一种基于点击化学反应的SERS串联策略来检测p53基因的方法技术

本发明专利技术公开一种基于点击化学反应的SERS串联策略来检测p53基因的方法，属于生物检测技术领域。该方法巧妙地引入了靶DNA触发的HCR聚合物来富集CuONPs用于催化点击化学反应，将p53基因的数量转化为CuONPs的数量。经酸化和还原后，释放的Cu(I)被用来催化click反应，导致拉曼信号分子的消耗。通过磁分离对上清液中未反应的拉曼信号分子进行检测，随后读出炔烃的拉曼信号，通过炔烃拉曼信号得到p53基因浓度。该方法具有灵敏度高、检测限低(0.0174pM)、普适性、检测过程简单、准确定量检测等特点。利用该方法在低浓度范围内对血清样本中p53基因的检测具有良好的性能，具有良好的临床应用前景。景。景。

【技术实现步骤摘要】
一种基于点击化学反应的SERS串联策略来检测p53基因的方法


[0001]本专利技术属于生物检测
，涉及一种基于点击化学反应的SERS串联策略来检测p53基因的方法，具体涉及一种基于富集于长链DNA聚合物中的CuO纳米颗粒催化click化学反应进行p53基因SERS检测的方法。

技术介绍

[0002]癌症占全世界死亡人数的八分之一，而且大多数癌症是在晚期发现的，因此癌症的早期诊断和预后尤为重要。p53基因是一种癌症抑制基因，被称为“基因组的守护者”。p53基因的突变大多发生在癌症早期，影响肿瘤抑制因子的活性，并导致超过一半的人类癌症。因此，对生物标本中p53基因的敏感检测对早期癌症预防具有重要意义。到目前为止，基于电化学、比色法、化学发光、荧光等分析方法已经被用于检测p53基因。但这些方法本身具有一定的局限性，比如对检测样本有损伤，易光漂白和光淬灭，设备操作复杂。因此建立快速、简单、无毒、超灵敏度检测p53基因的方法具有非常重要的意义。
[0003]几十年来，表面增强拉曼散射(surface
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于点击化学反应的SERS串联策略来检测p53基因的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)拉曼信号探针的制备选用金纳米颗粒作为基底，将含炔基的拉曼信号分子通过共价键和静电相互作用合成了拉曼信号探针；(2)叠氮修饰的磁珠的制备选用羧基磁珠用活化剂活化羧基后，通过酰胺键将叠氮化合物修饰上去，得到叠氮修饰的磁珠；(3)富集CuONPs的长链DNA聚合物的合成：(A)采用活化剂活化Fe3O4@SiO2上的羧基后，与P0室温孵育，得到P0/Fe3O4@SiO2；(B)将p53基因与P0/Fe3O4@SiO2再室温孵育，得到p53/P0/Fe3O4@SiO2；(C)将巯基修饰的H1和H2进行活化处理后，与p53/P0/Fe3O4@SiO2室温孵育，通过完成杂交链反应得到长链DNA聚合物；(D)将CuONPs与长链DNA聚合物混合，室温孵育，再加盐进行老化；然后磁分离后得到富集CuONPs的长链DNA聚合物；(4)炔基信号读出和SERS信号检测(a)将不同浓度p53基因诱导下的富集CuONPs的长链DNA聚合物，经酸化和还原之后，与步骤(1)的拉曼信号探针和步骤(2)的叠氮修饰的磁珠进行混合，进行点击化学反应消耗拉曼信号分子，磁分离，取上清液将未反应的拉曼信号分子进行拉曼信号测试，得到拉曼信号强度；(b)根据p53基因的浓度和磁分离之后上清液中相对于空白对照(Control)的拉曼信号强度的减少量的对应关系建立标准曲线，从而利用拉曼信号强度减少量对p53基因进行定量检测。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)(A)中所述P0的序列为：5
′‑
ACCTGGACTGAACGAGTCTTCCA
‑3′
；步骤(3)(B)中所述的p53基因的序列为：5
′‑
TCATCACACTGGAAGACTC
‑3′
。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)(C)中所述的H1的序列为：5
′‑
ATGACGCCGTGACTGGCTAGCCGGCAGCTAGCCAGTCACGGCGTCATAGTCCATTTTTT
‑
SH
‑3′
；步骤(3)(C)中所述的H2的序列为：5
′‑
SH
‑
TTTTTTTGCCGGCTAGCCAGTCACGGCGTCATTGGACTATGACGCCGTGACTGGCTAGC
‑3′
。4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的含炔基的拉曼信号分子为4
‑
乙炔基苯胺；步骤(2)中所述的叠氮化合物为11
‑
叠氮
‑
3,6,9
‑
三氧杂十一烷
‑1‑
胺。5.根据权利要求1～3任一项所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡勇军，胡婕妤，余星星，庄秀眉，孙岩，王俊杰，任海婷，张晟昊，张月寿，邱红星，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：