一种细胞浓缩洗涤置换方法技术

本申请公开了一种细胞浓缩洗涤置换方法，涉及细胞处理技术领域。包括浓缩阶段与洗涤置换阶段，均采用一进两出的离心杯，离心杯设有内口、外口和中心口；浓缩阶段包括以下步骤：将待浓缩细胞液从内口泵入离心杯内进行一段浓缩，从中心口排废液，从外口排中间浓缩细胞液；将中间浓缩细胞液再次泵入离心杯内进行二段浓缩，得到浓缩细胞液；洗涤置换阶段包括以下步骤：将浓缩细胞液从内口泵入离心杯内，再将第一洗涤液从外口连续泵入离心杯内并将离心杯填满后，从中心口将第一洗涤液排出，进行连续洗涤置换；对离心杯进行混匀，再离心分离，得到集中在离心杯外层的细胞液和集中在离心杯内层的洗涤废液；减容排洗涤废液，得细胞产品液。液。液。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞浓缩洗涤置换方法


[0001]本申请涉及细胞处理
，特别涉及一种细胞浓缩洗涤置换方法。

技术介绍

[0002]当细胞培养完成时，需要对培养后的细胞液进行“浓缩”、“洗涤”等处理，来清除细胞液中多余的培养基、代谢废液等。目前的细胞制备自动浓缩洗涤方法通常基于离心杯来实现，离心杯通常为活塞式离心杯或是1进1出的离心杯，但在进行浓缩洗涤时往往存在一定的问题。基于活塞式离心杯进行细胞浓缩洗涤时，其不能实现连续的进液出液浓缩流程，需要进液浓缩完成后再排废液，当需要浓缩的目标细胞液量较大时，就要进行多个循环，浓缩处理效率相对较低，不适用于大体积浓缩处理，且长时间离心对细胞活性也有较大影响；而基于1进1出的离心杯进行细胞浓缩洗涤时，不能实现减容的同时再连续流洗涤置换，洗涤效率较低，洗涤过程中也容易对细胞造成损伤。因此，本申请提出一种细胞浓缩洗涤置换方法以解决上述技术问题。

技术实现思路

[0003]本申请的主要目的是提供一种细胞浓缩洗涤置换方法，旨在解决现有的细胞浓缩洗涤置换方法效率低下的技术问题。
[0004]为实现上述目的，本申请提出了一种细胞浓缩洗涤置换方法，包括浓缩阶段与洗涤置换阶段，所述浓缩阶段和所述洗涤置换阶段均采用一进两出的离心杯，所述离心杯设有内口、外口和中心口；
[0005]所述浓缩阶段包括以下步骤：
[0006]S11、将待浓缩细胞液从所述内口泵入所述离心杯内，进行一段浓缩并从所述中心口排废液，同时从所述外口排出中间浓缩细胞液；
[0007]S12、将所述中间浓缩细胞液再次泵入所述离心杯内进行二段浓缩，得到浓缩细胞液；
[0008]所述洗涤置换阶段包括以下步骤：
[0009]S21、将所述浓缩细胞液从所述内口泵入所述离心杯内，再将第一洗涤液从所述外口连续泵入所述离心杯内并将所述离心杯填满后，从所述中心口将所述第一洗涤液排出，进行连续洗涤置换；
[0010]S22、连续洗涤置换后，对所述离心杯进行混匀，再通过离心分离，得到集中在所述离心杯外层的细胞液和集中在所述离心杯内层的洗涤废液；
[0011]S23、离心分离后，进行减容，排出所述洗涤废液，即得细胞产品液。
[0012]可选地，所述将待浓缩细胞液从所述内口泵入所述离心杯内，进行一段浓缩并从所述中心口排废液，同时从所述外口排出中间浓缩细胞液的步骤，包括：
[0013]S111、将样品袋内的待浓缩细胞液从所述内口泵入所述离心杯内，所述离心杯内的气体从所述中心口排出；
[0014]S112、所述离心杯填满后，继续从所述内口泵入待浓缩细胞液，通过离心分离，得到集中在所述离心杯外层的中间浓缩细胞液和集中在所述离心杯中心层的废液；
[0015]S113、将所述废液从所述中心口泵出至废液袋，同时将所述中间浓缩细胞液从所述外口排至中间袋。
[0016]可选地，所述将所述废液从所述中心口泵出至废液袋过程中，还包括：
[0017]S114、从所述内口泵出废液，将管路中残留的待浓缩细胞液回推至样品袋，同时空气通过无菌过滤器后经所述中心口进入所述离心杯内，使废液能够从所述中心口排出。
[0018]可选地，在步骤S11之后、步骤S12之前，还包括：
[0019]S115、将所述离心杯杯壁残留的细胞摇下并与所述中间浓缩细胞液混合。
[0020]可选地，在大体积待浓缩细胞液进行一段浓缩处理时，还包括：
[0021]S116、在一段浓缩进行过程中，将所述离心杯内液体彻底清空至所述中间袋，再重复进行步骤S111
‑
步骤S115。
[0022]可选地，在步骤S11之后、步骤S12之前，还包括：
[0023]S117、将洗涤液加入所述样品袋中并对所述样品袋内残留细胞进行清洗，并将清洗后的液体从所述内口泵入所述离心杯内进行浓缩，再从所述中心口排废液至所述废液袋，同时从所述外口排出中间浓缩细胞液至所述中间袋；
[0024]所述一段浓缩包括多次浓缩循环，非最后一次浓缩循环时，重复进行步骤S111
‑
步骤S116；最后一次浓缩循环时，进行步骤S117。
[0025]可选地，在步骤S12之后，还包括：
[0026]将洗涤液加入所述中间袋内并对所述中间袋内残留细胞进行清洗，并将清洗后的液体再次泵入所述离心杯内进行二段浓缩，浓缩结束后，得到浓缩细胞液。
[0027]可选地，所述离心分离后，进行减容，排出所述洗涤废液的步骤，包括：
[0028]将所述洗涤废液从所述内口排出，所述离心杯内保留集中在所述离心杯外层的细胞液。
[0029]可选地，所述将所述洗涤废液从所述内口排出，所述离心杯内保留集中在所述离心杯外层的细胞液步骤后，还包括：
[0030]将第二洗涤液从所述外口连续泵入所述离心杯内并将所述离心杯填满后，从所述中心口将所述第二洗涤液排出，进行连续洗涤置换；
[0031]重复进行步骤S22
‑
步骤S23，得到细胞产品液。
[0032]可选地，步骤S23之后，还包括：
[0033]将所述离心杯杯壁残留的细胞摇下并与所述细胞产品液混合。
[0034]本申请通过一进两出的离心杯来实现细胞的浓缩洗涤置换，浓缩阶段首先将待浓缩细胞液从内口泵入离心杯内，进行一段浓缩，以便于排除废液，提高细胞的纯度，由于废液中主要为多余的培养基、代谢废液等，细胞密度相对废液大，故而待浓缩细胞液由于密度差异在离心力下分层，细胞往离心杯外层聚集，而废液密度相对细胞低，往离心杯中心聚集，故而从中心口排废液，从外口排出中间浓缩细胞液，通过在浓缩离心过程中排出细胞液，防止细胞因长时间受离心力贴壁而影响细胞活性，且在浓缩时排细胞液，不中断离心分离过程，也不影响离心分离效率；再将中间浓缩细胞液再次泵入离心杯内进行二段浓缩，以进一步排除废液，提高细胞的纯度，故而本申请的连续流浓缩处理可一边进待浓缩细胞液，
一边排废液，同时排出细胞液，可较大程度上提升浓缩处理效率，降低细胞的离心时间，解决长时间离心力对细胞活性的影响问题，对于大体积细胞液的浓缩处理也能适用；洗涤置换阶段首先将浓缩细胞液从内口泵入离心杯内，再将第一洗涤液从外口连续泵入离心杯内并将离心杯填满后，从中心口将第一洗涤液排出，进行连续洗涤置换，浓缩细胞液位于离心杯内层，第一洗涤液从外口进入离心杯，使得第一洗涤液从离心杯外层穿过细胞层到离心杯中心层，能够将细胞层充分穿透，第一洗涤液装满离心杯后，从离心杯中心口排出，实现连续流洗涤置换过程；再通过离心机启停控制，使第一洗涤液与细胞液充分混合均匀，达到对残留培养基均匀稀释的目的；再对混匀后的第一洗涤液与细胞液的混合液体进行离心分离，使细胞液集中在离心杯外层，洗涤废液集中在离心杯内层，再从内口排出分层后的洗涤废液，离心杯内保留集中在离心杯外层的细胞液，从而实现了在连续流洗涤的基础上再进一步减容排废液，通过尽可能多地排出废液，提高细胞的纯度，提高稀释比例，从而本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞浓缩洗涤置换方法，包括浓缩阶段与洗涤置换阶段，其特征在于，所述浓缩阶段和所述洗涤置换阶段均采用一进两出的离心杯，所述离心杯设有内口、外口和中心口；所述浓缩阶段包括以下步骤：S11、将待浓缩细胞液从所述内口泵入所述离心杯内，进行一段浓缩并从所述中心口排废液，同时从所述外口排出中间浓缩细胞液；S12、将所述中间浓缩细胞液再次泵入所述离心杯内进行二段浓缩，得到浓缩细胞液；所述洗涤置换阶段包括以下步骤：S21、将所述浓缩细胞液从所述内口泵入所述离心杯内，再将第一洗涤液从所述外口连续泵入所述离心杯内并将所述离心杯填满后，从所述中心口将所述第一洗涤液排出，进行连续洗涤置换；S22、连续洗涤置换后，对所述离心杯进行混匀，再通过离心分离，得到集中在所述离心杯外层的细胞液和集中在所述离心杯内层的洗涤废液；S23、离心分离后，进行减容，排出所述洗涤废液，即得细胞产品液。2.根据权利要求1所述的细胞浓缩洗涤置换方法，其特征在于，所述将待浓缩细胞液从所述内口泵入所述离心杯内，进行一段浓缩并从所述中心口排废液，同时从所述外口排出中间浓缩细胞液的步骤，包括：S111、将样品袋内的待浓缩细胞液从所述内口泵入所述离心杯内，所述离心杯内的气体从所述中心口排出；S112、所述离心杯填满后，继续从所述内口泵入待浓缩细胞液，通过离心分离，得到集中在所述离心杯外层的中间浓缩细胞液和集中在所述离心杯中心层的废液；S113、将所述废液从所述中心口泵出至废液袋，同时将所述中间浓缩细胞液从所述外口排至中间袋。3.根据权利要求2所述的细胞浓缩洗涤置换方法，其特征在于，所述将所述废液从所述中心口泵出至废液袋过程中，还包括：S114、从所述内口泵出废液，将管路中残留的待浓缩细胞液回推至样品袋，同时空气通过无菌过滤器后经所述中心口进入所述离心杯内，使废液能够从所述中心口排出。4.根据权利要求3所述的细胞浓缩洗涤置换方法，其特征在于，在步骤S11之后、步骤S12之前，还包括：S115、将所...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏东兵，
申请(专利权)人：中博瑞康上海生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：