一株防治枇杷根腐病的棘孢木霉菌SWUB077R1及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株防治枇杷根腐病的棘孢木霉菌SWU B077R1及其应用。该菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏时间为2023年6月30日，保藏编号为CGMCC No.40719。本发明专利技术得到的菌株为棘孢木霉菌(Trichoderma asperellum)SWU B077R1，该菌株从浙江省嘉兴市海宁市杨渡基地枇杷根腐病病根中分离获得，试验结果表明，本发明专利技术得到的棘孢木霉菌SWU B077R1能够有效地抑制枇杷根腐病菌腐皮镰孢菌(Fusarium solani)和尖孢镰孢菌(F.oxysporum)的生长，不仅对枇杷根腐病的显症幼苗表现出良好的防治效果，还能维持枇杷植株的生长活力。株的生长活力。株的生长活力。

【技术实现步骤摘要】
一株防治枇杷根腐病的棘孢木霉菌SWU B077R1及其应用


[0001]本专利技术涉及生物防治
，具体涉及一株防治枇杷根腐病的棘孢木霉菌SWU B077R1及其应用。

技术介绍

[0002]枇杷根腐病是枇杷产业重要病害之一，严重阻碍产业的可持续发展，影响农民的收入。该病害在各产区均有不同程度发生，云南、福建和浙江产区尤甚，重病地块病株率在25％以上。该病害症状表现为地上部分叶片变黄、枯萎，地下部分主根腐烂，侧根出现开裂和断损，最终导致落叶和植株死亡。由于根腐病是土传病害，待植株显症后已错过最佳治疗时机。
[0003]迄今关于枇杷根腐病研究工作主要围绕病原菌鉴定、田间综合防治措施、常规化学药剂筛选等方面开展，目前已筛选到化学药剂氟菌
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霜霉威(银法利)对枇杷根腐病具有良好的防控效果，但由于其价格昂贵、存在环境和健康风险难以推广应用。因此，迫切需要探索一种经济有效且对环境安全友好的生物防治方法。木霉菌(Trichoderma spp.)是一类具有广泛适应性、抗菌广谱性、拮抗机制多样性的真菌，不仅能够抑制病原菌生长还能促进植物生长。在发展环境保护型农业的背景下，一些基于木霉菌及其次生代谢产物开发的菌剂或菌肥产品已成功应用于部分农作物、经济作物生产中。在枇杷上，仅有关于深绿木霉(T.atroviride)和钩状木霉(T.hamatum)能够有效抑制小孢拟盘多毛孢(Pestalotiopsis microspore)生长的报道。虽然小孢拟盘多毛孢能够引起枇杷根腐病，但迄今已报道的我国枇杷根腐病主要病原菌为腐皮镰孢菌(Fusarium solani)和尖孢镰孢菌(F.oxysporum)，目前尚无针对由上述两种根腐菌引起的枇杷根腐病生防技术，该技术有望成为防控枇杷根腐病的重要来源。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术存在的上述不足，本专利技术的目的是提供一株防治枇杷根腐病的棘孢木霉菌SWU B077R1及其应用，以解决现有的枇杷根腐病防治方法效果不理想、污染环境等问题。
[0005]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
[0006]一株防治枇杷根腐病的棘孢木霉菌SWU B077R1，其特征在于，菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏时间为2023年6月30日，保藏编号为CGMCC No.40719。
[0007]一种微生物制剂，包括上述防治枇杷根腐病的棘孢木霉菌SWU B077R1。
[0008]上述防治枇杷根腐病的棘孢木霉菌SWU B077R1或微生物制剂在防治枇杷根腐病中的应用。
[0009]进一步地，上述应用包括对感染根腐病的枇杷植株施用上述的棘孢木霉菌SWU B077R1或微生物制剂。
[0010]本专利技术具有以下有益效果：
[0011]本专利技术提供了一种防治由枇杷根腐病的棘孢木霉菌SWU B077R1，可以有效地抑制枇杷根腐病菌腐皮镰孢菌和尖孢镰孢菌的生长，试验证明，本专利技术不仅对枇杷根腐病的显症幼苗表现出良好的防治效果，还明显提高了其根系活力。
附图说明
[0012]图1为棘孢木霉菌SWU B077R1的形态学鉴定结果图，其中，A为菌落形态(正面)，B为菌丝形态，C为孢子形态；
[0013]图2为棘孢木霉菌SWU B077R1基于ITS构建的贝叶斯系统发育树图；
[0014]图3为棘孢木霉菌SWU B077R1对腐皮镰孢菌和尖孢镰孢菌的平板对峙法抑菌活性测定结果图。
[0015]图4为棘孢木霉菌SWU B077R1对枇杷根腐病的防治效果图(接种60d后)，其中，A为空白对照(无菌水)，B为单一接种腐皮镰孢菌，C为单一接种尖孢镰孢菌，D为接种腐皮镰孢菌+棘孢木霉菌，E为接种尖孢镰孢菌+棘孢木霉菌。
具体实施方式
[0016]以下所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0017]实施例1：菌株的分离纯化
[0018]本研究供试材料为枇杷的根腐病病根，采自浙江省嘉兴市海宁市杨渡基地。采用组织分离法对病样进行分离，样品洗净后，使用无菌刀片将其切成5mm
×
5mm的小块，使用质量分数为75％酒精浸泡4min，无菌水冲洗3次，转入质量分数为10％次氯酸钠溶液中悬浮8min，然后用无菌水冲洗3次，转入PDA平板培养基中，于25℃暗培养3d。3d后使用真菌菌落边缘挑取法对存在明显生长形态差异的真菌进行纯化培养，重复纯化3次，获得纯化菌株，编号为SWU B077R1。纯化菌株于
‑
20℃条件下，在质量分数为30％的甘油中保存备用。
[0019]实施例2：菌株鉴定
[0020]1.形态学鉴定
[0021]将实施例1纯化后的棘孢木霉菌株SWU B077R1接种至PDA培养基上，25℃培养5d，观察其形态学特征(菌落形态、分生孢子、菌丝)，结果如图1所示。
[0022]由图1可知，该菌在PDA培养基上生长速率较快(25℃日均生长速度为28mm/d)，气生菌丝紧贴平板表面呈短绒毛状；产孢簇离散分布于培养基表面，初期为白色，后期转绿，菌落形成暗绿色同心环；分生孢子梗顶端通常具有两个或多个瓶梗，近安瓿形；分生孢子球形至卵圆形，孢子大小范围为3.53
‑
3.81
×
2.90
‑
3.00μm。依据杨合同等《木霉分类与鉴定》方法，将其初步鉴定为棘孢木霉菌(Trichoderma asperellum)。
[0023]2.ITS序列分析
[0024]将纯化后的棘孢木霉菌株SWU B077R1接种至PDA培养基上，25℃培养5d，采用改良CTAB法对纯化菌株进行DNA提取，以DNA原液作为扩增模板，采用真菌通用引物内转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,ITS)ITS1，ITS4(ITS1:TCCGTAGGTGAACCTGCGG；ITS4：TCCTCCG CTTATTGATATGC)进行PCR扩增；PCR体系为:2
×
TaqPCR Master Mix20μL，正反引物
各2μL，DNA模板1μL，加入ddH2O补齐至40μL体系；PCR扩增条件为：94℃预变性5min；95℃变性40s；56℃退火40s，72℃延伸45s，共30个循环，补充延伸72℃10min。扩增产物经质量分数为1％的琼脂糖凝胶电泳检测后，送至北京擎科生物有限公司重庆分公司进行测序，获得长度为585bp的基因片段，测序结果如SEQ ID No.1所示。测序序列经DNAstar软件包中的SeqMan工具拼接后，上传至NCB I(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast)核酸比对网站进行Blastn比对，获得分离菌株的相关信息；使用MEGA X软件构建系统发育树，基于ITS的系统发育树本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株防治枇杷根腐病的棘孢木霉菌(Trichoderma asperellum)，其特征在于，命名为SWU B077R1，该菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏时间为2023年6月30日，保藏编号为CGMCC No.40719。2.一种微生物制剂，其特征在于，包括权利要求1所述的防治枇杷根腐病的...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴頔，余鹏，梁国鲁，郭启高，肖轶，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：