促进骨成长的约氏乳杆菌JYLO-010及菌剂、应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种促进骨成长的约氏乳杆菌JYLO

【技术实现步骤摘要】
促进骨成长的约氏乳杆菌JYLO
‑
010及菌剂、应用


[0001]本专利技术涉及微生物应用
，具体涉及一种促进骨成长的约氏乳杆菌JYLO
‑
010及菌剂、应用。

技术介绍

[0002]幼儿生长期间骨骼发育较快，如果存在缺钙，会影响骨骼的发育，一般通过食用含钙量高的食物或者喝含钙口服液进行补钙，然而这些钙只有小部分会被身体吸收，大部分会被排出体外，吸收率较低。目前促进儿童骨成长的方法包括以下几种：一、进行适当运动：通过弹跳、跳跃等运动可以刺激骨头发育，从而促进儿童骨生长。二、保持充足的睡眠：骨头主要在夜间时生长，且生长激素在夜间时分泌比较多，保持充足的睡眠、养成早睡早起的好习惯可以促进儿童骨生长。三、通过在儿童奶粉中添加蛋白质、维生素、矿物质等物质实现促进儿童骨成长的目的。目前市面上大多数的促进骨成长的保健品由多种营养物质复配而成，由于缺乏儿童对这些营养物质的吸收率和利用率较低，其促进骨骼成长发育的效果并不显著。
[0003]随着人们对骨骼成长发育研究的日益加深，发现肠道益生菌对于骨骼成长发育具有一定的促进作用。益生菌在肠道内产生的短链脂肪酸可以降低肠道的环境pH值，减少肠道中的钙与磷形成化合物，从而促进钙的吸收；益生菌刺激肠道细胞产生的肠促胰素，肠促胰素包括一系列由肠道分泌，具有葡萄糖浓度依赖性促进胰岛素分泌作用的激素，包括葡萄糖依赖促胰肽（GIP）和胰高血糖素样肽1（GLP
‑
1），也可以促进钙吸收和骨形成。因此，开发肠道益生菌、研制益生菌类促成长产品逐渐成为研究热点。

技术实现思路

[0004]针对市面上促进儿童骨成长的产品效果不显著的问题，本专利技术提供一种促进骨成长的约氏乳杆菌JYLO
‑
010及菌剂、应用。约氏乳杆菌JYLO
‑
010能够显著提高体内维生素D含量、促进肠道对钙的吸收以及增加股骨骨密度的能力，能够通过提高体内维生素D含量、钙含量和骨密度水平来实现促进儿童骨骼发育的效果。
[0005]第一方面，本专利技术提供一种促进骨成长的约氏乳杆菌JYLO
‑
010，约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）JYLO
‑
010于2022年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.24538，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0006]第二方面，本专利技术提供一种约氏乳杆菌JYLO
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010菌剂，包括上述约氏乳杆菌JYLO
‑
010的菌体。
[0007]进一步的，制备方法具体包括以下步骤：（1）制备MRS液体培养基和MRS平板培养基；（2）取保藏的约氏乳杆菌JYLO
‑
010在MRS平板培养基上活化，将活化后菌接种于MRS液体培养基中培养，获得菌液；
（3）将菌液离心后，收集菌体，使用无菌生理盐水洗涤后，重悬于质量浓度为15%的复原脱脂乳中，获得悬浊液；调整悬浊液浓度，获得菌悬液，将菌悬液冷冻干燥后，获得菌粉；（4）将菌粉与低聚异麦芽糖混合，制成菌剂。
[0008]进一步的，步骤（1）中，制备MRS液体培养基的方法为：将蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g、蒸馏水1000mL混合后，用HCl调pH至6.8，搅拌混匀后，在121℃、0.1MPa下灭菌20min，即可。
[0009]进一步的，步骤（2）中，活化后菌接种于MRS液体培养基的接种量为1%~2%。
[0010]进一步的，步骤（2）中，培养温度为35~38℃，培养时间为24~36h。
[0011]进一步的，步骤（3）中，调整悬浊液浓度为1.0
×
10
10
~2.0
×
10
10
cfu/mL。
[0012]第三方面，本专利技术提供一种上述约氏乳杆菌JYLO
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010在制备促进儿童骨成长的产品中的应用。
[0013]本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的约氏乳杆菌JYLO
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010能够显著提高小鼠体内的25
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羟基维生素D含量，进而促进小鼠对钙的表观吸收率。检测结果表明，服用约氏乳杆菌JYLO
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010菌剂能够显著提高小鼠的股骨骨密度。进一步地，经试验验证，约氏乳杆菌JYLO
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010可以有效促进成骨细胞的增殖、分化和成熟并抑制破骨细胞形成。因此，约氏乳杆菌JYLO
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010对于制备促进儿童骨成长的产品方面具有重要意义。
具体实施方式
[0014]为了使本
的人员更好地理解本专利技术中的技术方案，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0015]实施例1 菌种的分离鉴定1、菌株筛选及纯化（1）菌株来源：2017年10月于云南曲靖农民自制泡菜采集样品，放入样品转运箱中带回实验室备用。
[0016]（2）制备样品：
①
取灭菌后的生理盐水（0.85%）至于无菌三角瓶中，然后将步骤（1）采集的样品1g加入其中，振荡，待用；
②
对步骤
①
的溶液稀释制成不同浓度梯度的样品，分别为10
‑1、10
‑2、10
‑3、10
‑4、10
‑5、10
‑6、10
‑7，标号分别为1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#，待用。
[0017]（3）制备MRS平板培养基：蛋白胨10g、牛肉粉 5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g、琼脂15g、蒸馏水1000mL；将上述原料混合后，自然pH，搅拌菌液后，在121℃、0.1MPa下灭菌20min，将灭菌后的培养基倒入平皿中，放凉后待用。
[0018]（4）培养菌株：将1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#号溶液分别使用涂布器涂布在MRS平板培养基中，于37℃、厌氧条件下培养48h；（5）按照以下菌落特征挑选菌落：直径1~2mm，菌落圆润、边缘整齐、微白色中间有凸起，溶钙圈较大，并选择过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的菌株。
[0019]（6）分离纯化根据步骤（5）的菌落和生化特征挑取5个单菌落，采用划线法接种至MRS平板培养基上纯化2~3次，于37℃、厌氧条件下培养48h，挑取单菌落，置于甘油管中
‑
80℃保藏。
[0020]2、鉴定将分离纯化后得到的单菌落送去鉴定，鉴本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种促进骨成长的约氏乳杆菌JYLO
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010，其特征在于，约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）JYLO
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010于2022年3月17日保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.24538，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。2.一种约氏乳杆菌JYLO
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010菌剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的约氏乳杆菌JYLO
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010的菌体。3.如权利要求2所述的约氏乳杆菌JYLO
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010菌剂，其特征在于，制备方法具体包括以下步骤：（1）制备MRS液体培养基和MRS平板培养基；（2）取保藏的约氏乳杆菌JYLO
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010在MRS平板培养基上活化，将活化后菌接种于MRS液体培养基中培养，获得菌液；（3）将菌液离心后，收集菌体，使用无菌生理盐水洗涤后，重悬于质量浓度为15%的复原脱脂乳中，获得悬浊液；调整悬浊液浓度，获得菌悬液，将菌悬液冷冻干燥后，获得菌粉；（4）将菌粉与低聚异麦芽糖混合，制成菌剂。4. 如权利要求3所述的约氏乳杆菌JYLO
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【专利技术属性】
技术研发人员：潘玉林，田华，姜能凯，王丽媛，郄璐，王雪娇，
申请(专利权)人：山东中科嘉亿生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：