【技术实现步骤摘要】
一种热激蛋白基因LbHSP90在改变切花百合抗低温胁迫中的应用
[0001]本专利技术属于植物基因工程
，具体地涉及一种热激蛋白基因LbHSP90在改变切花百合抗低温能力中的应用。
技术介绍
[0002]低温胁迫一直是植物生长发育的一个重要限制因素，并导致作物产量的大幅下降。在长期的进化过程中，植物产生了一系列生理生化机制来适应、抑制或消除非生物胁迫的影响，其中合成新的逆境蛋白是最常见的一种方式。
[0003]热激蛋白按分子量大小可分为 5 个家族，即 sHSP（小分子热激蛋白）、 HSP60、HSP70、HSP90 和 HSP100。HSP90 是一种 ATP 调控的 二聚体伴侣蛋白，主要由三个高度保守的结构域组成:与底物结合的约 25 kDa 的 C 端结构域、35 kDa 的中间结构域和 ATP 结合位点的 12 kDa 的 N 端结构域。HSP90 是正常发育阶段细胞的重要成分，有助于蛋白质的易位、折叠和降解，在重要的生物过程(如信号转导和细 胞周期)中发挥功能。HSP90 还参与响应多种非生物和生物胁...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种热激蛋白基因LbHSP90 在改变切花百合抗低温中的应用，其特征在于，所述基因LbHSP90从百合中克隆得到，基因LbHSP90具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列能够编码SEQ ID NO:2所示氨基酸序列，通过在百合中使LbHSP90基因过表达，以提高百合抗低温胁迫能力，该基因提高百合抗低温胁迫能力利用植物拟南芥或百合进行验证。2.根据权利要求1所述的热激蛋白基因LbHSP90 在改变切花百合抗低温中的应用，其特征在于：利用模式植物拟南芥进行验证，通过在模式植物拟南芥中构建过表达载体并通过农杆菌介导浸花法转化模式植物拟南芥，使基因LbHSP90在拟南芥过表达，获得比野生型拟南芥更抗低温的转基因拟南芥，拟南芥是模式植物可验证普遍生物规律，从而得出该基因LbHSP90可提高百合抗低温胁迫能力。3.根据权利要求2所述的热激蛋白基因LbHSP90 在改变切花百合抗低温中的应用，其特征在于：利用模式植物拟南芥进行验证的具体步骤如下：（1）构建过表达载体：
①
利用 LbHSP90基因序列设计引物LbHSP90
‑
F与LbHSP90
‑
R和LbHSP90
‑
F
’
，以黄天霸cDNA为模板进行PCR扩增LbHSP90基因，获得目的片段LbHSP90基因片段；
②
PC1300S
‑
GFP载体用KpnI与BamHI双酶切处理并回收，与步骤
①
的PCR扩增产物LbHSP90基因片段进行重组得到重组产物，将重组产物转化到大肠杆菌上，然后涂抗性平板，挑选克隆子及摇菌，然后将引物A580
‑
seqR与LbHSP90
‑
F
’
菌落通过PCR技术进行阳性克隆的验证，然后进行测序验证得到LbHSP90的过表达载体；（2）拟南芥种子消毒处理用70%的乙醇浸泡野生型拟南芥种子2 min，用15%体积比的NaClO溶液旋转洗涤10 min，无菌水漂洗5次；（3）播种和移栽用无菌水重悬消毒处理的种子，均匀分散到1/2MS固体培养基表面上，培养皿倒置，4C春化两天，25℃正置暗培养一天，再置于22℃的组织培养室中正常培养；待苗长至四片叶子时，将其移栽到营养土中，置于22℃恒温环境中，16h光照8h黑暗培养，营养液7.5ml
•
L
‑1灌根，幼苗期7天/次，现蕾期14天/次；（4）过表达载体转化拟南芥植株
①
挑取含过表达载体的单菌落接种于5mL LB液体培养基中，28℃ 200 rmp
·
min
‑1震荡培养过夜；
②
取2mL菌液转入100 mL LB培养基，28℃ 200m
· min
‑1震荡培养至OD600值为1.0
‑
1.5；
③
6000 rmp
·
min
‑1离心10 min，弃上清；
④
1mL 5%蔗糖溶液重悬菌，6000 rmp
·
min
‑1离心2min，弃上清；...
【专利技术属性】
技术研发人员：文锦芬，赵家惠，赵子贤，闫欣瑜，邓明华，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：
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