一种天赐霉素免疫脂质体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种含有天赐霉素的免疫脂质体及其制备方法和抗乳腺癌的应用。所述天赐霉素免疫脂质体，所述免疫脂质体是以磷脂和胆固醇包覆天赐霉素，并用曲妥珠单抗修饰。本发明专利技术制备天赐霉素免疫脂质体的制备方法简单，抗肿瘤优异。新型天赐霉素免疫脂质体可以改善天赐霉素对肿瘤细胞无选择性的缺点，可以提高天赐霉素的抗肿瘤效果。同时具有曲妥珠单抗作为靶头的主动靶向免疫脂质体，在体内具有显著的靶向性，抗肿瘤效果与非靶向脂质体具有显著差别。本发明专利技术能为天赐霉素抗肿瘤应用提供新途径，对推进天赐霉素的临床应用具有重要的意义。义。

【技术实现步骤摘要】
multimodal guided two
‑
step strategy.J Nanobiotechnology.2021Sep27；19(1):293)。
[0006]Xiaoyan Lu等人报道了西妥昔单抗与载阿法替尼的脂质体结合以形成免疫脂质体，并在荷瘤小鼠中进行了肿瘤生长实验，LP
‑
CTX组与LP组相比肿瘤体积生长抑制率提高了1倍(Lu X,Liu S,Han M,Yang X,Sun K,Wang H,Mu H,Du Y,Wang A,Ni L,Zhang C.Afatinib
‑
loaded immunoliposomes functionalized with cetuximab:A novel strategy targeting the epidermal growth factor receptor for treatment of non
‑
small
‑
cell lung cancer.Int J Pharm.2019Apr 5；560:126
‑
135)。
[0007]Tao Yang等人在乳腺癌异种移植模型中研究了载有紫杉醇的聚乙二醇化的曲妥珠单抗结合的免疫脂质体(PIL)的抗肿瘤作用。PIL组与PL组相比肿瘤体积生长抑制率提高了1倍(Yang T,Choi MK,Cui FD,Lee SJ,Chung SJ,Shim CK,Kim DD.Antitumor effect of paclitaxel
>‑
loaded PEGylated immunoliposomes against human breast cancer cells.Pharm Res.2007Dec；24(12):2402
‑
11)。
[0008]Josimar O.Eloy等人合成了修饰有曲妥珠单抗的PTX/RAP共载免疫脂质体，并在小鼠异种移植模型中评价抗肿瘤效果，免疫脂质体组与脂质体组相比肿瘤体积生长抑制率提高了2
‑
3倍(Eloy JO,Petrilli R,Chesca DL,Saggioro FP,Lee RJ,Marchetti JM.Anti
‑
HER2 immunoliposomes for co
‑
delivery of paclitaxel and rapamycin for breast cancer therapy.Eur J Pharm Biopharm.2017Jun；115:159
‑
167)。
[0009]黄念等人公开了一种由抗体、脂质原料和中药单体蟾毒灵、蜂毒素自组装的复方中药免疫脂质体，免疫脂质体与游离药物组相比提高不到1倍(一种复方中药免疫脂质体及其制备方法和应用)。

技术实现思路

[0010]本专利技术旨在提供一种特异性靶向HER2的天赐霉素免疫脂质体、制备方法，及其在抗癌中的应用，所述天赐霉素免疫脂质体在抗肿瘤效果优异的同时，无明显的全身系统性的毒副作用。
[0011]为了实现上述目的，本专利技术的方案如下：
[0012]一种天赐霉素免疫脂质体，所述免疫脂质体是以磷脂和胆固醇包覆天赐霉素，并用曲妥珠单抗修饰。
[0013]优选的，所述磷脂为天然磷脂和聚乙二醇化的合成磷脂的组合。
[0014]优选的，所述天然磷脂为大豆卵磷脂。
[0015]优选的，所述聚乙二醇化的合成磷脂包括DSPE
‑
PEG2000和DSPE
‑
PEG2000
‑
NHS。
[0016]优选的，大豆卵磷脂、胆固醇、DSPE
‑
PEG
2000
、DSPE
‑
PEG
2000
‑
NHS、曲妥珠单抗和天赐霉素的摩尔比为(56
‑
58)：(39
‑
42)：(5
‑
10)：1：(0.02
‑
0.05)：(0.004
‑
0.006)。
[0017]优选的，所述曲妥珠单抗为人源化单克隆抗体trastuzumab。
[0018]优选的，所述曲妥珠单抗通过与DSPE
‑
PEG
2000
‑
NHS反应形成酰胺键，合成DSPE
‑
PEG
2000
‑
trastuzumab进而连接到免疫脂质体表面。
[0019]优选的，所述免疫脂质体的粒径为100～200nm。
[0020]一种制备免疫脂质体的方法，包括以下步骤：
[0021]S1、按重量份，将磷脂、胆固醇和天赐霉素溶解于无水乙醇，形成脂质溶液；
[0022]S2、将脂质溶液倒入预热的PBS溶液中，45
‑
60℃下涡旋2
‑
3h，形成脂质体；
[0023]S3、加入曲妥珠单抗，混匀，孵育后透析，得到免疫脂质体。
[0024]优选的，步骤S3中透析时间为24
‑
48h。
[0025]优选的，步骤S3中透析袋的截留分子量为300KD，除去未与脂质体连接的曲妥珠单抗。
[0026]优选的，包载药物包括但不限定于任一一种蒽醌骈合型烯二炔药物，包括：天赐霉素及其衍生物(TNM B，TNM C)、洋浦霉素(Yangpumicin(YPM)A)及其衍生物(YPM F，YPM G)。
[0027]本专利技术还要求保护所述天赐霉素免疫脂质体在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0028]优选的，所述肿瘤为乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、前列腺癌或膀胱癌。
[0029]下面对本专利技术做进一步的解释：
[0030]在本专利技术中，天赐霉素免疫脂质体具有曲妥珠单抗作为靶头的主动靶向脂质体，在体内具有显著的靶向性，不仅可以改善天赐霉素对肿瘤细胞无选择性的缺点，还可以提高天赐霉素的体内抗肿瘤效果，抗肿瘤效果与非靶向制剂具有显著差别。
[0031]根据本专利技术的制备方法，本专利技术中有80～90％以上的曲妥珠单抗成功连接至免疫脂质体。
[0032]本专利技术将曲妥珠单抗与PEG立体稳定的脂质体共轭而制成的抗HER2免疫脂质体，在治疗HER2高表达的乳腺癌方面显示出良好的效果。具体来说，PEG化可以增加封装药物在血液中的循环时间，而曲妥珠单抗共轭物可以通过促进选择性递送增加封装药物的治疗指数。
[0033]本专利技术还提供了天赐霉素免疫脂质体的体外细胞毒性数据，实验表明，天赐霉素免疫脂质体对肿瘤细胞具有良好的选择性。
[0034]本专利技术还提供了天赐霉素免疫脂质体的细胞摄取实验的数据，实验表明，曲妥珠单抗的偶联增加了免疫脂质体的内化。
[0035]本专利技术还提供了天赐霉素免疫脂质体在小鼠体内对乳腺癌的抗肿瘤效果，实验表明本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种天赐霉素免疫脂质体，其特征在于，所述免疫脂质体是以磷脂和胆固醇包覆天赐霉素，并用曲妥珠单抗修饰；所述磷脂为天然磷脂和聚乙二醇化的合成磷脂的组合。2.根据权利要求1所述的天赐霉素免疫脂质体，其特征在于，所述天然磷脂为大豆卵磷脂，所述聚乙二醇化的合成磷脂包括DSPE
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PEG
2000
和DSPE
‑
PEG
2000
‑
NHS。3.根据权利要求2所述的天赐霉素免疫脂质体，其特征在于，所述大豆卵磷脂、胆固醇、DSPE
‑
PEG
2000
、DSPE
‑
PEG
2000
‑
NHS、曲妥珠单抗和天赐霉素的摩尔比为(56
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58)：(39
‑
42)：(5
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10)：1：(0.02

【专利技术属性】
技术研发人员：段燕文，黄勇，冯雪琼，
申请(专利权)人：长沙天赐生物医药科技有限公司长沙慈航药物研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：