sBCMA变体及其Fc融合蛋白制造技术

本发明专利技术涉及新型sBCMA变体和sBCMA变体

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】sBCMA变体及其Fc融合蛋白
[0001]序列表
[0002]本申请包含序列表，其已经以ASCII格式电子提交并且特此通过提及而以其整体合并。创建于2020年8月11日的所述ASCII复本被命名为121076
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5004
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PR_ST25.txt并且大小为60.0千字节。
I.专利

[0003]本专利技术涉及可溶性B
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细胞成熟抗原(sBCMA)变体和sBCMA变体
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Fc融合蛋白，编码所述sBCMA变体和/或sBCMA变体
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Fc融合蛋白的多核苷酸，制备所述sBCMA变体和/或sBCMA变体
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Fc融合蛋白的方法，和使用包含所述sBCMA变体和/或sBCMA变体
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Fc融合蛋白的组合物的方法，例如在治疗疾病例如肿瘤/癌症、免疫调节病症、纤维变性等中。
[0004]II.专利技术背景
[0005]肿瘤坏死因子(“TNF”)家族由被称为TNF家族配体和TNF家族受体的配体和其特异性受体对组成(Bazzoni等人,N.Engl.J.Med.1996、334(26):1717)。所述家族牵涉免疫系统和可能地其他非免疫系统的调节。TNF家族信号传导的调节可以导致大量的随后事件。TNF可以起始生物对于外来侵入的一般性保护性炎症反应，其包括经改变的在细胞运输中所牵涉的粘着分子的展示，趋化因子产生以驱动特定细胞到特定区室中，以及各种效应细胞的引发。因此，这些途径的调节具有临床潜力(US 9,650,430 B2)。
[0006]B
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细胞成熟抗原(BCMA)是肿瘤坏死因子受体家族的一个成员。在图7中显示了BCMA的细胞外结构域的氨基酸序列。例如，BCMA为关于增殖诱导配体(APRIL)和TNF家族的B
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细胞激活因子(BAFF)的受体。抗
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BCMA抗体(包括抗体药物缀合物(ADC))在早期测试中已显示出在治疗癌症中的初步成功，因为具有BCMA双特异性T细胞参与性抗体和使用BCMA的CAR
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T构建体。
[0007]以前在WO 99 12965和US 7,276,241 B2(其通过提及而合并入本文)中描述了APRIL。在图7中显示了APRIL的细胞外结构域的氨基酸序列。APRIL表达和功能研究暗示，该蛋白质被肿瘤细胞利用来诱导快速增殖。另外，APRIL可以在其他疾病场景中起作用，例如在细胞增殖性疾病例如与一些自身免疫疾病(例如，狼疮)相关联地发生的那些中，或者在其中细胞群体快速扩展的炎性疾病(例如，细菌性脓毒症)中(US 7,276,241B2)。
[0008]以前在WO/0012964和US 9,650,430 B2(其通过提及而合并入本文)中描述了BAFF。在图7中显示了BAFF的细胞外结构域的氨基酸序列。BAFF是对于B细胞的细胞存活和成熟因子，并且BAFF的过产生与全身性自身免疫疾病相关联。在人中，在一定比例的具有自身免疫风湿性疾病(特别是系统性红斑狼疮和舍格伦综合征)的患者的血液中可检测到高水平的BAFF(Groom等人,J.Clin.Invest.,2002,109:59；Zhang等人,J.Immunol.,2001,166:6；Cheema等人,Arthritis Rheum.2001,44:1313，其全部通过提及而合并入本文)。BAFF也是对于T细胞的一种有效共刺激剂，并且该共刺激完全通过BAFF
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R而发生(Ng等人,J.Immunol.,2004,173:807，其通过提及而合并入本文)。
[0009]跨膜激活物和CAML互作物(TACI)(也称为肿瘤坏死因子受体超家族成员13B
(TNFRSF13B))是III型跨膜蛋白。几种蛋白质(BAFF/BLys、APRIL、黏结蛋白聚糖
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2)已被鉴定为TACI配体。TACI与其配体的相互作用诱导转录因子NFAT、AP1和NF
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κB的激活，并且通过调节B细胞增殖和存活而在体液免疫中发挥至关重要的作用。B细胞的TACI激活导致其分化和成熟，包括抗体同种型转换，和T细胞非依赖性抗体产生(Chinen等人,J Allergy Clin Immunol.2011,127(6):1579，其通过提及而合并入本文)。
[0010]APRIL和BAFF可以与受体例如BCMA、BAFF
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受体(BAFFR)和TACI相结合，并且因此中和APRIL和/或BAFF可以用于治疗疾病，例如由于改变的通过BCMA、BAFFR和/或TACI的信号传导途径而引起的癌症、自身免疫疾病和纤维变性。
[0011]用于癌症、免疫调节病症和纤维变性病症的当前治疗对于许多疾病类型来说是不适当的，这归因于差的效力、低的对于存活的影响、引起严重副作用的毒性或其组合。因此，存在鉴定和开发另外的用于治疗癌症和/或免疫调节病症的方法的需要，所述方法可以提供效力而不诱导严重的副作用。本专利技术满足了这个和其他的需要。
[0012]本专利技术的目标是提供具有经改善的特性(例如，增加的对于APRIL和/或BAFF的结合亲和力，等等)的sBCMA变体或sBCMA变体
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Fc融合蛋白，以及制备此类sBCMA变体和/或其Fc融合蛋白和在治疗具有癌症和/或免疫调节病症的患者中使用此类sBCMA变体和/或其Fc融合蛋白的方法。
[0013]III.专利技术概述
[0014]本专利技术尤其提供了sBCMA变体和其Fc融合蛋白，编码所述sBCMA变体和/或其Fc融合蛋白的多核苷酸，制备所述sBCMA变体和/或其Fc融合蛋白的方法，和使用所述sBCMA变体和/或其Fc融合蛋白(特别是用于治疗疾病例如癌症或免疫调节病症)的方法。在一些实施方案中，所述sBCMA变体用于治疗癌症或免疫调节应用。在一些实施方案中，所述sBCMA变体
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Fc融合蛋白用于治疗癌症或免疫调节应用。
[0015]在一个方面，本专利技术提供了组合物，其包含相比于SEQ ID NO:1而言包含至少一个氨基酸置换的变体可溶性B
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细胞成熟抗原(sBCMA)，其中所述氨基酸置换在从由下列各项组成的组中选择的位置编号处：1、2、3、4、5、6、7、9、10、11、12、14、16、19、20、22、23、25、26、29、31、32、35、36、38、39、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53和54，其中所述编号是按照EU索引的。
[0016]在一个另外的方面，本专利技术提供了在本文中所描述的组合物，其中所述变体sBCMA与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性。
[0017]在一个进一步的方面，本专利技术提供了在本文中所描述的组合物，其中所述氨基酸置换出现在所述位置中的一个，所述位置中的二个，所述位置中的三个，所述位置中的四个本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.组合物，其包含相比于SEQ ID NO:1而言包含至少一个氨基酸置换的变体可溶性B
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细胞成熟抗原(sBCMA)，其中所述氨基酸置换在从由下列各项组成的组中选择的位置编号处：1、2、3、4、5、6、7、9、10、11、12、14、16、19、20、22、23、25、26、29、31、32、35、36、38、39、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53和54，其中所述编号是按照EU索引的。2.根据权利要求1的组合物，其中所述变体sBCMA与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性。3.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述氨基酸置换出现在所述位置中的一个，所述位置中的二个，所述位置中的三个，所述位置中的四个，所述位置中的五个，所述位置中的六个，所述位置中的七个，所述位置中的八个，或所述位置中的九个处。4.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述氨基酸置换选自由下列各项组成的组：M1A、M1C、M1I、M1R、M1T、M1V、L2C、L2S、Q3P、Q3R、M4E、M4I、M4T、M4V、A5T、G6E、Q7R、S9A、S9F、S9P、Q10H、Q10P、Q10R、N11D、N11S、E12K、F14L、S16G、S16N、S16R、H19L、H19Y、A20V、A20T、I22M、I22V、P23S、Q25R、L26F、S29A、N31D、N31S、T32A、T32I、T32P、L35S、L35P、T36A、T36I、T36P、Q38R、R39H、N42D、N42R、N42S、A43T、A43V、S44D、S44G、S44N、S44R、V45A、V45M、T46A、T46I、N47D、N47K、N47R、N47S、S48L、S48P、S48T、V49A、V49M、K50E、K50G、K50R、K50T、G51E、T52A、T52M、N53D、N53K、N53S、A54V和A54T。5.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述氨基酸置换选自由下列各项组成的组：M1V、L2S、Q3P、M4T、S9P、N11D、S16G、H19Y、N31S、N31D、T32I、T36A、R39H、N47S、K50E和N53E。6.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述氨基酸置换选自由下列各项组成的组：S16G、H19Y和T36A。7.根据权利要求1
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4中任一项的组合物，其中所述氨基酸置换选自由下列各项组成的组：L2S/S9P/E12K/N31D/T36A/N42S/N53S、M1V/T32P/T36A/T46I/N53D/A54V、Q3R/S16N/T36A/A43T、F14L/S16G/T36A/V45A/N47D、M1T/M4V/S9F/S16G/T32A/Q38R、M1A/S9A/Q38R、G6E/Q25R/Q38R、M1V/M4I/G6E/S9P/N11D/V49M/T52M/A54V、N11D/S16G/N31S、N11D/H19Y/I22M/T32P/N47S/N53S、G6E/Q7R/H19Y/L35S、H19Y/N42D/S48P/T52A、M1V/N31D/T32I/T36A、M1V/A5T/H19L/T36A、M1T/N31D/T32A/T36A/Q38R/S44D/V49A/K50E、M1V/T36A/Q38R/A43V、M1V/L2S/S9P/Q10H/T36A/Q38R/K50G、T36A/Q38R/N53S、M1T/L2S/L35P/T36A/Q38R/T46A/K50R、A5T/A20V/T36A/Q38R、M1T/S16G/I22V/T36A/S44G/T46A/V49A、S16G/T36A、M1I/N11D/S16G/I22M/S29A/T36A/S44G/K50R、M1C/L2C/Q3R/M4E/N11D/S16G/T36P、M1I/N11D/S16G/I22M/S29A/T36A/S44G/K50R、N11D/N31D/T32I/T36A/S44N/N47D/N53D、M1R/L2C/Q3R、H19Y/T36A/S44G、H19Y/T32I/T36A/V49A、H19Y/N31S/T36A/V45A、H19Y/N31S/T36A、H19Y/T36P/T52A、H19Y/N31D/T52M、M1V/H19Y/V45M、S16G/H19Y/N47D、S16G/H19Y/K50T、S16G/H19Y/S44N/K50R、N11D/H19Y/S48T、S9P/N11D/S16R/T32A/Q38R/S44G/T46I/T52A/N53D/A54T、N11D/S16G/S44R、H19L/T32A/S44G/G51E/T52A、S16N/H19Y/T36A/K50R、M1V/H19Y/T36A/R39H/T46A、M1V/H19Y/T36A、H19Y/T36A/N42D/N47S/S48P、M1V/H19Y/T36A/S44G/N47D、M1V/H19Y/T36A/N42R/N53S、H19Y/L35P/T36A/N42D/T46I/V49A、Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E、M1V/H19Y/T36A/N42R/N53S、M1T/H19Y/T36A、M1V/S16N/H19Y/I22M/T36A、M1T/N11D/H19Y/T36A/N42S/V45A/N53S、N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D、M1V/S9P/Q10P/
S16G/H19Y/L26F/T36A/A43V/N53D、S16G/H19Y/T36A/V49A/N53D、S16G/T36A/A43T/S44G/V45M、M4V/S9P/S16G/T36A/Q38R、S9P/N11S/S16G/T36A/Q38R、N11D/E12K/S16R/T36A/T52M、M4V/T32I/T36A/Q38R/A43T/V45A/S48P、S9P/N11D/S16G/Q25R、M1T/A5T/S9P/S16G/Q25R/N31D/V49M、L2S/S9P/S16G/A20T/T32I/Q38R/N42D/T46A/S48L、S16G/Q25R/T46A、G6E/S9A/S16G/Q25R/N31D/N47S/T52M、H19Y/Q38R/T52M、N11D/H19Y/I22M/T32P/N47S/N53S、S16G/H19Y/T36A、S16G/H19Y/T36A/N53D、S9P/N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D、Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E、M1V/L2S/M4T/N11D/H19Y/T36A、M1V/L2S/M4T/N11D/T36A、M1V/L2S/M4T/H19Y/T36I/V45A/V49M、M1V/L2S/M4T/N11D/H19Y/T36A、M1V/L2S/M4T/S9P/Q10R/H19Y/T36A/T46A/N47S、M1V/L2S/M4T/S16G/N31D/T32I/T36A、M1V/M4T/T36A/Q38R/N53K、M1T/N11D/H19Y/T36A/N42S/V45A/N53S、M1T/N31D/T32A/T36A/A38R/S44D/V49A/K50E、M1T/S9P/P23S/Q38R/N42S/S48P/V49A/A54V、H19Y/T36A/S44G、H19Y/T36A和M4T/T36A/Q38R/N42S/S44G/T46A/N47K/S48P/T52A。8.根据权利要求1
‑
4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA包含氨基酸置换S16G/H19Y/T36A，和至少一个从由下列各项组成的组中选择的进一步的氨基酸置换：M1A、M1C、M1I、M1R、M1T、M1V、L2C、L2S、Q3P、Q3R、M4E、M4I、M4T、M4V、A5T、G6E、Q7R、S9A、S9F、S9P、Q10H、Q10P、Q10R、N11D、N11S、E12K、F14L、S16N、S16R、H19L、A20V、A20T、I22M、I22V、P23S、Q25R、L26F、S29A、N31D、N31S、T32A、T32I、T32P、L35S、L35P、T36I、T36P、Q38R、R39H、N42D、N42R、N42S、A43T、A43V、S44D、S44G、S44N、S44R、V45A、V45M、T46A、T46I、N47D、N47K、N47R、N47S、S48L、S48P、S48T、V49A、V49M、K50E、K50G、K50R、K50T、G51E、T52A、T52M、N53D、N53K、N53S、A54V和A54T。9.根据权利要求1
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4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA包含氨基酸置换S16G/H19Y/T36A/N53D，和至少一个从由下列各项组成的组中选择的进一步的氨基酸置换：M1A、M1C、M1I、M1R、M1T、M1V、L2C、L2S、Q3P、Q3R、M4E、M4I、M4T、M4V、A5T、G6E、Q7R、S9A、S9F、S9P、Q10H、Q10P、Q10R、N11D、N11S、E12K、F14L、S16N、S16R、H19L、A20V、A20T、I22M、I22V、P23S、Q25R、L26F、S29A、N31D、N31S、T32A、T32I、T32P、L35S、L35P、T36I、T36P、Q38R、R39H、N42D、N42R、N42S、A43T、A43V、S44D、S44G、S44N、S44R、V45A、V45M、T46A、T46I、N47D、N47K、N47R、N47S、S48L、S48P、S48T、V49A、V49M、K50E、K50G、K50R、K50T、G51E、T52A、T52M、N53K、N53S、A54V和A54T。10.根据权利要求1
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4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA包含氨基酸置换S9P/N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D，和至少一个从由下列各项组成的组中选择的进一步的氨基酸置换：M1A、M1C、M1I、M1R、M1T、M1V、L2C、L2S、Q3P、Q3R、M4E、M4I、M4T、M4V、A5T、G6E、Q7R、S9A、S9F、Q10H、Q10P、Q10R、N11S、E12K、F14L、S16N、S16R、H19L、A20V、A20T、I22M、I22V、P23S、Q25R、L26F、S29A、N31D、N31S、T32A、T32I、T32P、L35S、L35P、T36I、T36P、Q38R、R39H、N42D、N42R、N42S、A43T、A43V、S44D、S44G、S44N、S44R、V45A、V45M、T46A、T46I、N47D、N47K、N47R、S48L、S48P、S48T、V49A、V49M、K50E、K50G、K50R、K50T、G51E、T52A、T52M、N53K、N53S、A54V和A54T。11.根据权利要求1
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4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA包含氨基酸置换Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E，和至少一个从由下列各项组成的组中选择的进一步的氨基酸置换：M1A、M1C、M1I、M1R、M1T、M1V、L2C、L2S、Q3R、M4E、M4I、M4T、M4V、A5T、G6E、
Q7R、S9A、S9F、Q10H、Q10P、Q10R、N11D、N11S、E12K、F14L、S16G、S16N、S16R、H19L、A20V、A20T、I22M、I22V、P23S、Q25R、L26F、S29A、N31D、T32A、T32I、T32P、L35S、L35P、T36I、T36P、Q38R、N42D、N42R、N42S、A43T、A43V、S44D、S44G、S44N、S44R、V45A、V45M、T46A、T46I、N47D、N47K、N47S、S48L、S48P、S48T、V49A、V49M、K50G、K50R、K50T、G51E、T52A、T52M、N53D、N53K、N53S、A54V和A54T。12.根据权利要求1
‑
4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA包含氨基酸置换M1V/L2S/M4T/S16G/N31D/T32I/T36A，和至少一个从由下列各项组成的组中选择的进一步的氨基酸置换：M1A、M1C、M1I、M1R、M1T、L2C、Q3P、Q3R、M4E、M4I、M4V、A5T、G6E、Q7R、S9A、S9F、S9P、Q10H、Q10P、Q10R、N11D、N11S、E12K、F14L、S16N、S16R、H19L、H19Y、A20V、A20T、I22M、I22V、P23S、Q25R、L26F、S29A、N31S、T32A、T32P、L35S、L35P、T36I、T36P、Q38R、R39H、N42D、N42R、N42S、A43T、A43V、S44D、S44G、S44N、S44R、V45A、V45M、T46A、T46I、N47D、N47K、N47R、N47S、S48L、S48P、S48T、V49A、V49M、K50E、K50G、K50R、K50T、G51E、T52A、T52M、N53D、N53K、N53S、A54V和A54T。13.根据权利要求1
‑
4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA与SEQ ID NO:67具有至少90％序列同一性。14.根据权利要求1
‑
4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA与SEQ ID NO:68具有至少90％序列同一性。15.根据权利要求1
‑
4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA与SEQ ID NO:69具有至少90％序列同一性。16.根据权利要求1
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4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA与SEQ ID NO:49具有至少90％序列同一性。17.根据权利要求1
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4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA与SEQ ID NO:74具有至少90％序列同一性。18.根据权利要求1
‑
4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列。19.根据权利要求1
‑
4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列。20.根据权利要求1
‑
4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA具有SEQ ID NO:69的氨基酸序列。21.根据权利要求1
‑
4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列。22.根据权利要求1
‑
4和7中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA具有SEQ ID NO:74的氨基酸序列。23.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA展现出相比于SEQ ID NO:1而言增强的对于增殖诱导配体(APRIL)或TNF家族的B
‑
细胞激活因子(BAFF)的结合亲和力。24.根据权利要求1
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22中任一项的组合物，其中所述变体sBCMA展现出相比于SEQ ID NO:1而言增强的对于APRIL和BAFF的结合亲和力。25.核酸，其编码根据前述权利要求中任一项的所述变体sBCMA。
26.表达载体，其包含权利要求25的所述核酸。27.宿主细胞，其包含权利要求25的所述核酸或者权利要求26的所述表达载体。28.制备变体sBCMA蛋白的方法，其包括：a...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：斯坦福大学托管董事会，
类型：发明
国别省市：