与快速贴壁生长和不贴壁生长的肌肉组织内其它细胞分离；利用脂肪前体细胞较快地贴壁生长的特性，将脂肪前体细胞与慢速贴壁生长和不贴壁生长的脂肪组织内其它细胞分离。3.根据权利要求1所述的方法，其中，从动物的肌肉组织中分离肌肉前体细胞的过程为：将肌肉组织酶解，将所得的细胞悬液接种在胶原蛋白包被的培养容器中，接种2~4小时后，将含有未贴壁细胞的培养液转移到另一个胶原蛋白包被的培养容器中，继续培养24~36小时后，洗去未贴壁细胞，保留贴壁生长的细胞，得到肌肉前体细胞，通过2D表面培养来初步扩增肌肉前体细胞。4.根据权利要求1所述的方法，其中，从动物的脂肪组织中分离脂肪前体细胞的过程为：将脂肪组织酶解，将所得的细胞悬液接种在胶原蛋白包被的培养容器中，接种6~12小时后，洗去未贴壁细胞，保留贴壁生长的细胞，得到脂肪前体细...

【专利技术属性】
技术研发人员：牟晓东，甘元善，
申请(专利权)人：山东卓东生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：