一种明胶蛋白的荧光标记方法及定量分析方法技术

本发明专利技术提供一种明胶蛋白的荧光标记方法及定量分析方法，将四氮唑修饰的聚集诱导发光的荧光染料分子溶于水相、醇相或PBS buffer溶液中，再与明胶蛋白溶液混合，得到荧光蛋白复合物溶液。该四氮唑修饰的聚集诱导发光的荧光染料分子溶解时不发光或微弱发光，但与明胶蛋白结合后，染料分子荧光发光显著增强，可用作明胶蛋白的荧光标记和定量检测方法。明胶蛋白的荧光标记和定量检测方法。明胶蛋白的荧光标记和定量检测方法。

【技术实现步骤摘要】
一种明胶蛋白的荧光标记方法及定量分析方法


[0001]本专利技术涉及一种明胶蛋白的荧光标记方法及定量分析方法，属于明胶蛋白定量分析


技术介绍

[0002]明胶是一种水溶性蛋白，可从动物皮肤、肌腱、韧带和骨头等富含胶原的组织中提取出来。作为一种天然生物基材料，明胶的生物相容性好，且具有良好的生物降解性、细胞粘附和增殖、无毒、无免疫原性和价格低廉等特点，在生物医学和组织工程领域具有极大的潜在应用，比如用作医用敷料、修复软骨损伤等。
[0003]明胶作为一种天然高分子蛋白，其来源广，结构复杂。明胶作为胶原的水解产物，实现明胶的定量分析可能与某些疾病指标联系，比如由胶原沉淀引起的近端指间关节膨大，心肌间质胶原沉淀引起的心肌纤维化等。因此，实现明胶蛋白的定量分析尤为重要。现阶段针对明胶蛋白的定性分析已有较多手段，比如实时荧光PCR法检测明胶的牛、猪源性成分，高效液相色谱串联质谱法检测肽链氨基酸序列等等。在对明胶进行定量分析前需对明胶蛋白进行荧光标记。然而传统的荧光标记方法往往面临着蛋白沉积引起荧光衰减的问题，且明胶作为一种蛋白需要温和的标记条件。如何在不影响明胶本身结构(明胶不变性)的情况下，实现对明胶蛋白的有效标记是实现明胶定量分析的关键。
[0004]聚集诱导发光(AIE)是响应荧光的一个相对较新的概念。与常规的发光体不同，典型的AIE发光体具有螺旋桨状的非平面结构。在稀溶液中，AIE分子经历分子间旋转，通过非辐射途径消耗能量并使之不发光。在蛋白结合并包裹的情况下，由于来自相邻分子的物理约束，限制了染料分子的自由旋转，从而诱导出高效率的荧光活性。这种独有的AIE特性提供了在化学传感、物理可视化和生物成像方面的响应性荧光点亮分析策略，许多AIE荧光染料系统已被证实为高亮度、低背景和具有良好的光稳定性的材料。
[0005]但是，现有技术中并没有报道采用AIE荧光染料对明胶蛋白进行标记和定量分析的方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了一种明胶蛋白的荧光标记方法及定量分析方法，可以有效解决上述问题
[0007]本专利技术是这样实现的：
[0008]一种明胶蛋白的荧光标记方法，将四氮唑修饰的聚集诱导发光的荧光染料分子溶于水相、醇相或PBS buffer溶液中，再与明胶蛋白溶液混合，得到荧光蛋白复合物溶液。
[0009]作为进一步改进的，所述四氮唑修饰的的聚集诱导发光的荧光染料分子的结构式如下：
[0010][0011]其中，R
′
、R
″
、R
″′
及R
″″
中的至少一个为四氮唑基。
[0012]作为进一步改进的，所述四氮唑修饰的聚集诱导发光的荧光染料分子选自TPE
‑
4TA、TPE
‑
3TA、TPE
‑
2TA、TPE
‑
TA中的一种或多种。
[0013]作为进一步改进的，所述四氮唑修饰的聚集诱导发光的荧光染料分子为TPE
‑
4TA。
[0014]作为进一步改进的，所述四氮唑修饰的聚集诱导发光的荧光染料分子溶于水相、醇相或PBS buffer溶液中的浓度为1
×
10
‑2～10
‑4mol/L。
[0015]作为进一步改进的，所述醇相为乙醇。
[0016]作为进一步改进的，所述明胶蛋白的荧光标记方法还包括用激发光照射荧光蛋白复合物溶液，根据是否观察到的荧光判断明胶蛋白是否被有效标记。
[0017]作为进一步改进的，所述明胶蛋白溶液的配置的温度为35
‑
45℃，搅拌时间为25
‑
35min。
[0018]一种明胶蛋白的定量分析方法，包括以下步骤：
[0019]S1，配置梯度浓度的明胶蛋白溶液，采用上述的方法对明胶蛋白进行标记，测试荧光强度；
[0020]S2，拟合出荧光强度与明胶蛋白浓度的关系的标准曲线；
[0021]S3，获取明胶蛋白样本，采用步骤S1的方法测试荧光强度，再根据标准曲线对样本中的明胶蛋白进行定量分析。
[0022]作为进一步改进的，所述测试荧光强度的激发波长为340
‑
450nm。
[0023]本专利技术的有益效果是：
[0024]本专利技术所采用的四氮唑修饰的聚集诱导发光的荧光染料分子，其主要特征就在于染料分子溶于水相或醇相时不发光，但与明胶蛋白结合时，能够高效地被激发出荧光，从而可以应用于一种明胶蛋白荧光点亮标记的简便高效方法和定量分析方法。
[0025]本专利技术的明胶蛋白的荧光标记方法表现为蛋白包裹导致增强染料荧光发射，以及聚集诱导发光现象。该类染料标记稳定性好，可长时间与明胶蛋白结合。
[0026]本专利技术明胶蛋白的荧光标记方法只需简单混合明胶溶液和荧光染料溶液，即可达到高效标记的效果，反应条件温和，安全性高，不需要复杂反应条件。
附图说明
[0027]为了更清楚地说明本专利技术实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0028]图1是本专利技术实施例1提供的点亮明胶蛋白的原理图。
[0029]图2是本专利技术实施例1、实施例2、实施例3和对比例1提供的点亮明胶蛋白的效果
图。
[0030]图3是本专利技术实施例1、实施例2、实施例3和对比例1提供的荧光光谱和荧光寿命图。其中，A为荧光光谱图，B为荧光寿命图。
[0031]图4是本专利技术实施例4和实施例5提供的点亮梯度浓度明胶蛋白的荧光光谱图。
[0032]图5是本专利技术实施例4和实施例5提供的对明胶蛋白定量分析的线性关系图。
具体实施方式
[0033]为使本专利技术实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施方式中的附图，对本专利技术实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本专利技术一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本专利技术中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本专利技术保护的范围。因此，以下对在附图中提供的本专利技术的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本专利技术的范围，而是仅仅表示本专利技术的选定实施方式。基于本专利技术中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本专利技术保护的范围。
[0034]本专利技术实施例提供一种明胶蛋白的荧光标记方法，将四氮唑修饰的聚集诱导发光的荧光染料分子溶于水相、醇相或PBS buffer溶液中，再与明胶蛋白溶液混合，得到荧光蛋白复合物溶液。该方法的荧光标记原理如图1所示，这类由四氮唑修饰的化合物，其负电荷的四氮唑阴离子与明胶蛋白中的氨基阳离子之间通过静本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种明胶蛋白的荧光标记方法，其特征在于，将四氮唑修饰的聚集诱导发光的荧光染料分子溶于水相、醇相或PBS buffer溶液中，再与明胶蛋白溶液混合，得到荧光蛋白复合物溶液。2.根据权利要求1所述的明胶蛋白的荧光标记方法，其特征在于，所述四氮唑修饰的聚集诱导发光的荧光染料分子的结构式如下：其中，R
′
、R
″
、R
″′
及R
″″
中的至少一个为四氮唑基。3.根据权利要求2所述的明胶蛋白的荧光标记方法，其特征在于，所述四氮唑修饰的聚集诱导发光的荧光染料分子选自TPE
‑
4TA、TPE
‑
3TA、TPE
‑
2TA、TPE
‑
TA中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的明胶蛋白的荧光标记方法，其特征在于，所述四氮唑修饰的聚集诱导发光的荧光染料分子为TPE
‑
4TA。5.根据权利要求1所述的明胶蛋白的荧光标记方法，其特征在于，所述四氮唑修饰的聚集诱导发光的荧光染料分子溶于水...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢胜，成瑶，曾泽兵，张阳，唐本忠，
申请(专利权)人：湖南大学深圳研究院，
类型：发明
国别省市：