一种目的蛋白的表达载体、表达目的蛋白的方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种目的蛋白的表达载体，包括重组载体pXJ40

【技术实现步骤摘要】
一种目的蛋白的表达载体、表达目的蛋白的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种目的蛋白的表达载体、表达目的蛋白的方法。

技术介绍

[0002]目前现有的哺乳动物表达载体表达效率低下，对于一些较大的病毒结构蛋白，如IBV的结构蛋白S的表达是根本检测不到的，导致抗原稳定性差、效力低、保护性欠佳等问题。
[0003]本案解决的技术问题在于：如何高效表达目的蛋白。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种目的蛋白的表达载体。
[0005]本专利技术提供了三套载体，其具体的设计思路为：
[0006]通过构建利用HIV
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1病毒的RNA序列TAR和其转录激活因子TAT，以及猴病毒SV40Ori构建的哺乳动物细胞高效表达载体在真核细胞中表达病毒蛋白的方法，有助于抗原的高效表达，进而开发预防病毒感染的有效疫苗。
[0007]更为具体来说，TAR、TAT与目的蛋白位于同一套载体上时，加入内部核糖体进入位点序列(IRES)，使IRES与TAT相连。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种目的蛋白的表达载体，其特征在于，包括重组载体pXJ40
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TAT和重组载体pXJ40
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TAR；所述重组载体pXJ40
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TAT的制备方法为：将转录激活因子TAT构建至去掉T7启动子的pXJ40载体，得到重组载体pXJ40
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TAT；所述重组载体pXJ40
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TAR的制备方法为：将目的蛋白的cDNA序列构建至含有TAR片段并去掉T7启动子的pXJ40载体，得到重组载体pXJ40
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TAR；去掉T7启动子的pXJ40载体的序列如SEQ ID NO.1所示；所述转录激活因子TAT的序列如SEQ ID NO.2所示；所述TAR片段的序列如SEQ ID NO.3所示。2.根据权利要求1所述的目的蛋白的表达载体，其特征在于，所述去掉T7启动子的pXJ40载体的制备方法为：以pXJ40载体为模板，通过引物noT7
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CloF1和noT7
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CloR1扩增，得到片段A；以pXJ40载体为模板，通过引物noT7
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CloF2和noT7
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CloR2扩增，得到片段B；通过同源重组酶将片段A和片段B进行同源重组连接，得到去掉T7启动子的pXJ40载体；所述引物noT7
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CloF1的序列如SEQ ID NO.6所示；所述引物noT7
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CloR1的序列如SEQ ID NO.7所示；所述引物noT7
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CloF2的序列如SEQ ID NO.8所示；所述引物noT7
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CloR2的序列如SEQ ID NO.9所示。3.根据权利要求1所述的目的蛋白的表达载体，其特征在于，所述重组载体pXJ40
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TAT的制备方法具体为：通过引物TAT
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CloF和TAT
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CloR扩增转录激活因子TAT片段，得到片段C；通过BamHI和HindIII双酶切，将去掉T7启动子的pXJ40载体切成线性片段，得到片段D；通过同源重组酶将片段C和片段D进行同源重组连接，得到重组载体pXJ40
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TAT；所述引物TAT
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CloF的序列如SEQ ID NO.10所示；所述引物TAT
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CloR的序列如SEQ ID NO.11所示。4.根据权利要求1所述的目的蛋白的表达载体，其特征在于，所述重组载体pXJ40
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TAR的制备方法具体为：以去掉T7启动子的pXJ40载体为模板，通过引物TAR
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CloF1和TAR
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CloR1扩增，得到片段E；以去掉T7启动子的pXJ40载体载体为模板，通过引物TAR
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CloF2和TAR

【专利技术属性】
技术研发人员：刘定祥，刘思颖，
申请(专利权)人：岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心，
类型：发明
国别省市：