抗SARS-CoV-2抗体制造技术

本发明专利技术提供一种能够与SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗SARS
‑
CoV
‑
2抗体


[0001]本专利技术涉及一种能够与SARS
‑
CoV
‑
2的核衣壳蛋白结合的抗体。

技术介绍

[0002]SARS冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，严重急性呼吸综合征冠状病毒2；SARS
‑
CoV
‑
2)与SARS冠状病毒(SARS
‑
CoV)、MERS冠状病毒(MERS
‑
CoV)同样属于β冠状病毒(β
‑
CoV)属，是引起急性呼吸道疾病(COVID
‑
19)的SARS相关冠状病毒。2019年首次确认发生，随后，引起COVID
‑
19世界性流行(大流行)。
[0003]关于SARS
‑
CoV
‑
2，其病毒基因组为29,903个碱基左右，为单链正链RNA病毒。另外，病毒颗粒(病毒体，virion)为50～200nm左右的大小。与通常冠状病毒同样地，由已知为刺突蛋白、核衣壳蛋白、整合膜蛋白、包膜蛋白的4种蛋白质和RNA构成。其中，核衣壳蛋白与RNA结合而形成核衣壳，与脂质结合的刺突蛋白、整合膜蛋白、包膜蛋白包围在形成的核衣壳周围而形成包膜(非专利文献2、3)。
[0004]SARS
‑
CoV
‑
2的核衣壳蛋白(以下，称为N蛋白)是与SARS
‑
CoV
‑
2的RNA基因组结合的蛋白质。有报告称，除了参与病毒基因组折叠、病毒蛋白的组装、病毒出芽等病毒颗粒形成以外，还具有抑制宿主细胞应答的功能(非专利文献4)。
[0005]在COVID
‑
19的病毒学诊断中，主要通过基因扩增法(PCR(polymerase chain reaction，聚合酶链反应))进行SARS
‑
CoV
‑
2的基因检测。在目前可使用的病毒检查中，被认为PCR检查能够以最高灵敏度进行检测。另外，作为其他检测法，也存在检测病毒表面蛋白质(例如，刺突蛋白等)的片段的抗原检查。关于抗原检查，以免疫层析法或ELISA(enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附分析)法作为原理的检测试剂盒已有市售，一般而言，检测灵敏度较PCR检查差，但所需时间较短且较简便，就这些方面而言优异。
[0006]在病毒检查中，寻求一种不存在假阳性和假阴性的检查法。关于假阳性，重要的是对靶分子具有较高的特异性的测定原理，另外，关于假阴性，重要的是检查法的检测灵敏度。另外，在源自SARS
‑
CoV
‑
2感染者的体液(唾液或咽粘液等)或污水中，虽为低浓度但存在一部分病毒结构体，为了检测这些病毒，也有现有的PCR检查和抗原检查的方法不充分的情况。因此，虽然SARS
‑
CoV
‑
2的PCR检查和抗原检查已成为通用技术，但仍强烈要求开发一种用于更具特异性且更高灵敏度地检测SARS
‑
CoV
‑
2的技术。
[0007]有报告称，SARS
‑
CoV
‑
2的N蛋白是构成该病毒的蛋白质中数量最多的蛋白质之一(非专利文献4)。N蛋白的数量远多于在SARS
‑
CoV
‑
2的表面露出的刺突蛋白，因此在SARS
‑
CoV
‑
2的抗原检查中，尤其就检测灵敏度的方面而言，N蛋白是作为靶分子优选的蛋白质。进而，N蛋白作为核衣壳以与SARS
‑
CoV
‑
2的RNA基因组结合的状态存在。因此，例如如果可开发一种以N蛋白作为靶标，并且能够选择性且强力地与N蛋白结合的抗体，将SARS
‑
CoV
‑
2的N蛋白
‑
RNA基因组复合体浓缩，则在PCR检查中，也能够更高灵敏度地检测SARS
‑
CoV
‑
2。另外，同样地，通过将浓缩N蛋白的步骤与抗原检查组合，也能够实现SARS
‑
CoV
‑
2的抗原检查的高灵敏度化。
[0008]另外，SARS
‑
CoV
‑
2的N蛋白是在感染细胞内主要表达的蛋白质之一，显现出较强的免疫原性。有报告称，利用针对从2002年11月起流行的SARS
‑
CoV的N蛋白的ELISA法，也以较高的特异性诊断出了被视为感染初期的患者(非专利文献5)。
[0009]通常的抗体(IgG抗体等)是在重链和轻链2个可变区与抗原结合，但从骆驼科动物的血清中发现的重链抗体仅在1个可变区显现出结合活性和抗原特异性。该抗体的可变区被称为VHH(Variabledomain of Heavy chain of Heavy chain antibody，重链抗体的重链的可变区)，作为可与抗原结合的免疫球蛋白片段，认为其分子量最低(通常的抗体(IgG抗体等)的十分之一左右)(非专利文献6)。作为VHH抗体的功能方面的特征，可以列举：1)具有与通常的抗体相同或更高的结合活性，2)进入通常的抗体无法接近的部分，3)生理结构的形成和再生的容易性较高，4)为单链肽，因此具有非常简单的结构。尤其是因3)的原因，VHH抗体对热和压力的稳定性非常高，另外，可实现以往较困难的功能性抗体在原核生物(大肠杆菌、枯草杆菌、棒状杆菌、酵母等)中的大量生产。另外，因4)的原因，具有容易通过蛋白质工程或化学修饰来改良功能，容易制作抗体药物复合体(ADC)的特征。
[0010]如此，VHH抗体与通常的抗体(IgG抗体等)相比，在性状方面、生产方面具有较多的优点。因此，期待较以往的使用IgG抗体的技术在性能方面、价格方面更有利地提供使用以SARS
‑
CoV
‑
2的N蛋白作为靶标的VHH抗体的检测技术。
[0011]现有技术文献
[0012]非专利文献
[0013]非专利文献1：A pneumonia outbreak associated with a new coronavirus of probable bat origin.Nature.2020Mar；579(7798):270
‑
273.
[0014]非专利文献2：A new coronavirus associated with human respiratory disease in China.Nature.2020Mar；579(7798):265
‑
269.
[0015]非专利文献3：The Coronavirus Nucleocapsid本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种能够与SARS
‑
CoV
‑
2结合的抗体，其具有1个以上的包含以下(a)或(b)所示的CDR的结构域，(a)由序列编号1所示的氨基酸序列或该氨基酸序列中1个氨基酸被取代为其他氨基酸而成的氨基酸序列构成的CDR1、由序列编号2所示的氨基酸序列或该氨基酸序列中1个氨基酸被取代为其他氨基酸而成的氨基酸序列构成的CDR2、和由序列编号3所示的氨基酸序列或该氨基酸序列中1个氨基酸被取代为其他氨基酸而成的氨基酸序列构成的CDR3；(b)由序列编号4所示的氨基酸序列或该氨基酸序列中1个氨基酸被取代为其他氨基酸而成的氨基酸序列构成的CDR1、由序列编号5所示的氨基酸序列或该氨基酸序列中1个氨基酸被取代为其他氨基酸而成的氨基酸序列构成的CDR2、和由序列编号6所示的氨基酸序列或该氨基酸序列中1个氨基酸被取代为其他氨基酸而成的氨基酸序列构成的CDR3。2.如权利要求1所述的抗体，其能够与N蛋白结合。3.如权利要求1或2所述的抗体，其为VHH抗体、重链抗体或VHH抗体多聚体。4.如权利要求3所述的抗体，其中，VHH抗体多聚体为多个所述结构域连结而成的多聚体。5.如权利要求3所述的抗体，其中，VHH抗体多聚体是一个或多个所述结构域与抗原特异性不同于该结构域的一个或多个结构域连结而成的多聚体。6.一种核酸，其编码权利要求1或2所述的抗体。7.一种试样中的SARS
‑
CοV
‑
2的检测方法，其包括：使能够与SARS
‑
CοV
‑
2结合的抗体与受试试样接触的步骤，所述抗体具有1个以上的包含以下(a)或(b)所示的CDR的结构域，(a)由序列编号1所示的氨基酸序列或该氨基酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：稻浦峻亮，松村佑太，东条卓人，长见笃，
申请(专利权)人：爱普思隆分子进化工程株式会社，
类型：发明
国别省市：