一种芽孢杆菌降解黄曲霉毒素降解产物的鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种芽孢杆菌降解黄曲霉毒素降解产物的鉴定方法，取5ml菌液转移到灭菌后的玻璃管中，加入黄曲霉毒素标准品B1和G1，调节至最终浓度,同时用空白培养基加标准品做对照，37℃摇床培养；对样品进行离心、过滤处理，并对处理后的样品进行上机检测；S2：通过高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种芽孢杆菌降解黄曲霉毒素降解产物的鉴定方法


[0001]本专利技术涉及食品检测
，具体地涉及一种芽孢杆菌降解黄曲霉毒素降解产物的鉴定方法。

技术介绍

[0002]黄曲霉毒素(AFT)是黄曲霉和寄生曲霉等某些菌株产生的双呋喃环类毒素，该毒素是一种强烈生物毒素的化学物质，被世界卫生组织癌症研究机构划分为I类致癌物，广泛存在于各种食物中。玉米、花生、大米、小麦等谷物及其副产品是黄曲霉毒素的主要来源。黄曲霉毒素作为肝癌的三大诱因之一，也是胃癌、肠癌等疾病的主要原因，对人类的健康构成很大的威胁。世界各国对食品和饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。
[0003]黄曲霉毒素污染的防治主要通过化学药物防治、生物防治、加强采后贮藏管理等。化学试剂的使用会使菌株产生抗性，若使用不当，还会增加毒素的产生。生物防治技术是减少或完全清除真菌毒素污染的最有前途和最有效的方法。目前，已从乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌、曲霉中筛选出能拮抗黄曲霉或者降解黄曲霉毒素的菌株。
[0004]本研究从花生种植区采集土壤样品，筛选出芽孢杆菌21
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2能够强烈降解黄曲霉毒素的拮抗菌，通过高效液相色谱
‑
高分辨质谱结合UNIFI 1.8.2/Masslynx V 4.1软件对芽孢杆菌21
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2降解黄曲霉毒素降解产物进行鉴定，对降解机理进行了初步分析研究，为黄曲霉毒素污染控制的基础研究提供了一条新途径。

技术实现思路

[0005]针对上述技术问题，本专利技术提出一种利用芽孢杆菌降解黄曲霉毒素降解产物的新的鉴定方法，为黄曲霉毒素污染控制的基础研究找到了新的方向。
[0006]本专利技术的具体技术方案如下：
[0007]一种芽孢杆菌降解黄曲霉毒素降解产物鉴定方法，所述方法包括以下步骤：
[0008]S1：将芽孢杆菌21
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2接种于营养肉汤培养基中，37℃摇床培养24h复苏；将复苏后的芽孢杆菌转接到新的培养基中，37℃摇床培养48h；取5ml菌液转移到灭菌后的玻璃管中，加入黄曲霉毒素标准品B1和G1，调节至最终浓度,同时用空白培养基加标准品做对照，37℃摇床培养；对样品进行离心、过滤处理，并对处理后的样品进行上机检测；
[0009]S2：通过高效液相色谱
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高分辨质谱结合UNIFI 1.8.2/Masslynx V 4.1软件对芽孢杆菌21
‑1‑
2降解黄曲霉毒素降解产物进行鉴定，得到最终鉴定结果。需要说明的是：本申请研究的黄曲霉毒素G1的结构式具体为：
[0010][0011]黄曲霉毒素G1：
[0012][0013]在其中一种具体实施方式中，所述步骤S1中，标准品为AFG，浓度为20ppb。
[0014]在其中一种具体实施方式中，所述步骤S2通过高效液相色谱
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高分辨质谱结合UNIFI 1.8.2/Masslynx V 4.1软件对芽孢杆菌21
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2降解黄曲霉毒素的降解产物进行鉴定，鉴定的结果：芽孢杆菌21
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2能够将AlfatoxinG1降解成Aflatoxin G1+CH2CH2‑
C3H2O。
[0015]在其中一种具体实施方式中，所述步骤S1中，将芽孢杆菌21
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2用于黄曲霉毒素降解，同时用空白培养基加标准品做对照。
[0016]在其中一种具体实施方式中，所述步骤S2中高效液相色谱的条件为：
[0017]色谱柱：HSS T3 2.1*100mm，1.8m
[0018]柱温：40℃
[0019]流动相A：H2O
[0020]流动相B：ACN。
[0021]在其中一种具体实施方式中，所述步骤S2中高效液相色谱的条件为：
[0022]色谱柱：HSS T3 2.1*100mm，1.8m
[0023]柱温：40℃
[0024]流动相A：H2O
[0025]流动相B：ACN。
[0026]在其中一种具体实施方式中，所述高效液相色谱的梯度表如下所示：
[0027]TimeFlow％A％BCurve00.5982Initial0.50.5982680.550506100.52986120.5298612.10.59826150.59826。
[0028]在其中一种具体实施方式中，所述步骤S2中质谱法的分析条件为：
[0029]离子化模式：ESI+
[0030]毛细管电压：3.0kV
[0031]源温度：120℃
[0032]雾化气温度：550℃
[0033]雾化气流速：1000L/h
[0034]采集模式：MSE。
[0035]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0036]1、芽孢杆菌21
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2能够完全降解黄曲霉毒素G1，并且首次对降解产物进行鉴定，结果表明：芽孢杆菌21
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2能够将AlfatoxinG1(分子式C17H12O7)降解成Aflatoxin G1+CH2CH2
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C3H2O(分子式C16H14O6)。
[0037]2、Xevo G2
‑
XS QTOF系统结合LockSprary实时外标法质量数校正技术，确保质量数的高准确性，质量数偏差小；
[0038]3、MSE全信息串联质谱数据采集方式，无含量歧视，确保了信息的全采集，尤其是低响应化合物碎片离子的采集，并同时确保母离子、碎片离子、质量数的准确性；
附图说明
[0039]图1为黄曲霉毒素G1的色谱图。
[0040]图2为黄曲霉毒素G1的质谱图。
[0041]图3为已知代谢物鉴定中的数据分析图。
具体实施方式
[0042]为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0043]本专利技术的总体方案为：将芽孢杆菌21
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2接种于营养肉汤培养基中，37℃摇床培养24h复苏；将复苏后的芽孢杆菌转接到新的培养基中，37℃摇床培养48h；
[0044]取5ml菌液转移到灭菌后的玻璃管中，加入黄曲霉毒素标准品B1和G1，调节至最终浓度,同时用空白培养基加标准品做对照，37℃摇床培养；对样品进行离心、过滤处理，并对处理后的样品进行上机检测；通过高效液相色谱
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高分辨质谱结合UNIFI 1.8.2/Masslynx V 4.1软件对芽孢杆菌21
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2降解黄曲霉毒素降解产物进行鉴定，得到最终鉴定结果；方法采用实时外标法质量数校正技术，确保质量数的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种芽孢杆菌降解黄曲霉毒素降解产物的鉴定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：S1：将芽孢杆菌21
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2接种于营养肉汤培养基中，37℃摇床培养24h复苏；将复苏后的芽孢杆菌转接到新的培养基中，37℃摇床培养48h；取5ml菌液转移到灭菌后的玻璃管中，加入黄曲霉毒素标准品G1，调节至最终浓度,同时用空白培养基加标准品做对照，37℃摇床培养；对样品进行离心、过滤处理，并对处理后的样品进行上机检测；S2：通过高效液相色谱
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高分辨质谱结合UNIFI 1.8.2/Masslynx V 4.1软件对芽孢杆菌21
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2降解黄曲霉毒素降解产物进行鉴定，得到最终鉴定结果。2.根据权利要求1所述的一种芽孢杆菌降解黄曲霉毒素降解产物鉴定方法，其特征在于，所述步骤S1中，将芽孢杆菌21
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2用于黄曲霉毒素降解，同时用空白培养基加标准品做对照。3.根据权利要求1所述的一种芽孢杆菌降解黄曲霉毒素的降解产物鉴定方法，其特征在于，所述步骤S2通过高效液相色谱
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高分辨质谱结合UNIFI 1.8.2/Massl...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫小明，申颖，金黎明，田家良，
申请(专利权)人：潍坊海关综合技术服务中心，
类型：发明
国别省市：