一种复合微生物菌剂及其在水稻促生抗病降镉中的应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，公开了一种复合微生物菌剂及其在水稻促生抗病降镉中的应用。本发明专利技术所述复合微生物菌剂由保藏编号为CCTCC NO:M 20221980的贝莱斯芽孢杆菌20

【技术实现步骤摘要】
一种复合微生物菌剂及其在水稻促生抗病降镉中的应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，公开了一种复合微生物菌剂及其在水稻促生抗病降镉中的应用。

技术介绍

[0002]水稻作为我国第一大粮食作物，约占粮食总产量的40％，其产量的高低直接关系着国家的粮食安全。施肥是提高水稻单位面积产量的重要措施之一。化肥的施用对我国农业的发展功不可没，但过量及长期不合理使用化肥导致了很多环境问题的出现，如土壤中重金属元素富集、土壤生物多样性被破坏和耕地肥力退化等。随着人们对绿色无公害食品日益增长的需要以及农业生态环境保护的要求，微生物菌剂及微生物肥料的研究开发和应用越来越受到重视。许多研究表明，微生物菌剂和微生物菌肥在生物防治、土壤改良、促进作物营养吸收、增强植物健康水平、提高作物产量和品质等方面发挥了积极作用。
[0003]农用微生物菌剂主要分单一菌剂和复合菌剂，单一菌剂是由一种功能微生物制成；复合菌剂是由两种或以上的有益微生物组成。常使用的微生物包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、细黄链霉菌、绿色木霉、哈茨木霉、菌根真菌等。与单一菌剂相比，复合菌剂通常会具有一定的协同作用，具有种类更多样、定殖水平更高且功能更齐全等优点，能更好地影响植株的生理代谢活动。目前，有关用于水稻抗病、促生和降镉的多功能复合菌剂的报道极少，而水稻作为重要的粮食作物，对多功能复合菌剂的需求较大。因此，本专利技术以水稻为研究对象，期望能够挖掘在增产、防治水稻稻瘟病和降米镉方面具有显著效果的微生物复合菌剂。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术的缺陷，本专利技术将来源、特性和功能不同的微生物有机组合，通过基质育苗试验筛选获得对水稻幼苗具有明显促生效应的复合微生物菌剂(20
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10+Ahn65)。田间小区试验显示复合菌剂(20
‑
10+Ahn65)处理能增产19.35％，对稻瘟病最高防效为56.74％，米镉降低率最高可达26.42％，均显著高于单一菌剂的增产、抗病和降镉效果，体现了微生物菌群的协同增效作用。复合微生物菌剂(20
‑
10+Ahn65)绿色环保，对人畜无害，其增产、抗病和降镉效果显著，可用于新型微生物药肥的开发与应用。
[0005]本专利技术的首要目的是提供一种复合微生物菌剂，
[0006]所述复合微生物菌剂包括贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)和链霉菌(Streptomyces sp.)两种微生物。
[0007]进一步地，具体采用的贝莱斯芽孢杆菌20
‑
10的分类命名为Bacillus velezensis，其保藏编号为CCTCC NO:M 20221980，保藏日期为2022年12月19日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏单位地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内；链霉菌Ahn65的分类命名为Streptomyces sp.，其保藏编号为CCTCC NO:M20221981，保藏日期为2022年12月19日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保
藏单位地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。
[0008]所述的复合微生物菌剂采用贝莱斯芽孢杆菌20
‑
10的发酵液和链霉菌Ahn65的孢子悬浮液混合配制，获得的复合微生物菌剂中贝莱斯芽孢杆菌20
‑
10的活菌数为1
×
10
10
～5
×
10
10
CFU/mL，链霉菌Ahn65孢子的浓度为1
×
10
10
～5
×
10
10
CFU/mL。
[0009]进一步地，贝莱斯芽孢杆菌20
‑
10的发酵液和链霉菌Ahn65的孢子悬浮液等比例配制完成。
[0010]本专利技术的第二个目的是提供一种上述的复合生物菌剂的制备方法，包括步骤：将贝莱斯芽孢杆菌20
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10和链霉菌Ahn65分别进行培养，以获得贝莱斯芽孢杆菌20
‑
10的发酵液和链霉菌Ahn65的孢子粉，链霉菌Ahn65的孢子粉用0.05％吐温80水溶液进行悬浮制得孢子悬浮液，随后将贝莱斯芽孢杆菌20
‑
10的发酵液和链霉菌Ahn65的孢子悬浮液分别稀释至预定浓度后按1:1的比例进行配制，获得所述复合微生物菌剂。
[0011]进一步地，所述贝莱斯芽孢杆菌20
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10培养过程中所用的发酵种子液培养基配方：氯化钠10g/L，胰蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，pH值为7.2，即LB培养基配方；发酵培养基配方：淀粉20g/L，甘露醇1g/L，黄豆粉10g/L，蛋白胨2g/L，氯化钠2g/L，七水硫酸镁0.5g/L，pH值为7.2。
[0012]进一步地，所述链霉菌培养过程中所用的液体培养基配方：麦芽提取物10g/L，酵母粉4g/L，葡萄糖4g/L，pH值为7.2，即Isp2培养基配方；固体培养基配方：甘露醇20g/L，大豆粉20g/L，琼脂20g/L，pH值为7.2，具体地，所述配方为MS平板配方。
[0013]进一步地，所述贝莱斯芽孢杆菌20
‑
10培养方法具体步骤包括：将贝莱斯芽孢杆菌20
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10在平板上划线活化，30℃恒温培养箱中培养12～18h，待长出单菌落以后，挑取单菌落接种于LB种子培养基中，于30℃、180rpm/min条件下振荡培养过夜，制成种子液；将种子液按2％接种量接种至发酵培养基中，30℃、180rpm/min条件下振荡培养3d，获得贝莱斯芽孢杆菌20
‑
10的发酵液。
[0014]进一步地，所述链霉菌Ahn65培养方法及其孢子悬浮液制备方法具体步骤包括：挑取新鲜的Ahn65分生孢子转接至液体Isp2培养基中，28℃、180rpm/min振荡培养过夜，用移液枪取200μl振荡培养过夜的菌液转移至MS平板上，涂布均匀后置于28℃恒温培养箱中倒置培养5～7天，用称量勺刮取孢子粉至无菌的50mL离心管中，加入浓度为0.05％的吐温80水溶液进行悬浮获得链霉菌Ahn65的孢子悬浮液。
[0015]更进一步地，分别将贝莱斯芽孢杆菌20
‑
10的发酵液和链霉菌Ahn65的孢子悬浮液稀释至预定浓度后按1:1的比例均匀混合复配，获得所述复合微生物菌剂；配制完成后，复合微生物菌剂中贝莱斯芽孢杆菌20
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10的活菌数和链霉菌Ahn65的孢子浓度均可达1
×
10
10
～5
×
10
10
CFU/mL。
[0016]本专利技术的第三个目的是提供一种上述的复合微生物菌剂在促进水稻生长和/或防治水稻病害和/或降低稻米重金属含量中的应用。
[0017]进一步地，所述促进水稻生长包括增加水稻幼苗的根长、茎长本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌剂包括贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)和链霉菌(Streptomyces sp.)两种微生物。2.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌为20
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10，其保藏编号为：CCTCC NO:M 20221980；所述链霉菌为Ahn65，其保藏编号为：CCTCC NO:M 20221981。3.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于，采用贝莱斯芽孢杆菌20
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10的发酵液和链霉菌Ahn65的孢子悬浮液混合配制，获得的复合微生物菌剂中贝莱斯芽孢杆菌20
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10的活菌数为1
×
10
10
～5
×
10
10
CFU/mL，链霉菌Ahn65孢子的浓度为1
×
10
10
～5
×
10
10
CFU/mL。4.根据权利要求3所述的复合微生物菌剂，其特征在于，将贝莱斯芽孢杆菌20
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10的发酵液和链霉菌Ahn65的孢...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡展，杨华，肖蓉，付祖姣，程伟，伍善东，刘朱东，张敏，郭照辉，单世平，
申请(专利权)人：湖南省微生物研究院，
类型：发明
国别省市：