一种鸡传染性法氏囊病毒强毒株制造技术

本发明专利技术提供了一种鸡传染性法氏囊病毒超强毒株SX株，该毒株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：V202275，该毒株VP2蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。鸡传染性法氏囊病毒超强毒株SX株的TCID

【技术实现步骤摘要】
一种鸡传染性法氏囊病毒强毒株


[0001]本专利技术属于生物制品领域，具体是涉及一种鸡传染性法氏囊病毒强毒株。

技术介绍

[0002]传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)引起的疾病，该病毒主要引起幼龄鸡(3
‑
8周龄)的急性、高接触传染性疾病，侵害鸡的中枢免疫器官法氏囊，可引起严重的免疫抑制，感染后的健康鸡常出现继发症状和并发症状，对其他细菌类或病毒类疾病的抵抗力大幅下降，该病发病迅速、传播快，一旦发病祸及整个鸡群，很难控制。
[0003]传染性法氏囊病的防控主要以免疫预防为主，通常采用的疫苗是灭活疫苗和弱毒苗，接种方式为滴鼻、点眼、饮水、注射等，根据疫苗的特性、鸡的日龄综合考虑接种方式，按照标准的免疫程序对鸡群进行免疫接种。随着传染性法氏囊病毒毒力的增强和不断变异，传统的灭活疫苗和弱毒疫苗不能提供完全的保护效力，经常出现免疫失败的例子。研究显示，鸡传染性法氏囊病毒强毒株能够突破原有的弱毒疫苗在较高滴度抗体水平的保护，造成雏鸡法氏囊的损伤，中等毒力活疫苗或强毒灭活疫苗对鸡的保护效果较好，但中等毒力疫苗和强毒疫苗在抗原上与强毒毒株之间存在一定的差异，伴随着鸡传染性法氏囊病毒流行株的毒力不断加强，中等毒力疫苗和强毒疫苗的保护效果存在下降的风险，针对预防鸡传染性法氏囊病的流行，迫切需要研究者们找到具有强毒力抗原特征的细胞适应疫苗毒株，提高疫苗的保护效果。/>
技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供了一种鸡传染性法氏囊病毒强毒株SX。
[0005]本专利技术的目的还在于提供了一种鸡传染性法氏囊病毒强毒株SX株VP2蛋白的核苷酸序列。
[0006]为实现以上技术目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种鸡传染性法氏囊病毒强毒株SX株，所述鸡传染性法氏囊病毒强毒株SX株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：V202275。
[0008]所述SX株VP2蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0009]所述鸡传染性法氏囊病毒强毒株SX株在疫苗中的应用。
[0010]所述鸡传染性法氏囊病毒强毒株SX株TCID
50
为10
‑
8.5
/0.1mL。
[0011]相对于现有技术，本专利技术具有以下优势：
[0012]本专利技术提供的鸡传染性法氏囊病病毒SX毒株为强毒株，TCID
50
为10
‑
8.5
/0.1mL，SX毒株灭活疫苗对超强毒株IBDV
‑
GS毒株的致死性攻击具有100％的保护率。
[0013]本专利技术提供的鸡传染性法氏囊病病毒SX毒株疫苗具有免疫效力稳定、持续时间长的特点，对预防和控制鸡传染性法氏囊强毒的流行具有重要的作用。
附图说明
[0014]构成本专利技术的一部分的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：
[0015]图1为鸡传染性法氏囊病毒SX株VP2基因PCR扩增的电泳图
[0016]图2.为鸡传染性法氏囊病毒SX株VP2基因的核苷酸片段对比图
具体实施方式
[0017]以下具体说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。本领域的技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围的前提下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围。
[0018]本专利技术所用原料及试剂均为市售药品和试剂。
[0019]实施例1鸡传染性法氏囊病毒SX株的分离与鉴定
[0020]病料鸡选择山西某大型养鸡场，选择临床症状典型的发病鸡，无菌采集法氏囊、肝脏、脾脏、肺脏及肾脏等组织。匀浆研磨，按体积1:10的比例加入含青霉素1000U/mL、链霉素1000U/mL灭菌的生理盐水，制成组织悬液，置于2～8℃冰箱，抑菌1.5h，反复冻融3次后，5000rpm离心15min，取上清加入20％的氯仿放置4℃作用4h或37℃作用2h(IBDV对乙醚、氯仿和胰蛋白酶有抵抗力)，5000rpm离心15min，取上清，0.22μm的无菌过滤器过滤，置于
‑
20℃保存备用。
[0021]1、病毒鸡胚接种
[0022]上述处理获得的病料经绒毛尿囊膜接种9
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12日龄SPF鸡胚，每胚人工气室接种0.2mL，37℃孵化，每日照蛋2次，将24h前死去的鸡胚弃掉。24h后每4～6小时照蛋1次，死亡鸡胚随时取出，直至观察至144h，不论死亡或存活，取出所有鸡胚，人工气室向上横卧，置2～8℃冰箱冷却16～24h，于超净台观察有无病理变化，收获绒毛尿囊膜和尿囊液。以上组织匀浆研磨，加入1倍体积的含青霉素的生理盐水后，反复冻融3次，离心取上清，命名为F1代次。将病毒在鸡胚上连续传5代至F5代次。
[0023]2、琼脂免疫扩散试验(AGID)
[0024]按中华人民共和国农业行业标准制备1％的琼脂平板，打出3mm的梅花孔，中心加入IBDV标准阳性血清，周围孔加入待测的IBDV抗原(鸡胚尿囊膜研磨液和鸡法氏囊组织上清液)，同时设阴性对照孔(无菌生理盐水或细胞维持液)和阳性对照(鸡法氏囊病标准抗原)。将琼脂板置于湿盒内，37℃放置24h后可放置于常温，24h为初判结果，72h为最终判定结果。观察到待测的疑似IBDV抗原、鸡法氏囊病标准抗原与标准血清之间出现沉淀线，且阴性对照孔与标准血清之间无沉淀线，结果判定所分离病毒为鸡传染性法氏囊病毒，命名为IBDV
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SX株。
[0025]鸡传染性法氏囊病毒强毒株SX株于2022年10月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：V202275。3、RT
‑
PCR检测结果
[0026]应用所设计的一对引物对IBDV毒株VP2基因进行RT
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PCR扩增，电泳后出现1条大小为1451bp的目的条带，与预期序列大小相符，如图1所示。
[0027]引物的确定：从GenBank中下载已登录的IBDV的A片段包括VP2的全部序列，应用引物分析软件Primer Primer5.0在IBDV的A片段基因编码区设计了两条引物，如下：
[0028]上游引物FP:5
’‑
GCGATGACAAACCTGCAAGA
‑3’
[0029]下游引物RP:5
’‑
CCTGAGGCAGCTCTTGCTT
‑3’
。扩增片段预期大小为1451bp。引物由广州某生物科技有限公司合成。
[0030]4、IBDV病毒SX株VP2蛋白基因片段的序列分析。
[0031]将VP2基因片段进行RT
‑<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鸡传染性法氏囊病毒强毒株SX株，其特征在于，所述鸡传染性法氏囊病毒强毒株SX株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：V202275。2.根据权利要求1所述的鸡传染性法氏囊病毒强毒株SX株，其特征在于，所述SX株VP2蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾远金，巫辅达，叶贺佳，仇微红，朱秀同，
申请(专利权)人：广州市华南农大生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：