BPTES在制备治疗钙化性主动脉瓣疾病的药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及BPTES在制备治疗钙化性主动脉瓣疾病的药物中的应用，本发明专利技术涉及BPTES在制备治疗钙化性主动脉瓣疾病药物中的应用。本发明专利技术经研究发现BPTES可下调Piezo1激动剂Yoda1诱导的瓣膜间质细胞中成骨分化标志基因RUNX2、BMP2、ALP的表达，抑制瓣膜间质细胞成骨分化；并且在体内能抑制升主动脉缩窄术以及导丝损伤引起的主动脉瓣瓣膜增厚与钙盐沉积，从而延缓或者抑制瓣膜钙化，进而为钙化性主动脉瓣疾病的预防和治疗提供了新的药物选择。治疗提供了新的药物选择。治疗提供了新的药物选择。

【技术实现步骤摘要】
BPTES在制备治疗钙化性主动脉瓣疾病的药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及BPTES在制备治疗钙化性主动脉瓣疾病的药物中的应用。

技术介绍

[0002]钙化性主动脉瓣膜疾病(Calcific aortic valve disease,CAVD)是最常见的瓣膜疾病，主要病理生理改变为主动脉瓣瓣叶纤维增生钙化从而导致瓣膜变硬并引起血流动力学改变，从而影响心脏功能。在欧美发达国家，已成为仅次于冠心病与高血压的心血管疾病。并且，CAVD患病率随年龄的增长而急剧增加，据文献报道，在发达国家，在65岁以上的人群主动脉硬化的患病率约为25％，而在85岁以上的人群，达到了50％，并且该疾病在60岁人群的发生率每年将以0.49％的速度增长。CAVD发病机制复杂，血流应力的改变，炎症浸润，内皮损伤，脂质沉积，线粒体应激等都是促进CAVD发展的重要因素。其中，瓣膜间质细胞的成骨分化是瓣膜钙化发生的关键始动因素。目前，CAVD缺乏有效的临床可用药物治疗方案，其主要治疗手段为主动脉瓣置换手术。因此，探索CAVD的发病机制，开发有效的治疗性或预防性药物对降低钙化性主动脉瓣膜疾病的发病率、死亡率意义重大。
[0003]细胞代谢在维持细胞体内平衡和响应细胞内和细胞外刺激的适应中具有重要作用。谷氨酰胺分解是一种重要的能量产生过程，并为细胞的合成代谢产生各种底物。这个过程始于谷氨酰胺裂解成谷氨酸，谷氨酸转化为α
‑
酮戊二酸(α
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KG)，然后进入柠檬酸循环，产生如乙酰辅酶A等代谢底物。谷氨酰胺酶1(Glutaminase 1，GLS1)是谷氨酰胺分解途径中的一个限速酶，它将谷氨酰胺转化为谷氨酸。研究表明谷氨酰胺代谢与机械信号通路密切相关。
[0004]BPTES是一种GLS1抑制剂。研究表明BPTES干预可延缓小鼠衰老相关的疾病发展。但其在防治钙化性主动脉瓣膜疾病的潜力有待进一步挖掘。

技术实现思路

[0005](一)解决的技术问题
[0006]针对上述背景，本专利技术通过研究发现BPTES可以有效下调瓣膜间质细胞中成骨分化标志基因RUNX2、BMP2和ALP的表达，抑制瓣膜间质细胞成骨分化，从而延缓或者抑制瓣膜钙化，提出了BPTES在制备防治钙化性主动脉瓣疾病药物中的应用，并且在体内能抑制升主动脉缩窄术以及导丝损伤引起的主动脉瓣瓣膜增厚与钙盐沉积，从而延缓瓣膜钙化进程，为钙化性主动脉瓣疾病的预防和治疗提供新的药物选择。
[0007](二)技术方案
[0008]BPTES在制备治疗钙化性主动脉瓣疾病的药物中的应用
[0009]具体的，所述BPTES用于制备干预瓣膜间质细胞的成骨分化以及在动物实验中延缓瓣膜病变进程的药物。
[0010]进一步地，所述BPTES用于制备抑制瓣膜间质细胞成骨分化的药物。
[0011]进一步地，所述动物实验包括升主动脉缩窄术模型和导丝损伤模型。
[0012]本专利技术还涉及一种抑制瓣膜间质细胞成骨蛋白RUNX2、BMP2、ALP表达的培养方法，所述方法包括：将传代稳定的人瓣膜间质细胞经BPTES(5μM)预刺激24小时；再经Yoda1刺激24小时。
[0013]具体的，所述诱导培养在CO2体积浓度5％、O2体积浓度95％的混合气体中进行。
[0014]本专利技术还涉及一种抑制升主动脉缩窄术(Ascending aortic constriction,AAC)和直接导丝损伤(direct wire injury,DWI)模型小鼠体内瓣膜病变的干预方法：所述方法包括：往AAC和DWI术后小鼠腹腔注射BPTES(10mg/kg)，对照组腹腔注射等体积的生理盐水，隔日注射一次，8周后检查心脏超声检查瓣膜功能。
[0015]具体的，所述小鼠喂养条件为25℃的恒温环境，昼夜12小时交替，并予以正常的饮食。
[0016](三)有益效果
[0017]本专利技术提供了BPTES在制备治疗钙化性主动脉瓣疾病的药物中的应用，并提供了一种通过BPTES处理后可显著改善瓣膜间质细胞的体外成骨分化，并且可延缓体内瓣膜病变进程的方法，进而为钙化性主动脉瓣疾病提供了新的潜在药物选择。
附图说明
[0018]图1：BPTES可抑制瓣膜间质细胞的成骨分化；
[0019]图2：BPTES可减轻AAC小鼠的跨瓣流速；
[0020]图3：BPTES可减轻AAC小鼠的瓣膜增厚和钙化；
[0021]图4：BPTES可降低AAC小鼠瓣膜的GLS1和RUNX2表达；
[0022]图5：BPTES可减轻DWI小鼠的跨瓣流速；
[0023]图6：BPTES可减轻DWI小鼠的瓣膜增厚和钙化；
[0024]图7：BPTES可降低DWI小鼠瓣膜的GLS1和RUNX2表达。
具体实施方式
[0025]具体实施方式：
[0026]下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：
[0027]实施例1：
[0028]原代的人主动脉瓣膜间质细胞分离于术后的主动脉瓣膜组织，瓣膜组织来源于10位患有钙化性主动脉瓣膜疾病的患者与10位经心脏移植术的患者。分离方法，公开于中国专利
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申请号CN201910104894.1中。研究草案经由南方医科大学南方医院伦理委员会批准，并获得所有患者的书面知情同意书。
[0029]取心脏移植受体术后或换瓣术后的主动脉瓣膜组织，存于无菌PBS中，用冰盒快速运回实验室后，在原代细胞实验台，用提前预冷的无菌PBS冲洗瓣膜，去除残余血凝块，全程应严格无菌操作并尽量缩短瓣膜离体到细胞培养之间的时间；将组织剪碎bing转移到15ml离心管，通过胶原酶溶液(2mg/ml)序贯消化、离心(1000rpm，常温，5min)、洗涤、转移、再离心和收集，最后用DMEM培养液(含10％胎牛血清)重悬，然后把悬浮液转移进细胞培养瓶里，
置于细胞37℃培养箱培养。
[0030]细胞干预：将人主动脉瓣膜间质细胞，接种于6孔板内，生长至培养皿的80％
‑
90％。然后使用BPTES 5μM浓度预刺激细胞24小时。然后再加入Yoda1(5μM)，继续培养24小时。通过蛋白免疫印迹法检测相关成骨指标的变化。
[0031]实验结果：BPTES可抑制Yoda1诱导的瓣膜间质细胞成骨反应。如图1所示，BPTES可降低Yoda1诱导的瓣膜间质细胞成骨蛋白ALP、RUNX2、BMP2的表达水平(图1A)。
[0032]应用茜素红染色检测人瓣膜间充质细胞钙结节沉积：
[0033]对P3
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P6代的人瓣膜间质细胞，移置于6孔板中，分别设置常规培养的阴性对照组、Yoda1处理组、BPTES+Yoda1处理组，每隔两天换一次液，培养21天后，用茜素红染色试剂盒(赛维尔)检测细胞钙盐沉积：细胞经75％酒精固定后，蒸馏水洗涤2次，加入茜素红染液，钙盐沉积部本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.BPTES在制备治疗钙化性主动脉瓣疾病的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：CAS号：314045
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1，分子式C24H24N6O2S3，结构式，3.一种抑制瓣膜间质细胞成骨蛋白RUNX2、BMP2、ALP表达的培养方法，所述方法包括：将传代稳定的人瓣膜间质细胞先予BPTES(5μM)预刺激24小时，再用Yoda1(5μM)干预24小时。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述诱导培养在CO2体积浓度5％、O...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾庆春，许顶立，钟国恒，苏舒文，周学峰，唐斓，李顺益，
申请(专利权)人：南方医科大学南方医院，
类型：发明
国别省市：