枯草杆菌酶突变体及其用途制造技术

技术编号:39185221 阅读:11 留言:0更新日期:2023-10-27 08:32
本文提供了枯草杆菌酶突变体,与野生型枯草杆菌酶相比,其包括如下氨基酸取代中的一个或更多个:S3T、N43R、N76D、P129Q、V205I、Q206L、Y209W、S259D、N261W和L262E,其中:1)所述氨基酸取代的位置对应于SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的位置;2)所述枯草杆菌酶突变体具有蛋白酶活性;以及3)所述野生型枯草杆菌酶氨基酸序列选自SEQ ID NO:2或4所示氨基酸序列。本文还提供了包括所述枯草杆菌酶突变体的洗涤剂组合物和所述枯草杆菌酶突变体的用途。本文提供的枯草杆菌酶突变体与现有产品相比具有改善的存储稳定性,避免了蛋白酶稳定剂的使用,降低了其生产成本。了其生产成本。了其生产成本。

【技术实现步骤摘要】
枯草杆菌酶突变体及其用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请以2022年4月24日提交的中国专利申请CN202210458457.1为优先权。


[0003]本文涉及枯草杆菌酶的突变体,尤其是存储稳定性得到改善的突变体。本文还涉及该突变体在制备洗涤剂组合物中的用途。

技术介绍

[0004]在液体洗涤剂行业中,酶的使用已持续数十年。洗涤剂中加入酶可提高去污力,降低表面活性剂及三聚磷酸盐的用量,有利于洗涤剂朝低磷、无磷化的方向发展,以减少环境污染。目前已商品化的洗涤剂用酶有:蛋白酶、淀粉酶、碱性纤维素酶、脂肪酶等以及它们的复合物,在液体洗涤剂领域中应用最广泛的酶是蛋白酶。
[0005]由于在中碱性条件下从织物去除蛋白质污渍的良好能力,来自芽孢杆菌属的枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)引起众多企业和研究机构的广泛关注,其中以源自解淀粉芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶BPN

(序列如SEQ ID NO:1所示)和源自迟缓芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶309(序列如SEQ ID NO:4所示)表现最为突出。
[0006]越来越多的商用蛋白酶是天然存在的野生型蛋白酶的蛋白质工程化突变体,如诺维信公司(Novozymes A/S))的Progress UNO 100L/101L、美国杜邦公司的P300等。但是有些蛋白酶制剂中仍需要添加蛋白酶抑制剂来维持稳定性,因此,在不影响洗涤或清洁效果的前提下,进一步提高蛋白酶在液体洗涤剂中的储存稳定性,避免使用蛋白酶抑制剂是非常有意义的。

技术实现思路

[0007]在一方面,本文提供了枯草杆菌酶突变体,与野生型枯草杆菌酶相比,其包括如下氨基酸取代中的一个或更多个:S3T、N43R、N76D、P129Q、V205I、Q206L、Y209W、S259D、N261W和L262E,其中:
[0008]1)所述氨基酸取代的位置对应于SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的位置;
[0009]2)所述枯草杆菌酶突变体具有蛋白酶活性;以及
[0010]3)所述野生型枯草杆菌酶氨基酸序列选自SEQ ID NO:2或4所示氨基酸序列。
[0011]在一些实施方案中,所述枯草杆菌酶突变体还包括氨基酸取代S87N。
[0012]在一些实施方案中,所述枯草杆菌酶突变体还包括氨基酸取代S9D、S9A、S9Q或S9T。
[0013]在一些实施方案中,所述枯草杆菌酶突变体还包括选自如下氨基酸取代中的一个或更多个:A1G、A1N、V4I、R10Q、V11I、Q12S、T37V、N116T、G118M、S128L、S130A、N185E、A194P和N243S。
[0014]在一些实施方案中,所述枯草杆菌酶突变体包括选自如下氨基酸取代组合中的任
一组合:
[0015]S3T

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;
[0016]S3T

N43R

N76D

S87N

G118M

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;
[0017]S3T

N43R

N76D

S87N

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;
[0018]S3T

N43R

N76D

S87N

S128L

P129Q

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;
[0019]A1G

S3T

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;
[0020]A1G

S3T

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

N243S

S259D

N261W

L262E;
[0021]S3T

T37V

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;
[0022]S3T

N43R

N76D

S87N

N116T

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;
[0023]S3T...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.枯草杆菌酶突变体,与野生型枯草杆菌酶相比,其包括如下氨基酸取代中的一个或更多个:S3T、N43R、N76D、P129Q、V205I、Q206L、Y209W、S259D、N261W和L262E,其中:1)所述氨基酸取代的位置对应于SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的位置;2)所述枯草杆菌酶突变体具有蛋白酶活性;以及3)所述野生型枯草杆菌酶氨基酸序列选自SEQ ID NO:2或4所示氨基酸序列。2.如权利要求1所述的枯草杆菌酶突变体,其中所述枯草杆菌酶突变体还包括氨基酸取代S87N。3.如权利要求1或2所述的枯草杆菌酶突变体,其中所述枯草杆菌酶突变体还包括氨基酸取代S9D、S9A、S9Q或S9T。4.如权利要求1

3所述的枯草杆菌酶突变体,其中所述枯草杆菌酶突变体还包括选自如下氨基酸取代中的一个或更多个:A1G、A1N、V4I、R10Q、V11I、Q12S、T37V、N116T、G118M、S128L、S130A、N185E、A194P和N243S。5.如权利要求1

4任一项所述的枯草杆菌酶突变体,其中所述枯草杆菌酶突变体包括选自如下氨基酸取代组合中的任一组合:S3T

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

N43R

N76D

S87N

G118M

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

N43R

N76D

S87N

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

N43R

N76D

S87N

S128L

P129Q

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;A1G

S3T

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;A1G

S3T

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

N243S

S259D

N261W

L262E;S3T

T37V

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

N43R

N76D

S87N

N116T

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

N185E

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

A194P

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

V4I

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

S9D

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;A1G

S3T

S9D

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

V4I

S9D

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;
A1G

S3T

V4I

S9D

N43R

N76D

S87N

G118M

S128L

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

V4I

S9D

N43R

N76D

S87N

G118M

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;A1G

S3T

N43R

N76D

S87N

G118M

P129Q

S130A

N185E

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

V4I

R10Q

V11I

Q12S

N43R

N76D

S87N

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;A1G

S3T

V4I

S9D

N43R

N76D

S87N

G118M

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

V4I

S9D

N43R

N76D

S87N

G118M

P129Q

S130A

N185E

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;A1N

S3T

V4I

S9A

R10Q

N43R

N76D

S87N

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

V4I

S9D

R10Q

N43R

N76D

S87N

G118M

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

V4I

S9D

R10Q

V11I

Q12S

N43R

N76D

S87N

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

V4I

S9Q

R10Q

V11I

Q12S

N43R

N76D

S87N

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

V4I

S9T

R10Q

V11I

Q12S

N43R

N76D

S87N

P129Q

S130A

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

V4I

S9A

R10Q

V11I

Q12S

N43R

N76D

S87N

P129Q

S130A

V205I

Q206L

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S259D

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L262E;A1G

S3T

V4I

S9D

N43R

N76D

S87N

S128L

P129Q

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

N43R

N76D

S87N

N116T

S128L

P129Q

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E

V4I

S9D;S3T

V4I

S9D

N43R

N76D

S87N

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N185E

V205I

Q206L

Y209W

S259D

N261W

L262E;S3T

V4I

S9D

N43R

N76D

S87N

S128L

P129Q

V205I

Q206L

Y209W

N243S

S259D

N261W

L262E;A1G

S3T

V4I

N43R

【专利技术属性】
技术研发人员:卞芙蓉徐元喜王雪娇杜丽娟李欢欢白挨玺
申请(专利权)人:南京百斯杰生物工程有限公司
类型:发明
国别省市:

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