测定方法和测定系统技术方案

一种测定检体试样中所含的微生物的存在量的测定方法，包括：对检体试样中所含的微生物进行浓缩精制的步骤；从浓缩精制的微生物中提取核酸的步骤；在提取的核酸中添加包含提取的核酸的杂交反应所需的盐类和表面活性剂的杂交反应液以供于杂交反应的步骤；测定杂交的核酸的发光量的步骤；基于核酸的发光量的测定值推定提取的核酸的量的步骤；以及基于提取的核酸的量的推定值计算检体试样中所含的微生物的存在量的步骤。物的存在量的步骤。物的存在量的步骤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】测定方法和测定系统
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求日本专利申请2021
‑
30947号(2021年2月26日申请)的优先权，在此引入该申请的公开整体以供参照。


[0003]本公开涉及微生物的定量的测定方法和测定系统。

技术介绍

[0004]以往，已知有对样品进行基因的扩增、并检测扩增后的基因的方法(例如，参照专利文献1)。
[0005]现有技术文献
[0006]专利文献
[0007]专利文献1：日本特开2015
‑
43702号公报

技术实现思路

[0008]专利技术所要解决的课题
[0009]要求提高基于基因的检测结果测定微生物量时的便利性。
[0010]本公开的目的在于提供能够提高微生物量测定中的便利性的测定方法和测定系统。
[0011]用于解决课题的手段
[0012]一些实施方式涉及的测定方法是测定检体试样中所含的微生物的存在量的测定方法，该测定方法包括：对所述检体试样中所含的微生物进行浓缩精制的步骤；从浓缩精制的微生物中提取核酸的步骤；
[0013]在提取的核酸中添加包含所述提取的核酸的杂交反应所需的盐类和表面活性剂的杂交反应液以供于所述杂交反应的步骤；测定杂交的核酸的发光量的步骤；基于所述核酸的发光量的测定值推定所述提取的核酸的量的步骤；以及基于所述提取的核酸的量的推定值计算所述检体试样中所含的微生物的存在量的步骤。通过这种方式，在不实施PCR(Polymerase Chain Reaction：聚合酶链式反应)工序的情况下推定核酸的量。由于在不实施PCR工序的情况下推定核酸的量，因此减少了PCR反应效率对于核酸的量的推定值的影响。由于减少了PCR反应效率的影响，因此提高了基于核酸的量的推定值而实施的靶微生物的定量测定精度。结果，提高了微生物测定中的便利性。
[0014]在一个实施方式中，在所述测定方法中，在供于所述杂交反应的步骤中，可以在微阵列(Micro array)所具有的多个点(spot)分别将所述提取的核酸供于杂交反应；在所述测定杂交的核酸的发光量的步骤中，可以测定所述微阵列所具有的各点的发光量。通过这种方式，同时定量且高灵敏度地测定了多种微生物。结果，提高了微生物测定中的便利性。
[0015]在一个实施方式中，在所述测定方法中，在供于所述杂交反应的步骤中，可以使固
定于所述微阵列所具有的各点的固相面上且被荧光分子修饰的探针捕获所述核酸。通过这种方式，将与各点接液的检体样品中所含的核酸的量作为各点的亮度值来测定。结果，提高了微生物的定量测定的精度。
[0016]一些实施方式涉及的测定系统测定检体试样中所含的微生物的存在量。所述测定系统具备：对检体试样中所含的微生物进行浓缩精制的微生物浓缩装置；从在所述微生物浓缩装置中浓缩精制的微生物中提取核酸的核酸提取装置；将在所述核酸提取装置中提取的核酸供于所述杂交反应的杂交反应装置；以及测定在所述杂交反应装置中与探针杂交的核酸的发光量、并基于所述核酸的发光量的测定值推定所述提取的核酸的量的核酸检测装置。所述核酸检测装置使运算装置基于所述提取的核酸的量的推定值计算所述检体试样中所含的微生物的存在量，并获取所述运算装置的计算结果作为所述微生物的存在量的测定结果。通过这种方式，在不实施PCR(Polymerase Chain Reaction)工序的情况下推定核酸的量。由于在不实施PCR工序的情况下推定核酸的量，因此减少了PCR反应效率对于核酸的量的推定值的影响。由于减少了PCR反应效率的影响，因此提高了基于核酸的量的推定值而实施的靶微生物的定量测定精度。结果，提高了微生物测定中的便利性。
[0017]在一个实施方式涉及的所述测定系统中，所述微生物浓缩装置可以通过阴电荷膜法对所述检体试样中所含的微生物进行浓缩精制。通过这种方式，相对于利用孔径小于靶微生物的过滤器进行的通常的过滤，堵塞等的影响小，能够处理大容量的样品，从而可以期待提高浓缩率。
[0018]专利技术的效果
[0019]根据本公开涉及的测定方法和测定系统，提高了微生物量测定中的便利性。
附图说明
[0020][图1]是示出比较例涉及的利用qPCR法的定量测定的步骤例的流程图。
[0021][图2]是示出比较例涉及的多重qPCR(Multiplex qPCR)的前工序的步骤例的流程图。
[0022][图3]是示出比较例涉及的利用微阵列法的定量测定的步骤例的流程图。
[0023][图4]是示出比较例涉及的微阵列法的前工序的步骤例的流程图。
[0024][图5]是示出一个实施方式涉及的测定方法的步骤例的流程图。
[0025][图6]是示出一个实施方式涉及的测定系统的构成例的框图。
具体实施方式
[0026]以下，参照附图对本公开涉及的实施方式进行说明。本公开的一个实施方式涉及的测定方法是测定检体试样中所含的至少2种微生物的存在量的方法。
[0027](比较例)
[0028]首先，对相对于本实施方式涉及的测定方法的比较例进行说明。作为同时定量测定检体试样中的多种微生物量的方法的比较例，以下说明了多重qPCR(quantitative Polymerase Chain Reaction)法和微阵列法。
[0029]<利用qPCR法的定量测定>
[0030]图1示出了利用qPCR法的定量测定的步骤例。从检体试样中提取核酸并进行精制
(步骤S901)。在精制的试样中添加反应液(步骤S902)。通过将反应液添加到与检体试样不同的已知浓度的标准核酸中来制备检量用试样(步骤S903)。进行来自检体试样的核酸和标准核酸的实时PCR(real
‑
time PCR)测定(步骤S904)。进行将已知浓度的标准核酸的实时PCR测定的Ct值与来自检体试样的核酸的Ct值进行比较的数据分析(步骤S905)。基于通过数据分析推定的检体试样的核酸量，计算微生物量(步骤S906)。
[0031]步骤S903的检量用的已知浓度的标准核酸的制备例如通过以下方式执行：制备1/10稀释系列、或者在包含来自检体试样的核酸浓度的范围内进行制备。检量用的已知浓度的标准核酸的制备需要预先在与装置规格相对应的浓度范围内执行，以使得浓度成为qPCR装置的检测下限以上、且不会因反应抑制而失去定量性。
[0032]来自检体试样的核酸可以以稀释系列作为样品，其预先在与装置规格相对应的浓度范围内制备，以使得浓度成为qPCR装置的检测下限以上、且因反应抑制而失去定量性。
[0033]在qPCR反应中，为了测定核酸扩增，使用嵌入剂(intercalator)(非特异性染色双链核酸的荧光试剂)或荧光核酸探针。荧光核酸探针也称为TaqMan探针。
[0034]图2示出了作为用于以qPCR法为基础实施用于同时检测多种核酸的多重qP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种测定方法，其是测定检体试样中所含的微生物的存在量的测定方法，该测定方法包括：对所述检体试样中所含的微生物进行浓缩精制的步骤；从浓缩精制的微生物中提取核酸的步骤；在提取的核酸中添加包含所述提取的核酸的杂交反应所需的盐类和表面活性剂的杂交反应液以供于所述杂交反应的步骤；测定杂交的核酸的发光量的步骤；基于所述核酸的发光量的测定值推定所述提取的核酸的量的步骤；以及基于所述提取的核酸的量的推定值计算所述检体试样中所含的微生物的存在量的步骤。2.根据权利要求1所述的测定方法，其中，在供于所述杂交反应的步骤中，在微阵列所具有的多个点分别将所述提取的核酸供于杂交反应；在所述测定杂交的核酸的发光量的步骤中，测定所述微阵列所具有的各点的发光量。3.根据权利要求2所述的测定方法，其中，在供于所述杂交反应的步骤中，使固定于所述微阵列所具有的各点的固相面上且被荧光分子修饰...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫内祐树，田口朋之，
申请(专利权)人：横河电机株式会社，
类型：发明
国别省市：