一种用于体液鉴定的mRNA/cInDel遗传标记的引物组合、试剂盒和鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种用于体液鉴定的mRNA/cInDel遗传标记的引物组合、试剂盒和鉴定方法，涉及法医物证学和分子鉴定技术领域。该引物组合包括扩增19个遗传标记SLC4A1、ALAS2、STATH、HTN3、KRT4、PRM1、TCP11、SEMG1、ODF1、MMP11、STC1、LPAR3、COL6A3、CYP2B7P1、GPAT3、Lcris、FAM83D、RPS4Y1和XIST的引物对。利用该引物组合可以实现对体液类型(精液、唾液、阴道液、月经血和静脉血)的判定和对体液供体的InDel基因分型，并且具有一致性高、组织特异性好、灵敏度高和种属特异性强的特点，本发明专利技术为体液溯源提供了理论基础和检测方法。体液溯源提供了理论基础和检测方法。体液溯源提供了理论基础和检测方法。

【技术实现步骤摘要】
一种用于体液鉴定的mRNA/cInDel遗传标记的引物组合、试剂盒和鉴定方法


[0001]本专利技术涉及法医物证学和分子鉴定
，特别是涉及一种用于体液鉴定的mRNA/cInDel遗传标记的引物组合、试剂盒和鉴定方法。

技术介绍

[0002]在法医学领域，针对体液类型的鉴定方法有很多，传统的生物化学或免疫学分析法虽然比较简便、快速，但是亦存在一些无法克服的缺陷。首先，部分体液和组织间存在交叉反应，使这些方法的检测特异性较低；其次，传统鉴定方法会对检材造成破坏，这对量少的生物检材极为不利；此外，传统方法结果的判读存在人为因素的影响，可能造成结果误判的风险。最后，这些传统检测方法可检测的体液类型也非常有限。由于传统检测方法的上述局限，近年来研究者们提出了一些新的体液鉴定方法用以更准确地解决法医领域相关的体液鉴定问题，包括DNA甲基化模式分析、拷贝数变异分析、微生物特征分析和RNA分析方法等。在这些新方法中，由于转录组分析技术的快速发展，RNA分析已逐渐成为较成熟的体液鉴定方法之一。对于几种常见的体液或组织(如血液、精液、唾液、阴道液、月经血和皮肤等)，一系列mRNA特异性标记物已得到广泛验证，国际相关实验室也推荐了应用mRNA分析结果进行体液鉴定的解释方法。自2011年以来，欧洲DNA分析工作组(The European DNA Working Group，EDNAP)和国际法医RNA分析小组(Forensic RNA Profiling,FoRNAP)已通过毛细管电泳(Capillary Electrophoresis,CE)或大规模并行测序(Massively Parallel Sequencing,MPS)技术系统地评估了mRNA分析在各类样本中进行体液鉴定的鉴定效能。这些研究结果显示，应用mRNA分析进行体液鉴定有良好的应用前景。
[0003]进行体液鉴定时，通常需要提取同一份样本的mRNA和DNA并分别进行检测，将mRNA特异性结果用于判断体液类型，DNA中的STR分型结果用于个体识别。但在混合样本鉴定中，STR分型结果和mRNA特异性结果的相关性并不直接，因为STR分型结果有可能来自mRNA分析中未被识别的体液或组织，从而造成DNA证据与RNA证据的错误关联。
[0004]为了寻找更适合体液(斑)、混合体液(斑)的鉴定方法，Hanson等于2015年首次提出了在体液特异性mRNA中使用基因编码区单核苷酸多态性(Coding region single nucleotide polymorphism,cSNP)将体液分配给特定个体的可行性，直接关联了体液类型和体液供体多态性信息，并尝试进行了相应检测方法的构建。在近期发表的研究中，一些实验团队也尝试将部分cSNP标记融入已构建的mRNA体液鉴定检测体系，在体液类型判定的同时获取相关体液来源个体的遗传多态性信息。尽管目前可用于体液鉴定的cSNP数量还不足以实现像常规STR分型那样令人满意的个体识别能力，但这些研究能够证明，cSNP标记在体液(斑)、混合体液(斑)鉴定中具有巨大的应用潜力。
[0005]然而，就SNP的检测方法而言，包括TaqMan探针法、SNaPshot法、飞行质谱法或MPS方法等，在法医物证学实验室的普及程度均较低，不利于cSNP体液鉴定方法的应用与普及。目前亟需开发一种新的特异性强、灵敏度高、实验操作简单易行，并且易于在法医物证学实
验室中普及的体液鉴定方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种用于体液鉴定的mRNA/cInDel遗传标记的引物组合、试剂盒和鉴定方法，以解决上述现有技术存在的问题，利用该引物组合可以实现对体液类型(精液、唾液、阴道液、月经血和静脉血)的判定和对体液供体的InDel基因分型，并且具有一致性高、组织特异性好、灵敏度高和种属特异性强的特点，本专利技术为体液溯源提供了理论基础和检测方法。
[0007]InDel(Insertion/Deltion)遗传标记作为一种特殊的SNP标记，与SNP相似，具有低突变率和较短的扩增子的优点。而InDel的另一个突出特点是，它的基因型可以根据DNA片段的长度多态性进行判读，因此可以通过常规的PCR
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CE技术实现基因分型，实验操作简单易行，易于在法医物证学实验室中普及。因此，理论上可以将体液特异性mRNA中基因编码区的InDel(cInDel)标记整合到现有的mRNA分析体系中来进行体液类型的判定及其供体的InDel基因分型。
[0008]基于上述研发思路，本专利技术提供了如下方案：
[0009]本专利技术提供一种用于体液鉴定的mRNA/cInDel遗传标记的引物组合，包括如下所示扩增19个遗传标记的引物对：
[0010][0011][0012]进一步地，扩增所述19个遗传标记的引物对中，每对引物对中至少一条引物采用荧光染料标记，所述荧光染料选自FAM、HEX、TRMRA和ROX中的一种。
[0013]进一步地，所述SLC4A1、所述ALAS2、所述STATH、所述KRT4、所述ODF1和所述COL6A3采用FAM标记；所述HTN3、所述LPAR3、所述CYP2B7P1、所述GPAT3、所述Lcris和所述FAM83D采用HEX标记；所述PRM1、所述SEMG1、所述MMP11和所述RPS4Y1采用TAMRA标记；所述TCP11、所述STC1和所述XIST采用ROX标记。
[0014]本专利技术还提供上述的引物组合在制备用于体液鉴定的试剂盒中的应用。
[0015]本专利技术还提供一种用于体液鉴定的试剂盒，包括上述的引物组合。
[0016]进一步地，所述试剂盒还包括2
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MultiplexPCRMasterMix、5
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Q
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Solution和去离子水。
[0017]本专利技术还提供一种体液的鉴定方法，包括以下步骤：
[0018]提取待检体液的RNA，逆转录为cDNA；
[0019]以所述cDNA为模板，利用上述的引物组合进行PCR扩增，得到扩增产物；
[0020]根据所述扩增产物进行分型检测，确定所述待检体液的体液类型。
[0021]进一步地，所述PCR扩增的反应体系包括：7.5μL2
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PCRMasterMix、1.5μL5
×
Q
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Solution、3μL去离子水、1.5μL引物混合物和1.5μLcDNA。
[0022]进一步地，所述PCR扩增的反应程序包括：95℃预变性15分钟；94℃变性30秒，60℃退火1分30秒，72℃延伸1分30秒，35个循环；60℃终延伸60分钟。
[0023]本专利技术还提供上述的引物组合或试剂盒在体液鉴定中的应用。
[0024]本专利技术公开了以下技术效果：
[0025]本专利技术能够扩增5种体液(精液、唾液、阴道液、月经血和静脉血)特异性的19个mRNA/cInDel标记，提供一种含有上述荧光修饰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于体液鉴定的mRNA/cInDel遗传标记的引物组合，其特征在于，包括如下所示扩增19个遗传标记的引物对：2.根据权利要求1所述的引物组合，其特征在于，扩增所述19个遗传标记的引物对中，每对引物对中至少一条引物采用荧光染料标记，所述荧光染料选自FAM、HEX、TRMRA和ROX中的一种。
3.根据权利要求2所述的引物组合，其特征在于，所述SLC4A1、所述ALAS2、所述STATH、所述KRT4、所述ODF1和所述COL6A3采用FAM标记；所述HTN3、所述LPAR3、所述CYP2B7P1、所述GPAT3、所述Lcris和所述FAM83D采用HEX标记；所述PRM1、所述SEMG1、所述MMP11和所述RPS4Y1采用TAMRA标记；所述TCP11、所述STC1和所述XIST采用ROX标记。4.一种如权利要求1
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3任一项所述的引物组合在制备用于体液鉴定的试剂盒中的应用。5.一种用于体液鉴定的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1
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3任一项所述的引物组合。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括2
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Multiplex...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶瑞旸，何晓丹，王守宇，李成涛，张素华，夏若成，袁春艳，
申请(专利权)人：司法鉴定科学研究院，
类型：发明
国别省市：