一种广谱识别人源诺如病毒的可溶性单链抗体及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种广谱识别人源诺如病毒的可溶性单链抗体及制备方法，涉及生物技术领域，可溶性单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；其制备方法包括：获得广谱识别hNoV的可溶性单链抗体J5D核苷酸序列；构建重组原核表达质粒pMAL

【技术实现步骤摘要】
一种广谱识别人源诺如病毒的可溶性单链抗体及制备方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种广谱识别人源诺如病毒的可溶性单链抗体及制备方法。

技术介绍

[0002]目前，人源诺如病毒(human norovirus，hNoV)的检测方法主要有：基于病毒核酸片段的分子检测法和检测抗原决定簇的免疫学方法。
[0003]分子检测法主要包括：RT
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PCR和RT
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qPCR。其中，因RT
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qPCR方法敏感性和特异性高，成为了该病毒检测的“金标准”。然而，hNoV基因型多样且易发生突变，没有通用的检测体系；且此方法通常需要精密的设备和专业的操作人员，检测周期约2h，使用场景严重受限。
[0004]免疫学方法是通过检测病毒抗原，诊断是否感(污)染hNoV；主要衣壳蛋白是该病毒的主要免疫原性蛋白，可分为高度保守的壳区和易发生变异的突出区。以突出区作为检测靶标，仅可检测个别基因型hNoV；以保守区为检测靶标，可以广谱性检测hNoV。但是，免疫学检测所用到的单克隆抗体制备流程复杂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可溶性单链抗体J5D，其特征在于，所述可溶性单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。2.如权利要求7所述的可溶性单链抗体J5D的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤1、获得广谱识别不同基因型hNoV的可溶性单链抗体J5D核苷酸序列；步骤2、以步骤1得到的J5D基因编码序列为模板，构建重组原核表达质粒pMAL
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c5X
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J5D；步骤3、将取含步骤2得到的重组原核表达质粒pMAL
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c5X
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J5D培养，进行J5D的原核表达和纯化。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1还包括以下步骤：步骤1.1、设计鼠源单克隆抗体可变区引物；步骤1.2、培养杂交瘤细胞，提取mRNA，以反转录获得的cDNA为模板，利用步骤1.1得到的鼠源单克隆抗体可变区引物扩增J5D的VH和VL基因片段；步骤1.3、分别以含步骤1.2得到的J5D的VH和VL基因序列的T载体为模板，以5H
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F和5H
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R
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Linker为引物扩增J5D
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VH
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Linker核苷酸片段，以Linker
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5K
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F和5K
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R为引物扩增Linker
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J5D
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VL核苷酸片段，利用SOE
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PCR将其拼接，得到J5D基因。4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2还包括提取所述重组原核表达质粒pMAL
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c5X
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J5D，化学法转化Origami2感受态细胞，阳性克隆保存备用。5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3还包括以下步骤：取含所述重组原核表达质粒pMAL
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c5X
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J5D的Origami2大肠杆菌菌液在含氨苄青霉素的LB固体培养基上划线，培养；挑单克隆于含氨苄青霉素的LB液体培养基中，振荡培养；扩大培养，当OD
600
为0.6左右时，取3mL未诱导菌液，离心后弃第一上清，将第一沉淀于
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20℃保存；向剩余菌液中加入IPTG诱导，振荡培养，取菌液，离心后弃第二上清，将第二沉淀于
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20℃保存；剩余诱导后的菌液离心，弃上清，收集菌体，加入Lysis buffer重悬，使用超...

【专利技术属性】
技术研发人员：王大鹏，王凤青，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：