一种高表达啶南平A的工程菌及发酵培养基制造技术

本发明专利技术涉及一种高表达啶南平A的工程菌及发酵培养基。目前啶南平A的微生物合成方法中，存在产量不足、次级代谢物较多等缺陷。本发明专利技术目的在于提供一种适合工业生产所需的工程菌，基于该目的，本发明专利技术以米曲霉作为出发菌株，导入Neosartorya fischeri DSM 3700中与啶南平A合成相关的基因nef1

【技术实现步骤摘要】
一种高表达啶南平A的工程菌及发酵培养基


[0001]本专利技术属于工程微生物
，具体涉及一种高表达啶南平A的工程菌、所述工程菌的构建方法、基于该菌株高效发酵啶南平A的培养基及一种啶南平A的生物合成方法。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]啶南平是由真菌产生的一个有吡啶环结构及α
‑
吡喃酮结构构成的混源倍半萜类化合物。其中啶南平A是一种高效、选择性的SOAT2/ACAT2抑制剂，在体内能减轻高胆固醇血症和动脉粥样硬化，其IC
50
值为0.07μM，有望成为一种强效的心血管治疗药物。此外，啶南平A与双丙环虫酯结构类似，可通过快捷、高效的化学半合成方法合成双丙环虫酯(如下式I)。双丙环虫酯是一种具有全新的作用机制的新型杀虫剂。因此，啶南平A是一种高价值化合物。
[0004][0005]啶南平A主要由真菌产生，根据已有文献报道，啶南平A产量最本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高表达啶南平A的工程菌，其特征在于，所述工程菌的出发菌株为米曲霉，相比该出发菌株，所述工程菌被改造为具有啶南平A生物合成基因nef1
‑
nef9：(1)nef1为辅酶A连接酶基因，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；(2)nef2为聚酮合酶基因，核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；(3)nef3为细胞色素P450酶基因，核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；(4)nef4为环化酶基因，核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；(5)nef5为5FAD依赖性单加氧酶基因，核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；(6)nef6为异戊烯基转移酶基因，核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；(7)nef7为乙酰转移酶基因，核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；(8)nef8为乙酰转移酶基因，核苷酸序列如SEQ ID No.8所示；(9)nef9为细胞色素P450酶基因，核苷酸序列如SEQ ID No.9所示。2.如权利要求1所述高表达啶南平A的工程菌，其特征在于，所述出发菌株为米曲霉(Aspergillus oryzae)NSAR1。3.如权利要求1所述高表达啶南平A的工程菌，其特征在于，所述啶南平A生物合成基因nef1
‑
nef9来源于费希新萨托菌(Neosartorya fischeri)DSM 3700。4.权利要求1
‑
3任一项所述高表达啶南平A的工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：加入引物扩增nef1
‑
nef9基因，在每个基因两端引入同源臂，随后使用Gibson组装方式，将基因依次连接至载体上。5.如权利要求4所述工程菌的构建方法，其特征在于，所述连接方式如下：nef1基因两端引入同源臂，连接至pUSA载体上，构成pUSA
‑
nef1重组质粒；nef2基因两端引入同源臂，连接至pTAex3载体上，构成pTAex3
‑
nef2质粒；设计引物依次扩增AmyB启动子
‑
nef4/nef5/nef6
‑
终止子的基因片段，两端引入同源臂，将三种基因片段构建至同一pAdeA载体上，构建重组质粒pAdeA
‑
PAmyB
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nef4
‑
TAmyB
‑
PAmyB
‑
nef6
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TAmyB
‑
PAmyB
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nef5
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TAmyB；设计引物依次扩增AmyB启动子
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nef3/nef7
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终止子的基因片段，两端引入同源臂，将两种基因片段构建至同一pBARI载体上，构建重组质粒pBARI
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PAmyB
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nef3
‑
TAmyB
‑
PAmyB
‑
nef7
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TAmyB；设计引物依次扩增AmyB启动子
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nef8/nef9
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终止子的基因片段，两端引入同源臂，将两种基因片段构建至同一p...

【专利技术属性】
技术研发人员：卞小莹，孙健鹏，代广知，孙志恒，张友明，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：