一种菊黄东方鲀鱼精蛋白的提取方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种菊黄东方鲀鱼精蛋白的提取方法，其包括以下步骤：粗品提取：将菊黄东方鲀精巢干制品与NaCl溶液混匀，经离心后弃上清液，得到第一沉淀物；将第一沉淀物置于硫酸溶液静置提取，再经离心后取上清液，得到提取物；将提取物置于无水乙醇中沉淀，再经离心后弃上清液得第二沉淀物，第二沉淀物冻干后得鱼精蛋白粗品；粗品提纯：对鱼精蛋白粗品依次进行葡聚糖凝胶层析、离子交换层析和脱盐层析，得到鱼精蛋白纯品。此外，还涉及上述提取方法得到的鱼精蛋白纯品在保鲜剂中的应用。本发明专利技术能够有效提取菊黄东方鲀鱼精蛋白，并将其应用于养殖河鲀的加工保鲜，天然无公害。天然无公害。天然无公害。

【技术实现步骤摘要】
一种菊黄东方鲀鱼精蛋白的提取方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种菊黄东方鲀鱼精蛋白的提取方法及应用。

技术介绍

[0002]自暗纹东方鲀和红鳍东方鲀有条件放开后，全国河鲀养殖规模迅速扩张。福建省养殖的主要品种为菊黄东方鲀和双斑东方鲀，年产量超10000 t。一般成熟季节，鱼类的精巢占体重的10%以上，每年福建养殖河鲀加工后产生的精巢有近千吨。而精巢作为还未放开食用的部位，且精巢组织气味独特，通常只能当作加工废弃物丢弃，造成环境污染和资源浪费。因此开展养殖河鲀精巢这部分加工副产物资源的高值化利用，对于提高养殖河鲀的附加值，保护环境具有重要的意义。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种菊黄东方鲀鱼精蛋白的提取方法及应用，其能够有效提取菊黄东方鲀鱼精蛋白，并将其应用于养殖河鲀的加工保鲜，天然无公害。
[0004]为达到上述目的，本专利技术公开了一种菊黄东方鲀鱼精蛋白的提取方法，其包括以下步骤：粗品提取：将菊黄东方鲀精巢干制品与NaCl溶液混匀，经离心后弃上清液，得到第一沉淀物；将第一沉淀物置于硫酸溶液静置提取，再经离心后取上清液，得到提取物；将提取物置于无水乙醇中沉淀，再经离心后弃上清液得第二沉淀物，第二沉淀物冻干后得鱼精蛋白粗品；粗品提纯：对鱼精蛋白粗品依次进行葡聚糖凝胶层析、离子交换层析和脱盐层析，得到鱼精蛋白纯品。
[0005]优选地，粗品提取步骤中，NaCl溶液的浓度为0.14mol/L，菊黄东方鲀精巢干制品与NaCl溶液的料液比（mg/mL）为1：10，菊黄东方鲀精巢干制品与NaCl溶液混合后磁力搅拌30min，于25℃温度下离心20min，离心转速为10000r/min；第一沉淀物置于其4倍体积的硫酸溶液中提取，硫酸溶液的浓度为0.6mol/L，提取温度为45℃，提取时间为2.4h，提取完成后，于25℃温度下离心15min，离心转速为6000r/min；提取物置于其4倍体积的无水乙醇中沉淀，沉淀温度4℃，沉淀时间12h，沉淀完成后，在8000r/min转速下离心20min；第二沉淀物吹风晾干后再冻干。
[0006]优选地，葡聚糖凝胶层析为：将Sephadex G
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50和纯水按质量比1：10混合，置于20℃溶胀3h，再于90℃溶胀1h，用水洗涤2
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3次后倒掉上清液，配成75%的溶液后装柱，使凝胶自然沉降；将检测波长调至215nm，流速为1mL/min，柱压小于1MPa；用pH5.4、25mmol/L的乙酸
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乙酸钠缓冲液平衡层析柱2
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3个柱体积，待基线平稳后，将浓度为1mg/mL的鱼精蛋白粗品溶液用0.45μm微孔滤膜过滤后上样，进样量为mL/次；每管收集4mL，取各紫外检测峰进行坂口反应，合并相同组分，浓缩冻干存于
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80℃备用。
[0007]优选地，离子交换层析为：以羧甲基为带电基团的琼脂糖凝胶作为填料，加适量蒸馏水洗涤3
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4次，除去填料上附着的乙醇，pH8.0、50 mmol/L的甘氨酸
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氢氧化钠缓冲液洗涤3次后装入层析柱；选择波长215nm，灵敏度0.5A，恒流泵流速为3mL/min，用50mmol/L甘氨酸
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氢氧化钠缓冲液平衡层析柱2
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3个柱体积，基线平稳后，将葡聚糖凝胶层析后的鱼精蛋白粗品溶液上样，浓度为20mg/mL，进样量为5 mL/次，流速为5mL/min洗脱3个柱体积，然后用含有0.2
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1.8 mol/L NaCl的甘氨酸
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氢氧化钠缓冲液梯度洗脱10个柱体积，设定2 min/管自动收集，坂口反应鉴定后合并相同组分。
[0008]优选地，脱盐层析为：将Sephadex G
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25 Fine和纯水按质量比1：10混合，置于20℃溶胀3h，再于90℃溶胀1h，用水洗涤2
‑
3次后倒掉上清液，配成75%的溶液后装柱，使凝胶自然沉降；设定检测波长215nm，流速5mL/min，甘氨酸
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氢氧化钠缓冲液平衡5个柱体积，基线平稳后，将离子交换层析后的鱼精蛋白粗品溶液上样，其浓度为1mg/mL，上样量10mL/次，流速为10mL/min，超纯水洗脱3个柱体积，设定3min/管自动收样，当电导率超过1mS/mc时停止收集，将收集到的脱盐液冻干，即鱼精蛋白纯品。
[0009]优选地，菊黄东方鲀精巢干制品的制备方法为将菊黄东方鲀精巢上附着的脂肪、腺体、粘膜和结缔组织剔除，用纯水清洗表面后沥干，再于
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20℃冻藏备用。
[0010]本专利技术还公开了上述菊黄东方鲀鱼精蛋白的提取方法得到的鱼精蛋白纯品在保鲜剂中的运用，且该保鲜剂用于河鲀加工产品。
[0011]优选地，保鲜剂中鱼精蛋白纯品的浓度不小于2.5mg/mL。
[0012]优选地，保鲜剂中还包括壳聚糖，且壳聚糖和鱼精蛋白纯品的质量比为1：8
‑
15。
[0013]本专利技术具有以下有益效果：本专利技术能够有效地从菊黄东方鲀的精巢中提取得到鱼精蛋白纯品，该鱼精蛋白纯品为三鱼精蛋白，具有较强的耐热性和抑菌作用，将其应用于冷藏河鲀鱼肉的保鲜剂，保鲜效果好且天然无公害。
附图说明
[0014]图1为菊黄东方鲀鱼精蛋白SDS
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PAGE电泳图谱。
[0015]图2为菊黄东方鲀鱼精蛋白相对分子质量标准曲线。
[0016]图3为菊黄东方鲀鱼精蛋白红外光谱图。
[0017]图4为菊黄东方鲀鱼精蛋白DSC吸热峰图。
[0018]图5为鱼精蛋白抑菌圈图（金黄色葡萄球菌）。
[0019]图6为鱼精蛋白抑菌圈图（铜绿假单胞菌）。
[0020]图7为鱼精蛋白抑菌圈图（大肠杆菌）。
[0021]图8为菊黄东方鲀鱼精蛋白对金黄色葡萄球菌生长曲线的影响图。
[0022]图9为菊黄东方鲀鱼精蛋白对大肠杆菌生长曲线的影响图。
[0023]图10为鱼精蛋白复配保鲜剂对暗纹东方鲀冷藏过程pH值的影响图。
[0024]图11为鱼精蛋白复配保鲜剂对暗纹东方鲀冷藏过程TVC值的影响图。
[0025]图12为鱼精蛋白复配保鲜剂对暗纹东方鲀冷藏过程TVB
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N值的影响图。
具体实施方式
[0026]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。
[0027]本专利技术公开了一种菊黄东方鲀鱼精蛋白的提取方法，其包括以下步骤：预处理：将菊黄东方鲀精巢上附着的脂肪、腺体、粘膜和结缔组织等剔除，用纯水清洗表面后沥干，再于
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20℃冻藏，得到菊黄东方鲀精巢干制品。
[0028]粗品提取：将菊黄东方鲀精巢干制品与NaCl溶液混合，NaCl溶液的浓度为0.14mol/L，菊黄东方鲀精巢干制品与NaCl溶液的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种菊黄东方鲀鱼精蛋白的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：粗品提取：将菊黄东方鲀精巢干制品与NaCl溶液混匀，经离心后弃上清液，得到第一沉淀物；将第一沉淀物置于硫酸溶液静置提取，再经离心后取上清液，得到提取物；将提取物置于无水乙醇中沉淀，再经离心后弃上清液得第二沉淀物，第二沉淀物冻干后得鱼精蛋白粗品；粗品提纯：对鱼精蛋白粗品依次进行葡聚糖凝胶层析、离子交换层析和脱盐层析，得到鱼精蛋白纯品。2.如权利要求1所述的菊黄东方鲀鱼精蛋白的提取方法，其特征在于：粗品提取步骤中，NaCl溶液的浓度为0.14mol/L，菊黄东方鲀精巢干制品与NaCl溶液的料液比为1：10，菊黄东方鲀精巢干制品与NaCl溶液混合后磁力搅拌30min，于25℃温度下离心20min，离心转速为10000r/min；第一沉淀物置于其4倍体积的硫酸溶液中提取，硫酸溶液的浓度为0.6mol/L，提取温度为45℃，提取时间为2.4h，提取完成后，于25℃温度下离心15min，离心转速为6000r/min；提取物置于其4倍体积的无水乙醇中沉淀，沉淀温度4℃，沉淀时间12h，沉淀完成后，在8000r/min转速下离心20min；第二沉淀物吹风晾干后再冻干。3.如权利要求1所述的菊黄东方鲀鱼精蛋白的提取方法，其特征在于：葡聚糖凝胶层析为：将Sephadex G
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50和纯水按质量比1：10混合，置于20℃溶胀3h，再于90℃溶胀1h，用水洗涤2
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3次后倒掉上清液，配成75%的溶液后装柱，使凝胶自然沉降；将检测波长调至215nm，流速为1mL/min，柱压小于1MPa；用pH5.4、25mmol/L的乙酸
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乙酸钠缓冲液平衡层析柱2
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3个柱体积，待基线平稳后，将浓度为1 mg/mL的鱼精蛋白粗品溶液用0.45μm微孔滤膜过滤后上样，进样量为mL/次；每管收集4mL，取各紫外检测峰进行坂口反应，合并相同组分，浓缩冻干存于
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80℃备用。4.如权利要求1所述的菊黄东方鲀鱼精蛋白的提取方法，其特征在于：离子交换层析为：以羧甲基为带电基团的琼脂糖凝胶作为填料，加适量蒸馏水洗涤3
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4次，除去填...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘淑集，刘智禹，苏永昌，张越，乔琨，陈贝，陈晓婷，
申请(专利权)人：福建省水产研究所福建水产病害防治中心，
类型：发明
国别省市：