免疫原性冠状病毒融合蛋白及相关方法技术

本发明专利技术提供了融合蛋白，其包含冠状病毒(例如SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫原性冠状病毒融合蛋白及相关方法

技术介绍

[0001]冠状病毒(CoV)是一大类病毒，其可引起人类疾病，从普通感冒到更严重的疾病，诸如中东呼吸综合症(MERS)和严重急性呼吸综合症(SARS)。冠状病毒是人畜共患的，这意味着它们可以在动物和人类之间传播。冠状病毒是大的、有包膜的单链RNA病毒，在病毒体周围有特征性冠或冠状物，这是由于病毒颗粒的表面被良好分离的花瓣状糖蛋白“刺突”所覆盖，该刺突的直径为80
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160nm，从病毒突出。刺突糖蛋白是位于病毒颗粒外包膜上的I类病毒融合蛋白。刺突蛋白通过与宿主细胞受体相互作用，在病毒感染中发挥重要作用。
[0002]严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS
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CoV
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2)是可引起所谓的2019年冠状病毒疾病(COVID
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19)，一种呼吸道疾病的冠状病毒毒株。SARS
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CoV
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2已在全球蔓延并已导致超过1600万COVID
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19病例和超过60万人死亡。SARS
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CoV
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2可经由核内体或质膜融合进入真核细胞。在这两种途径中，病毒颗粒表面的刺突与膜结合蛋白血管紧张素转换酶2(ACE2)结合，并介导对宿主细胞膜的附着和进入宿主细胞。SARS
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CoV
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2具有高度传染性，并且主要通过密切接触和呼吸道飞沫在人与人之间传播。SARS
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CoV
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2的长期控制将需要可在全球范围内广泛使用的有效疫苗。

技术实现思路

[0003]本文件中使用的术语“专利技术”、“该专利技术”、“这个专利技术”和“本专利技术”旨在广泛地指代本专利申请的所有主题和下文权利要求。包含这些术语的陈述应理解为不限制本文描述的主题或限制下文专利权利要求的含义或范围。本专利技术涵盖的实施方案由权利要求书而不是本
技术实现思路
限定。该
技术实现思路
是本专利技术各个方面的高度概述，并介绍了本专利技术文献和附图中描述和说明的一些概念。本
技术实现思路
不旨在识别关键或必要的受权利要求保护的主题的特征，也不旨在单独使用其来确定受权利要求保护的主题的范围。应通过参考整个说明书的适当部分、任何或所有附图和每项权利要求来理解该主题。下面讨论本专利技术的一些示例性实施方案。
[0004]在本专利技术的实施方案中包括并在本公开中描述的是冠状病毒刺突蛋白的人工修饰氨基酸序列与铁蛋白亚基多肽的氨基酸序列的融合蛋白。在一些示例性实施方案中，该刺突蛋白的人工修饰氨基酸序列是刺突蛋白的胞外域的人工修饰氨基酸序列，其与SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15具有至少90％的序列同一性。在一些示例性实施方案中，冠状病毒是SARS
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CoV
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2。在一些示例性实施方案中，冠状病毒刺突蛋白的人工修饰氨基酸序列包含至少七肽重复序列2(HR2)的氨基酸序列的C端缺失。在一些示例性实施方案中，冠状病毒刺突蛋白的人工修饰氨基酸序列包含去除弗林蛋白酶识别位点的突变。在一些示例性实施方案中，冠状病毒的刺突蛋白的人工修饰氨基酸序列包含使刺突蛋白稳定在融合前的构象的一个或多个突变。铁蛋白亚基多肽可以为幽门螺杆菌铁蛋白亚基多肽。在一些示例性实施方案中，铁蛋白亚基多肽的氨基酸序列是与SEQ ID NO：2具有至少90％序列同一性的序列。在一些示例性实施方案中，铁蛋白亚基多肽含有一个或多个(即至少一个)人工糖基化位点。一些示例性实施方案中，冠状病毒刺突蛋白的人工修饰氨基酸
序列通过接头氨基酸序列连接至铁蛋白亚基多肽的氨基酸序列。在一些示例性实施方案中，融合蛋白的氨基酸序列是与下列具有至少90％序列同一性的序列：SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34。
[0005]还包括在本专利技术实施方案中并且在本公开中描述的是纳米颗粒，其包含根据本专利技术实施方案的融合蛋白的低聚体。根据本专利技术的实施方案的纳米颗粒包含冠状病毒刺突蛋白的胞外域的表面暴露三聚体。在一些示例性实施方案中，每个纳米颗粒包含冠状病毒刺突蛋白胞外域的表面暴露三聚体中的八个。还包括在本专利技术实施方案中并且在本公开中描述的是核酸，其编码根据本专利技术实施方案的融合蛋白。根据本专利技术实施方案的核酸可以是DNA或RNA。还包括在本专利技术实施方案中并且在本公开中描述的是载体，其包含根据本专利技术实施方案的核酸。还包括在本专利技术实施方案中并且在本公开中描述的是细胞，其包含根据本专利技术实施方案的核酸或根据本专利技术实施方案的载体。还包括在本专利技术实施方案中并且在本公开中描述的是制备根据本专利技术实施方案的融合蛋白的方法。制备融合蛋白的方法可包括以下步骤：将根据本专利技术实施方案的核酸或根据本专利技术实施方案的载体引入到细胞中；在允许融合蛋白表达的条件下温育该细胞；并且，分离该融合蛋白。还包括在本专利技术实施方案中并且在本公开中描述的是根据本专利技术实施方案的制备纳米颗粒的方法。制备纳米颗粒的方法可包括以下步骤：将根据本专利技术实施方案的核酸或根据本专利技术实施方案的载体引入到细胞中；在允许根据本专利技术实施方案的融合蛋白的表达和纳米颗粒的自组装的条件下温育该细胞；并且，分离该纳米颗粒。
[0006]还包括在本专利技术实施方案中并且在本公开中描述的是免疫原性组合物，其包含根据本专利技术实施方案的融合蛋白、根据本专利技术实施方案的纳米颗粒、根据本专利技术实施方案的核酸、或根据本专利技术实施方案的载体。在一些示例性实施方案中，该免疫原性组合物包含根据本专利技术实施方案的两种或更多种不同的融合蛋白、根据本专利技术实施方案的两种或更多种不同的纳米颗粒、根据本专利技术实施方案的两种或更多种不同的核酸、根据本专利技术实施方案的两种或更多种不同的载体。该免疫原性组合物还可包含一种或多种佐剂(即至少一种)，其可包含明矾。在一些示例性实施方案中，该免疫原性组合物被冻干。还包括在本专利技术实施方案中并且在本公开中描述的是试剂盒，其包含根据本专利技术的一个或多个实施方案的免疫原性组合物，以及下列中的一种或多种：用于施用免疫原性组合物的装置，以及赋形剂。
[0007]还包括在本专利技术实施方案中并且在本公开中描述的是诱导受试者的免疫反应的方法，该方法包括向受试者施用根据本专利技术实施方案的免疫原性组合物的步骤。在此类方法中，可以以能够在受试者中引发针对冠状病毒的保护性免疫反应的量施用免疫原性组合物。免疫反应可包括在受试者中产生针对冠状病毒的中和抗体。在根据本专利技术实施方案的诱导受试者的免疫反应的方法中，该受试者可以是人。
附图说明
[0008]本公开包括以下附图。附图旨在说明组本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种冠状病毒刺突蛋白的人工修饰氨基酸序列与铁蛋白亚基多肽的氨基酸序列的融合蛋白，其中所述刺突蛋白的人工修饰氨基酸序列与SEQ IDNO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：15具有至少90％的序列同一性。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述冠状病毒是SARS
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2。3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述冠状病毒刺突蛋白的人工修饰氨基酸序列包含至少七肽重复序列2(HR2)的氨基酸序列的C端缺失。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的融合蛋白，其中所述冠状病毒刺突蛋白的人工修饰氨基酸序列包含去除弗林蛋白酶识别位点的突变。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的融合蛋白，其中所述冠状病毒刺突蛋白的人工修饰氨基酸序列包含使所述刺突蛋白稳定在融合前构象的一个或多个突变。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白亚基多肽为幽门螺杆菌铁蛋白亚基多肽。7.根据权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白亚基多肽的氨基酸序列是与SEQ ID NO：2具有至少90％序列同一性的序列。8.根据权利要求1至7中任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白亚基多肽含有一个或多个人工糖基化位点。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的融合蛋白，其中所述冠状病毒刺突蛋白的人工修饰氨基酸序列通过接头氨基酸序列与所述铁蛋白亚基多肽的氨基酸序列连接。10.根据权利要求1至9中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白的氨基酸序列是与下列具有至少90％序列同一性的序列：SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ IDNO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34。11.一种纳米颗粒，其包含权利要求1
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10中任一项所述的融合蛋白的低聚体。12.根据权利要求11所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒包含所...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿比盖尔，
申请(专利权)人：斯坦福大学托管董事会，
类型：发明
国别省市：