一种高纯度京尼平苷的分离纯化方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种高纯度京尼平苷的分离纯化方法及其应用，包括（1）醇提：以京尼平苷粗品为原料，用乙醇振荡浸出提取，得到京尼平苷提取物；（2）大孔树脂纯化：将京尼平苷提取物上LK

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度京尼平苷的分离纯化方法及其应用
[0001]

[0002]本专利技术属于天然产物分离纯化
，特别涉及一种高纯度京尼平苷的分离纯化方法及其应用。

技术介绍

[0003]京尼平苷又名栀子苷，栀子甙，在栀子果实中含量较高，也在肉苁蓉属植物中被检测到过，它在栀子果中分离得到的环烯醚萜类化合物占比最高，并且被广泛研究讨论其药理价值。该类化合物的多样性和广泛的生物活性主要是因为它的环烯醚萜基本骨架容易进行环氧化、羟基化及芳香酸酯化等多种反应。越来越多的药理学证据证明京尼平苷的多种药用特性，包括神经保护、抗糖尿病、肝保护、抗炎、抗抑郁、心脏保护等作用。京尼平苷可以作为一种药物或先导化合物用于预防和治疗疾病，同时京尼平苷也是多种单体生成的中间原料，以京尼平苷为底物，可以生成优良天然交联剂京尼平以及栀子系列色素，具有广阔的市场价值。
[0004]京尼平苷在栀子果实中的含量低于10%，因此需要采用进一步的分离和纯化操作来进行精制。目前国内外京尼平苷的分离纯化方法主要分为以下这几种方法：溶剂萃取法、高效逆流色谱法、超声提取法、单相溶剂法、两相溶剂法、大孔树脂吸附法，重结晶法等。
[0005]但通过比较现有技术可以发现目前京尼平苷分离纯化过程中仍存在很多问题。例如，在萃取、结晶过程中使用包括异丁醇、甲醇、正丁醇、丙酮在内的有毒试剂，对眼、呼吸道的黏膜有刺激作用，能损伤视网膜及视神经，后续需要辅助活性炭脱色等处理，操作繁琐、回收率低。在大孔树脂吸附法中，目前使用的各类树脂对京尼平苷的静态吸附量较低，且特定选择性不好，因而影响京尼平苷的纯度和回收率。重结晶法中，均采用二次结晶方式，搅拌、静置所需时间长达5
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7h，操作过程繁琐，提取效率低。另外，现有技术中还有利用反渗透膜进行提取液的浓缩处理，虽然可大幅提升京尼平苷的纯度，但不仅价格昂贵，堵塞后还难以维护，不适于大规模工业化生产。
[0006]因此，需要开发一种生产过程安全可靠、生产成本低，产品纯度和回收率高的生产方法正是市场的需求。

技术实现思路

[0007]为了克服现有技术的问题，本专利技术提出了一种高纯度京尼平苷的分离纯化方法及其应用，所述的方法具有生产过程安全、操作简单、周期短、产品纯度和回收率高的特点。
[0008]在现有的京尼平苷分离纯化中，发现栀子中提纯栀子黄色素后的废液中，含有大量酸性多糖，会与废液中的京尼平苷竞争浸出溶剂，导致京尼平苷纯度降低，同时现有浸提所用有机溶剂多为有毒挥发性试剂，工厂实际生产存在安全隐患；浸提后浓缩液利用树脂柱分离纯化，由于树脂对京尼平苷的特定选择性不好，京尼平苷纯度未得到大幅提升；为获
取京尼平苷晶体，现有技术采用乙酸乙酯和甲醇溶剂体系二次结晶法，一次搅拌和静置时间长达5h，操作过程繁琐，且二次萃取过程中损耗京尼平苷较多、回收率低。因此专利技术人对此进行了研究，以京尼平苷的总回收量来作为评价指标，发现乙醇可以回收更多的目标产物，且乙醇价格低廉易于回收，可应用于实际生产。基于此，在进一步探究不同吸附树脂对京尼平苷的特定选择性时，专利技术人发现，LK
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32大孔树脂柱对京尼平苷具有强定向吸附能力，以及良好的解吸附率。更进一步的专利技术人在探究简化结晶操作过程中发现，以甲醇溶解与乙酸丁酯一次结晶，不需分步结晶。有鉴于此，专利技术人提供了本专利技术的如下方案，实现48~72h内分离纯化获得纯度达98%以上的京尼平苷，回收率提升至82%。
[0009]为了实现上述目的，本专利技术第一方面提供了一种高纯度京尼平苷的分离纯化方法，包括以下步骤：（1）醇提：以京尼平苷粗品为原料，按照固液比1:5~25、加入体积浓度为95~100%的乙醇，在30~75℃下振荡浸出0.5~3h提取1~4次，合并提取液，过滤得滤液，将滤液浓缩干燥，得到京尼平苷提取物；（2）大孔树脂纯化：将步骤（1）所得京尼平苷提取物溶于纯水中，上LK
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32大孔树脂柱吸附，而后先用纯水洗杂，再分别用体积浓度为30%~50%的乙醇洗脱树脂柱，检测乙醇洗脱液的吸收曲线，至没有明显京尼平苷吸收峰时停止洗脱，收集洗脱液浓缩干燥，获得京尼平苷初产品；（3）重结晶：将步骤（2）得到的京尼平苷初产品，按照料液比1:6~1:12用甲醇溶液于30~60℃加热溶解，趁热过滤并缓慢滴入乙酸丁酯，滴加完毕，缓慢冷却至京尼平苷析出，在4~25℃静置结晶12~72h，待结晶完全，过滤得到京尼平苷晶体；（4）干燥：将步骤（3）得到的京尼平苷晶体进行减压浓缩干燥，即获得高纯度京尼平苷。
[0010]进一步的，步骤（1）醇提的原料为栀子黄色素工艺流程的副产物，即从栀子中提纯栀子黄色素后的废液，其中京尼平苷的含量为20%~40%。
[0011]进一步的，步骤（1）中振荡是在转速为100~200r/min下进行搅拌。
[0012]进一步的，步骤（2）中进行大孔树脂柱吸附时，控制流速为每小时0.5~2倍柱体积量，并且跟踪检测流出液的高效液相色谱图，当流出液在238nm处出现明显京尼平苷吸收峰时停止上样。
[0013]进一步的，步骤（2）中在完成洗脱后，用50~95%乙醇和水活化再生树脂柱，用于下次上样纯化。
[0014]进一步的，步骤（4）中所述减压浓缩干燥的条件为：
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0.06~
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0.095MPa、60~90℃。
[0015]本专利技术第二方面提供了一种高纯度京尼平苷，所述高纯度京尼平苷由上述方法分离纯化得到。
[0016]进一步的，本专利技术第三方面提供了所述高纯度京尼平苷的应用，所述高纯度京尼平苷用于制备包括糖尿病、保肝、抗炎、抗抑郁、心脏保护、抗哮喘、胰腺保护、抗甲型H1N1病毒及骨质疏松在内的药物。
[0017]本专利技术的优点和有益效果是：
1、本专利技术利用栀子黄色素工艺流程的副产物，即从栀子中提纯栀子黄色素后的废液为原料，对其中的京尼平苷进行分离、纯化，实现了栀子资源的重复利用；2、本专利技术所述高纯度京尼平苷高效分离纯化的方法中，首先采用乙醇作为溶剂进行浸提，将京尼平苷的纯度提升到61.26%~62.52%、回收率89.80%~98.15%，然后采用LK
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32大孔树脂进行吸附纯化，可将醇提后的京尼平苷混合物进行进一步纯度提升至89.00%~89.95%、回收率98.89%~99.26%，大孔树脂纯化后的京尼平苷采用混合溶剂进行结晶，通过加入乙酸丁酯调节甲醇对京尼平苷粗品的溶解度，完美解决了结晶饱和点不易控制的问题，得到的结晶经过检测京尼平苷纯度能达到98.65%~98.82%、回收率84.22%~85.30%，并且结晶产品中京尼平苷无有毒物质残留；醇提、大孔树脂纯化和重结晶各步处理有机结合，克服了影响产品纯度和提取效率的主要矛盾；3、本专利技术中采用乙酸丁酯和甲醇体系进行重结晶，相比现有技术采用乙酸乙酯体系重结晶得率仅为45.12%，乙酸丁酯体系获得的京尼平苷得率为84.22%，显著提高了产品得率；4、本专利技术所述高纯度京尼平苷高效分离纯化的方法，结晶条件温本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高纯度京尼平苷的分离纯化方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）醇提：以京尼平苷粗品为原料，按照固液比1:5~25、加入体积浓度为95~100%的乙醇，在30~75℃下振荡浸出0.5~3h提取1~4次，合并提取液，过滤得滤液，将滤液浓缩干燥，得到京尼平苷提取物；（2）大孔树脂纯化：将步骤（1）所得京尼平苷提取物溶于纯水中，上LK
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32大孔树脂柱吸附，而后先用纯水洗杂，再分别用体积浓度为30%~50%的乙醇洗脱树脂柱，检测乙醇洗脱液的吸收曲线，至没有明显京尼平苷吸收峰时停止洗脱，收集洗脱液浓缩干燥，获得京尼平苷初产品；（3）重结晶将步骤（2）得到的京尼平苷初产品，按照料液比1:6~1:12用甲醇溶液于30~60℃加热溶解，趁热过滤并缓慢滴入乙酸丁酯，滴加完毕，缓慢冷却至京尼平苷析出，在4~25℃静置结晶12~72h，待结晶完全，过滤得到京尼平苷晶体；（4）干燥：将步骤（3）得到的京尼平苷晶体进行减压浓缩干燥，即获得高纯度京尼平苷。2.根据权利要求1所述高纯度京尼平苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤（1）醇提的原料为栀子黄色素工艺流程的副产物，即从栀子中提纯栀子黄色素后的废液，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：张昊，柯玉倩，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：