一种凝血酶抗凝血酶复合物检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种凝血酶抗凝血酶复合物检测试剂盒。本发明专利技术公开了两种单克隆抗体，一种单克隆抗体不与凝血酶原、凝血酶反应，但与TAT、AT

【技术实现步骤摘要】
一种凝血酶抗凝血酶复合物检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种凝血酶抗凝血酶复合物检测试剂盒。

技术介绍

[0002]血栓是一种严重的疾病，其发生发展过程极其复杂，内皮细胞、凝血系统、抗凝系统和纤溶系统都参与了这一过程。早期针对血栓的诊断主要以一些常见的凝血指标为主，然而，这些参数主要涉及血栓形成后的后期筛查，指标出现异常时，疾病已进入中后期，失去了最佳治疗时机。而现有研究已经证实机体处于血栓前状态时，血管内皮系统、凝血系统和纤溶系统已经发生改变，凝血酶抗凝血酶复合物(Thrombin
‑
antithrombin,TAT)、纤溶酶
‑
a2纤溶酶抑制剂复合物(plasmin
‑
a2
‑
plasmininhibitor,PIC)、血栓调节蛋白((Thrombomodulin,TM)和组织纤溶酶原激活物
‑
纤溶酶原激活物抑制剂1复合物(tissue plasminogen activator inhibitor1 complex,tPAIC)是反应机体血管内皮、凝血和纤溶系统早期改变的有效生物标志物，适用于各临床学科血栓高危人群的早期诊断、风险评估和治疗疗效评价及健康人群血栓风险筛查,对不同基础疾病的血栓患者具有良好的诊断和预后价值。
[0003]TAT是凝血酶和抗凝血酶Ⅲ(AT
ꢀⅢ
)形成的复合物，凝血酶的生成是静脉血栓形成的关键环节，它主要作用于纤维蛋白原使之形成纤维蛋白，进而导致血栓的生成。体内生成极少量凝血酶(thrombinT)很快会被抗凝血酶
‑
III(antithrombin
‑
III,AT
‑
III)以1:1的比例结合生成TAT复合物而灭活，以维持内环境的稳定，单纯的检测凝血酶很难检测，因其半衰期较短，由此认为血浆TAT水平可以间接反映凝血酶的生成量，来衡量体内的高凝状态。而TAT的血液半衰期为3～15分钟而能够测定，正常参考区间为0
‑
4ng/mL。
[0004]性能优良的单克隆抗体对于TAT的检测至关重要，但目前国内缺乏TAT单克隆抗体的研究，而且TAT在正常人群中含量在0
‑
4ng/mL，凝血酶与凝血酶原在一段氨基酸序列中一致，且凝血酶原与AT
‑
III在血液当中含量是TAT复合物的上千倍，因此极易对TAT检测产生干扰。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种凝血酶抗凝血酶复合物检测试剂盒，能够实现凝血酶抗凝血酶复合物的特异准确的检测，且不会产生交叉反应。
[0006]本专利技术通过研究发现要完成TAT的准确检测，需要制备出两种单克隆抗体。
[0007]一种单克隆抗体不与凝血酶原、凝血酶反应，但与TAT、AT
‑
III反应；
[0008]一种单克隆抗体不与AT
‑
III，但与凝血酶原、凝血酶、TAT反应；
[0009]这两种抗体测定TAT时添加凝血酶原不影响两个抗体对TAT的检测。
[0010]因此，本专利技术的目的在于提供能够特异性识别TAT并且与TAT显示出高亲和力的单克隆抗体，并且进一步提供使用这些单克隆抗体测量TAT的方法。
[0011]本专利技术具体实现如下：一种凝血酶抗凝血酶复合物检测试剂盒，包括用于检测凝
血酶抗凝血酶复合物的第一抗体和第二抗体，
[0012]其中所述第一抗体结合所述凝血酶抗凝血酶复合物的抗凝血酶Ⅲ部分，所述第二抗体结合所述凝血酶抗凝血酶复合物的抗凝血酶部分。
[0013]更进一步地，所述第一抗体结合所述凝血酶抗凝血酶复合物的抗凝血酶Ⅲ中17
‑
30和/或340
‑
350之间的片段，所述第二抗体结合所述凝血酶抗凝血酶复合物的抗凝血酶中的240
‑
260和/或12
‑
30之间的片段。
[0014]进一步地，所述第一抗体具有如下互补决定区：
[0015]CDR
‑
VH1：D
‑
Y
‑
X1
‑
M
‑
X2，其中X1是A或N，X2是N或Y；
[0016]CDR
‑
VH2：Y
‑
I
‑
E
‑
X1
‑
Y
‑
D
‑
G
‑
X2
‑
T
‑
S
‑
Y
‑
N
‑
Q
‑
K
‑
X3
‑
K
‑
G，其中X1是I或P，X2是G或S，X3是F或L；
[0017]CDR
‑
VH3：D
‑
X1
‑
D
‑
R
‑
D
‑
R
‑
V
‑
X2
‑
Y，其中X1是Y、K或A，X2是D；
[0018]CDR
‑
VL1：S
‑
A
‑
S
‑
X1
‑
N
‑
V
‑
X2
‑
Y
‑
M
‑
H，其中X1是Q或S，X2是R、S或N；
[0019]CDR
‑
VL2：X1
‑
T
‑
S
‑
N
‑
L
‑
X2
‑
S，其中X1为T或Y，X2是H或A；
[0020]CDR
‑
VL3：Q
‑
Q
‑
X1
‑
S
‑
S
‑
Y
‑
P
‑
X2
‑
T，其中X1是Y或R，X2是P或L。
[0021]或
[0022]所述第二抗体具有如下互补决定区：
[0023]CDR
‑
VH1：X1
‑
D
‑
Y
‑
A
‑
X2
‑
N，其中X1是S或T，X2是M或W；
[0024]CDR
‑
VH2：X1
‑
I
‑
S
‑
Y
‑
S
‑
X2
‑
S
‑
T
‑
S
‑
Y
‑
N
‑
X3
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种凝血酶抗凝血酶复合物检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测凝血酶抗凝血酶复合物的第一抗体和第二抗体，其中所述第一抗体结合所述凝血酶抗凝血酶复合物的抗凝血酶Ⅲ部分，所述第二抗体结合所述凝血酶抗凝血酶复合物的抗凝血酶部分。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体结合所述凝血酶抗凝血酶复合物的抗凝血酶Ⅲ中17
‑
30和/或340
‑
350之间的片段，所述第二抗体结合所述凝血酶抗凝血酶复合物的抗凝血酶中的240
‑
260和/或12
‑
30之间的片段。3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，其中所述第一抗体具有如下互补决定区：CDR
‑
VH1：D
‑
Y
‑
X1
‑
M
‑
X2，其中X1是A或N，X2是N或Y；CDR
‑
VH2：Y
‑
I
‑
E
‑
X1
‑
Y
‑
D
‑
G
‑
X2
‑
T
‑
S
‑
Y
‑
N
‑
Q
‑
K
‑
X3
‑
K
‑
G，其中X1是I或P，X2是G或S，X3是F或L；CDR
‑
VH3：D
‑
X1
‑
D
‑
R
‑
D
‑
R
‑
V
‑
X2
‑
Y，其中X1是Y、K或A，X2是D；CDR
‑
VL1：S
‑
A
‑
S
‑
X1
‑
N
‑
V
‑
X2
‑
Y
‑
M
‑
H，其中X1是Q或S，X2是R、S或N；CDR
‑
VL2：X1
‑
T
‑
S
‑
N
‑
L
‑
X2
‑
S，其中X1为T或Y，X2是H或A；CDR
‑
VL3：Q
‑
Q
‑
X1
‑
S
‑
S
‑
Y
‑
P
‑
X2
‑
T，其中X1是Y或R，X2是P或L；或所述第二抗体具有如下互补决定区：CDR
‑
VH1：X1
‑
D
‑
Y
‑
A
‑
X2
‑
N，其中X1是S或T，X2是M或W；CDR
‑
VH2：X1
‑
I
‑
S
‑
Y
‑
S
‑
X2
‑
S
‑
T
‑
S
‑
Y
‑
N
‑
X3
‑
S
‑
L
‑
K
‑
S，其中X1是F或Y，X2是G或D，X3是Q或P；CDR
‑
VH3：A
‑
K
‑
X1
‑
A
‑
X2
‑
A
‑
Y，其中X1是R或D，X2是V或M；CDR
‑
VL1：S
‑
A
‑
S
‑
Q
‑
X1
‑
I
‑
S
‑
N
‑
Y
‑
L
‑
X2，其中X1是A，X2是N或H；CDR
‑
VL2：Y
‑
X1
‑
S
‑
X2
‑
L
‑
H
‑
S，其中X1是T或Y，X2是N或S；CDR
‑
VL3：Q
‑
Q
‑
Y
‑
S
‑
X1
‑
X2
‑
P
‑
L
‑
T，其中X1是S或K，X2是L或Y。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体的CDR
‑
VH1中X2是Y，CDR
‑
VH2种X1是P，CDR
‑
VH3种X2是D，CDR
‑
VL1种X1是S，CDR
‑
VL2中X2是A，CDR
‑
VL3中X1是R；或所述第二抗体的CDR
‑
VH1中X2是W，CDR
‑
VH2种X1是Y，CDR
‑
VH3种X2是M，CDR
‑
VL1种X1是A，CDR
‑
VL2中X2是S，CDR
‑
VL3中X1是K；优选的，所述第一抗体的CDR
‑
VH1中X1是A；优选的，所述第一抗体的CDR
‑
VH1中X1是N；优选的，所述第一抗体的CDR
‑
VH1中X2是N；优选的，所述第一抗体的CDR
‑
VH1中X2是Y；优选的，所述第一抗体的CDR
‑
VH2中X1是I；优选的，所述第一抗体的CDR
‑
VH2中X1是P；优选的，所述第一抗体的CDR
‑
VH2中X2是G；优选的，所述第一抗体的CDR
‑
VH2中X2是S；优选的，所述第一抗体的CDR
‑
VH2中X3是F；
优选的，所述第一抗体的CDR
‑
VH2中X3是L；优选的，所述第一抗体的CDR
‑
VH3中X1是Y；优选的，所述第一抗体的CDR...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋会会，李伯宏，边颖，易维京，赵忠颢，
申请(专利权)人：重庆艾生斯生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：