激活蛋白/TGF-β和RANKL的双功能拮抗剂及其用途制造技术

本发明专利技术公开内容提供了新颖的双功能分子，其包含至少一种RANKL结合分子和至少一种激活蛋白或TGF

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】激活蛋白/TGF
‑
β
和RANKL的双功能拮抗剂及其用途
[0001]相关专利申请
[0002]本申请要求于2020年11月15日提交的美国临时申请第63/113,922号和于2020年11月11日提交的美国临时申请第63/112,380号的权益，所述临时申请的每一项通过引用以其整体并入本文。

技术介绍

[0003]多种因素通过影响骨形成或骨吸收(resorption)来调节骨稳态。骨形成和骨吸收之间的平衡对于维持骨量和骨矿物质密度至关重要。失去这种平衡可能导致骨损失和骨紊乱的表现。
[0004]核因子
‑
κB配体受体激活因子(RANKL)信号传导途径通过刺激破骨细胞活性和增加骨吸收在骨量调节中起中心作用，尽管RANKL对成骨细胞活性和骨形成没有直接影响。
[0005]除了RANKL信号传导途径之外，激活蛋白/TGF
‑
β信号传导途径也能有效调节骨量。值得注意的是，激活蛋白/TGF
‑
β信号传导的激活不仅刺激破骨细胞活性和骨吸收，而且抑制成骨细胞活性和骨形成。因此，激活蛋白/TGF
‑
β信号传导途径具有调节骨吸收和骨形成两者的双重作用。最近的研究表明，激活蛋白/TGF
‑
β信号传导途径的体内药理学抑制明显降低骨吸收，并同时显著增加骨形成。
[0006]越来越多的证据表明，RANKL和激活蛋白/TGF
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β信号传导途径两者的活性在各种骨骼紊乱中增加，指示它们在骨紊乱的发病机制中有并行的贡献。
[0007]重要的是，RANKL信号传导途径或激活蛋白/TGF
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β信号传导途径的激活可以强烈诱导上皮
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间充质转化(EMT)，这是对转移至关重要的重塑过程。事实上，RANKL和激活蛋白/TGF
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β两者的表达水平已被示出在骨转移中升高，这表明增加的RANKL和激活蛋白/TGF
‑
β信号传导活性并行地起作用以驱动癌症中的骨转移疾病的发病机制和进展。
[0008]此外，肌肉质量(muscle mass)在保持骨健康方面起着重要作用。已示出，在诸如癌症恶病质、年龄相关性肌少症和神经肌肉疾病的萎缩性疾病状态(wasting disease states)中，肌肉萎缩与骨损失密切相关。最近的研究表明，RANKL信号传导的增加以及激活蛋白/TGF
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β信号传导的增加两者都可以引发肌肉损失。因此，抑制RANKL和激活蛋白/TGF
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β可以增强肌肉质量，并从而间接有利于骨健康。
[0009]因此，开发新颖的抑制RANKL信号传导和激活蛋白/TGF
‑
β信号传导两者的双功能抑制剂对于治疗骨紊乱具有重要意义。这样的新颖的双功能拮抗剂可以通过同时抑制两种主要疾病途径，在治疗某些骨紊乱诸如骨转移和骨脆性方面实现较好的疗效和较好的响应率。
[0010]专利技术的公开内容
[0011]在一方面，本专利技术提供了新颖的基于多肽的双功能拮抗剂，其被设计为以有效方式同时中和RANKL信号传导和激活蛋白/TGF
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β信号传导。在各种实施方案中，双功能拮抗剂分子被设计为如图1
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图5中描绘的。
[0012]在各种实施方案中，双功能拮抗剂分子是包含特异性结合RANKL的第一抗原结合
分子(“RANKL结合多肽”)和特异性结合激活蛋白配体的第二抗原结合分子(“激活蛋白结合多肽”)或特异性结合TGF
‑
β配体的第二抗原结合分子(“TGF
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β结合多肽”)的双功能多肽，其能够并行地隔离RANKL和激活蛋白或TGF
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β。在各种实施方案中，“RANKL结合多肽”选自能够结合RANKL的任何多肽，其包括但不限于抗RANKL抗体或抗RANKL抗体的片段、野生型骨保护素(OPG)以及修饰的OPG和噬菌体展示衍生的能够结合和隔离RANKL的多肽。在各种实施方案中，“激活蛋白结合多肽”选自能够结合激活蛋白(即，激活蛋白A、激活蛋白B或激活蛋白AB)和/或激活蛋白相关配体(即，GDF8或GDF11)的任何多肽，其包括但不限于抗激活蛋白抗体(包括抗激活蛋白A抗体和抗激活蛋白B抗体)、抗激活蛋白抗体的片段、野生型激活蛋白2A型受体(ActRIIA)或激活蛋白2B型受体(ActRIIB)细胞外结构域(ECD)、修饰的ActRIIA和ActRIIB细胞外结构域、野生型和修饰的天然激活蛋白结合蛋白，诸如卵泡抑素、卵泡抑素样蛋白和前肽，以及噬菌体展示衍生的靶向激活蛋白或激活蛋白相关配体的多肽。在各种实施方案中，“TGF
‑
β结合多肽”选自由以下组成的组：抗TGF
‑
β抗体、抗TGF
‑
β抗体的片段、野生型TGF
‑
β2型受体(包括TGFβRIIA和TGFβRIIB)细胞外结构域(ECD)、修饰的TGFβRIIA和TGFβRIIB细胞外结构域以及噬菌体展示衍生的靶向TGF
‑
β配体的拮抗多肽。
[0013]在各种实施方案中，双功能拮抗剂分子包含特异性结合RANKL的分离的抗体或其抗原结合片段，和特异性结合激活蛋白或激活蛋白相关配体或特异性结合TGF
‑
β配体的分离的抗体或其抗原结合片段。在各种实施方案中，分离的抗体或其抗原结合片段选自由以下组成的组：单克隆Ab(mAb)、多克隆Ab、Ab片段(例如，Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、Fv、Fc等)、嵌合Ab、微型
‑
Ab或结构域Ab(dAb)、双重特异性Ab、双特异性Ab、异源缀合Ab、单链Ab(SCA)、单链可变区片段(ScFv)、人源化Ab、完全人类Ab和包含具有所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白(Ig)分子的任何其他修饰构型。在各种实施方案中，双功能分子包含分离的抗体或其抗原结合片段，其选自由以下组成的组：完全人类抗体、人源化抗体和嵌合抗体。
[0014]在各种实施方案中，第二抗原结合分子特异性结合包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列的激活蛋白或激活蛋白相关配体。在各种实施方案中，第二抗原结合分子特异性结合包含SEQ ID NO:2中列出的氨基酸序列的激活蛋白或激活蛋白相关配体。在各种实施方案中，第二抗原结合分子特异性结合包含SEQ ID NO:3中列出的氨基酸序列的激活蛋白或激活蛋白相关配体。在各种实施方案中，第二抗原结合分子特异性结合包含SEQ ID NO:4中列出的氨基酸序列的激活蛋白或激活蛋白相关配体。在各种实施方案中，第二抗原结合分子特异性结合包含SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的激活蛋白或激活蛋白相关配体。在各种实施方案中，第二抗原结合分子特异性结合包含SEQ ID NO:6中列出的氨基酸序列的激活蛋白或激活蛋白相关配体。在各种实施方案中，第二抗原结合分子特异本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的双功能拮抗剂分子，所述分离的双功能拮抗剂分子包含特异性结合RANKL的第一抗原结合分子和特异性结合选自由激活蛋白或激活蛋白相关配体或TGF
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β配体组成的组的配体的第二抗原结合分子，其中所述双功能拮抗剂分子以有效方式同时中和激活蛋白或TGF
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β介导的Smad信号传导和RANKL介导的NFκB信号传导。2.根据权利要求1所述的分离的双功能拮抗剂分子，其中特异性结合RANKL的所述第一抗原结合分子(“RANKL结合多肽”)选自由以下组成的组：抗RANKL抗体或抗RANKL抗体的片段、野生型骨保护素(OPG)以及修饰的OPG和噬菌体展示衍生的能够结合和隔离RANKL的多肽；并且其中特异性结合激活蛋白或激活蛋白相关配体的所述第二抗原结合分子选自由以下组成的组：抗激活蛋白抗体(包括抗激活蛋白A抗体和抗激活蛋白B抗体)、抗激活蛋白抗体的片段、野生型激活蛋白2A型受体(ActRIIA)或激活蛋白2B型受体(ActRIIB)细胞外结构域(ECD)、修饰的ActRIIA和ActRIIB细胞外结构域、野生型和修饰的天然激活蛋白结合蛋白诸如卵泡抑素、卵泡抑素样蛋白和前肽以及噬菌体展示衍生的靶向激活蛋白或激活蛋白相关配体的多肽。3.根据权利要求1至2中任一项所述的分离的双功能拮抗剂分子，其中所述第二抗原结合分子特异性结合激活蛋白或激活蛋白相关配体，所述激活蛋白或激活蛋白相关配体选自由包含SEQ ID NO:1
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9中列出的氨基酸的激活蛋白或激活蛋白相关配体组成的组。4.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的双功能拮抗剂分子，其中所述激活蛋白结合分子选自包含SEQ ID NO:1
‑
17中列出的氨基酸序列的多肽的组。5.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的双功能拮抗剂分子，其中特异性结合RANKL的所述第一抗原结合分子(“RANKL结合多肽”)选自由以下组成的组：抗RANKL抗体或抗RANKL抗体的片段、野生型骨保护素(OPG)以及修饰的OPG和噬菌体展示衍生的能够结合和隔离RANKL的多肽；并且其中特异性结合TGF
‑
β配体的所述第二抗原结合分子(“TGF
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β结合多肽”)选自由以下组成的组：抗TGF
‑
β抗体、抗TGF
‑
β抗体的片段、野生型TGF
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β2型受体(包括TGFβRIIA和TGFβRIIB)细胞外结构域(ECD)、修饰的TGFβRIIA和TGFβRIIB细胞外结构域和噬菌体展示衍生的靶向TGF
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β配体的拮抗多肽。6.根据权利要求5所述的分离的双功能拮抗剂分子，其中所述第二抗原结合分子特异性结合TGF
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β配体，所述TGF
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β配体选自由包含SEQ ID NO:18
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19中列出的氨基酸序列的TGF
‑
β配体组成的组。7.根据权利要求5至6中任一项所述的分离的双功能拮抗剂分子，其中所述TGF
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β结合分子选自包含SEQ ID NO:18
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23中列出的氨基酸序列的多肽的组。8.根据权利要求1至7中任一项所述的分离的双功能拮抗剂分子，其中所述RANKL结合分子包含分离的抗RANKL抗体或其抗原结合片段，其中所述激活蛋白结合分子包含分离的抗激活蛋白抗体或其抗原结合片段，并且其中所述TGF
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β结合分子包含分离的抗TGF
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β抗体或其抗原结合片段。9.根据权利要求8所述的分离的双功能拮抗剂分子，其中所述分离的抗RANKL抗体或其抗原结合片段和分离的抗激活蛋白抗体或其抗原结合片段和分离的抗TGF
‑
β抗体或其抗原结合片段选自由以下组成的组：单克隆Ab(mAb)、多克隆Ab、Ab片段(例如，Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、Fv、Fc等)、嵌合Ab、微型
‑
Ab或结构域Ab(dAb)、双重特异性Ab、双特异性Ab、异源缀合Ab、单链Ab(SCA)、单链可变区片段(ScFv)、人源化Ab、完全人类Ab和包含具有所需特异性的抗
原识别位点的免疫球蛋白(Ig)分子的任何其他修饰构型。10.根据权利要求8至9中任一项所述的分离的双功能拮抗剂分子，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段选自由以下组成的组：完全人类抗体、人源化抗体和嵌合抗体。11.根据权利要求8至10中任一项所述的分离的双功能拮抗剂分子，其中所述RANKL结合分子是选自由以下组成的组的分离的抗体：包含SEQ ID NO:24中列出的重链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:25中列出的轻链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:24中列出的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:25中列出的轻链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:26中列出的重链可变区氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:27中列出的轻链可变区氨基酸序列的抗体；以及包含SEQ ID NO:26中列出的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:27中列出的轻链可变区氨基酸序列的抗体。12.根据权利要求8至11中任一项所述的分离的双功能拮抗剂分子，其中所述激活蛋白结合分子是选自由以下组成的组的分离的抗体：包含SEQ ID NO:10中列出的重链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:11中列出的轻链氨基酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩汇泉，周小岚，
申请(专利权)人：周小岚，
类型：发明
国别省市：