一种肺动脉平滑肌肉瘤细胞系及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种肺动脉平滑肌肉瘤细胞系及其制备方法和应用，所述肺动脉平滑肌肉瘤细胞系命名为PAS

【技术实现步骤摘要】
一种肺动脉平滑肌肉瘤细胞系及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于细胞系领域，具体涉及一种平滑肌肉瘤细胞系PAS
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01及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]肺动脉肉瘤(PAS)是一类罕见的肺动脉间充质细胞来源的原发性肉瘤，约占所有原发性心血管系统肿瘤的15％。到目前为止，医学文献中仅描述了约400例原发性肺动脉肉瘤，大多数文献为病例报告。由于肺动脉肉瘤的临床表现缺乏特异性，多表现为呼吸困难、胸痛、咯血等，且影像学表现为肺动脉内肿物，因此常被误诊为肺动脉内血栓性疾病，导致治疗时机的延误。肉瘤恶性程度高，预后极差，无手术治疗生存时间仅1.5月。
[0003]肺动脉肉瘤目前被认为起源于多能间充质细胞，根据世界卫生组织肿瘤分类，共分为内膜和壁内两种类型，其中腔内息肉样生长的内膜肉瘤较沿大静脉内侧平滑肌发展的壁内肉瘤多见。目前已有报道的组织学分型包括平滑肌肉瘤、梭形细胞瘤、纤维组织细胞瘤、血管肉瘤、粘液肉瘤、肌纤维母细胞肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、多形性肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤、未分化肉瘤，其中平滑肌肉瘤较多，可能与其来源于血管相关。而组织分型与年龄无明显的统计学相关性，但脂肪肉瘤似乎在老年患者中多见，肌纤维细胞增生异常则多见于较年轻的患者。
[0004]肺动脉肉瘤尚无理想的治疗方案，目前认为，手术对肺动脉肉瘤的预后有一定的改善。手术分为完全切除术、病灶切除术、肺动脉内膜剥脱术，术式的选择主要取决于肿瘤的位置以及转移的情况。大部分研究证实完全切除术对生存率的改善更高。但PAS多为双侧疾病，尤其是已经存在肺动脉高压情况下，极有可能已经双侧扩散，单侧肺切除术可能收效甚微。而此时可以选择姑息性肺动脉内膜切除术，恢复肺动脉血流，保证足够的氧合并减轻肺动脉高压情况。对于无法根除肿瘤的患者来说，相较其他外科术式，接受姑息性肺动脉内膜切除术的患者有更好的生存趋势。
[0005]有研究表明，对于部分无手术机会或术后复发的患者，化疗可以一定程度缓解症状并提供一个长期生存的机会。目前被报道使用于PAS的化疗药物包括蒽环类如阿霉素、表柔比星；烷基化剂如环磷酰胺、异环磷酰胺，个别病例中使用了长春新碱、紫杉醇、白介素
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2、丝裂霉素、甲氨蝶呤、吉西他滨、依托泊苷、舒尼替尼、长春瑞宾、安罗替尼，其中阿霉素+异环磷酰胺较常被选择，且被证明对生存时间有改善作用。
[0006]目前，作为罕见疾病，肺动脉肉瘤尚无国际公认的治疗方案，化疗方案仍在摸索之中，因此构建一个合理且有效的肿瘤模型至关重要。
[0007]细胞系(cell line)指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。尤其是经过40
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50次分裂的渡过第二次死亡危机的细胞，称之为细胞系。因原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易再传下去，细胞的生长就会出现停滞，大部分细胞衰老死亡。但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去，这些存活的细胞一般能够传到40
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50代，这种传代细胞叫做细胞株。细胞株的遗传物质没有发生改变。当细胞传至50代以后又会出
现“危机”，不能再传下去。但是有部分细胞的遗传物质发生了改变，并且带有癌变的特点，有可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称为细胞系。
[0008]能无限增殖和稳定传代的细胞系能为肺动脉平滑肌肉瘤的研究提供稳定的性状和充足的原材料，目前肺动脉平滑肌肉瘤尚无可购买的细胞系，在国内外能购买到的平滑肌细胞系较少，SK
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UT1、SK
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LMS
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1。因此，为了肺动脉平滑肌肉瘤细胞相关的研究，本领域需要提供更多种新的细胞系以及其制备方法和应用。

技术实现思路

[0009]本专利技术要解决的技术问题就是针对现有的人平滑肌肉瘤细胞系生物多样性低，肺动脉肉瘤细胞系缺乏，提供一种新的人肺动脉平滑肌肉瘤细胞系及其建立方法和应用。
[0010]本专利技术提供一种肺动脉肉瘤细胞系，所述的细胞系命名为PAS
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01，2021年10月13日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏号为NO.23039。
[0011]本专利技术还提供一种如上所述肺动脉平滑肌肉瘤细胞系PAS
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01的子代细胞系。
[0012]本专利技术还提供一种上述肺动脉平滑肌肉瘤细胞系PAS
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01的制备方法，所述肺动脉肉瘤细胞系的制备方法包括原代培养和传代培养。
[0013]原代培养是通过组织块直接长出单层细胞或用酶或机械方法将组织分散成单个细胞开始培养，在首次传代前的培养可认为是原代培养。原代培养最大的优点是，组织和细胞刚刚离体，生物性状尚未发生很大变化，在一定程度上能反映体内状态。而传代培养的定义为：原代培养形成的单层细胞汇合以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生成空间不足或由于细胞密度过大引起营养枯竭，都将影响细胞的生长，这一程序常称为传代或传代培养。通常，传代培养是指扩大培养，也就是将一份细胞一分为二或者一分为三进行培养等。但严格说来，不论稀释与否，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代或传代培养。可以理解，在任何时候，细胞从一个瓶子接种到另一个瓶子时总会丢失一部分，因此，在客观上细胞必定有所稀释。
[0014]其中，所述原代培养为贴壁培养或酶消化法培养。本专利技术中，酶消化法包括加入消化酶使得组织溶解而释放细胞。所述酶消化法培养均为本领域技术人员可知的操作。
[0015]所述原代培养包括如下步骤：
[0016]1)将获得新鲜的临床人肺动脉肉瘤患者切除肺动脉内膜标本置于I型胶原酶中切成组织块，消化后离心，弃上清，得到肿瘤组织块；
[0017]2)取肿瘤组织块贴壁于细胞培养皿中贴壁培养，肿瘤组织块中陆续爬出肿瘤细胞。
[0018]具体来说，所述原代培养为酶消化后贴壁培养，具体方法包括将获得新鲜的临床人肺动脉肉瘤患者切除肺动脉内膜标本置于2.5mg/ml I型胶原酶(含有胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶及胰蛋白酶活性)中切成2
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4mm3的组织块，37℃，5％CO2消化30分钟，1000rpm离心10min，弃上清，取组织块贴壁于细胞培养皿皿底培养，贴壁培养5
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8天，肿瘤组织块中陆续爬出肿瘤细胞，随后对原代培养的肿瘤细胞进行传代培养。
[0019]所述传代培养包括如下步骤：
[0020]1)弃去进行原代培养的步骤2中培养皿中的培养液，使用PBS清洗贴壁细胞，向培养瓶中加入胰蛋白酶，待细胞形态变圆后弃去胰蛋白酶，加入培养基震荡使细胞脱离瓶壁
形成细胞悬液；
[0021]2)浆细胞悬液重新接种于新的培养瓶继续培养；每次待细胞长至整个培养瓶80％以上时则分瓶进行传代培养，每瓶细胞在进行传代培养时将该代肿瘤细胞分成2
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4瓶，在这些新的培养瓶中继续培养其子代肿瘤细胞，得到肺动脉肉瘤细胞系。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肺动脉肉瘤细胞系，其特征在于，所述的细胞系命名为PAS
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01，2021年10月13日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏号为NO.23039。2.根据权利要求1所述的肺动脉肉瘤细胞系，其特征在于，所述肺动脉肉瘤细胞系的制备方法包括原代培养和传代培养。3.根据权利要求1所述的肺动脉肉瘤细胞系，其特征在于，所述原代培养为贴壁培养或酶消化法培养。4.根据权利要求1所述的肺动脉肉瘤细胞系，其特征在于，所述原代培养包括如下步骤：1)将获得新鲜的临床人肺动脉肉瘤患者切除肺动脉内膜标本置于I型胶原酶中切成组织块，消化后离心，弃上清，得到肿瘤组织块；2)取肿瘤组织块贴壁于细胞培养皿中贴壁培养，肿瘤组织块中陆续爬出肿瘤细胞。5.根据权利要求4所述的肺动脉肉瘤细胞系，其特征在于，所述传代培养包括如下步骤：1)弃去进行原代培养的步骤2中培养皿中的培养液，使用PBS清洗贴壁细胞，向培养瓶中加入胰蛋白酶，待细胞形态变圆后弃去胰蛋白酶，加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨媛华，李积凤，刘琳，缪冉，刘岩，顾松，杨苏乔，龚娟妮，邝土光，毛建军，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京朝阳医院，
类型：发明
国别省市：