一种多肽用于制备治疗创伤后应激障碍药物的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种多肽用于制备治疗创伤后应激障碍药物的应用，涉及预防及治疗药物研发领域。本发明专利技术公开了小分子多肽P

【技术实现步骤摘要】
一种多肽用于制备治疗创伤后应激障碍药物的应用


[0001]本专利技术涉及预防及治疗药物研发领域，更具体地，涉及一种多肽用于制备治疗创伤后应激障碍药物的应用。

技术介绍

[0002]创伤后应激障碍(PTSD)是一种精神类疾病，主要由于个体受到强烈的创伤如车祸，火灾，暴力等而引发，并且症状可以持续数月或数十年。同时，PTSD往往与其他精神疾病，比如抑郁、自杀想法并存。然而，目前临床上最常用的方法是在心理学家或精神科医生的指导下的暴露疗法，而这个过程是低效的，它可能需要长久的治疗过程来克服这段痛苦的记忆。当然，目前还有一些药物疗法，比如抗抑郁药，如SSRI药物氟西汀(百忧解)(fluoxetine(Prozac)和帕罗西汀(赛乐特)(paroxetine(Paxil)，在治疗PTSD的一些症状中是有效的，但此类药物有潜在的心理依赖和成瘾性。所以，急需找到一种可以有效治疗的药物。
[0003]TAT称细胞穿膜多肽(cell penetrating peptides)，是近年来发现的一种高效运输载体。TAT能够穿透细胞膜、细胞核膜，携带多肽、蛋白质以及DNA分子等通过受体转运方式进入胞质和胞核发挥相应的生物效应。TAT能将与之相连的多肽在数分钟内带入细胞，而且可以跨越血脑屏障进入神经元内，被带入细胞的多肽则保留了它们原有的生物活性，从而发挥生物学作用。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于提供了一种小分子多肽P
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2A用于制备治疗创伤后应激障碍药物的应用，其序列为SEQ ID NO.1所示，进一步地，在P
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2A的N末端连接有序列为SEQ ID NO.2所示的穿膜肽。本专利技术进一步地将TAT穿膜肽(YGRKKRRQRRR，即SEQ ID NO.2)与P
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2A(RFQQISSVR，即SEQ ID NO.1)连接，得到具有生物活性的TAT
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P
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2A多肽(YGRKKRRQRRRRFQQISSVR，即SEQ ID NO.3)利用TAT的穿膜功能将P
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2A多肽输送进入血液穿过血脑屏障，并被大脑神经细胞摄取从而发挥其生物学功能。
[0005]根据本专利技术第一方面，提供了一种多肽用于制备治疗创伤后应激障碍药物的应用，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0006]优选地，所述创伤后应激障碍为恐惧记忆消退障碍。
[0007]优选地，所述恐惧记忆消退障碍为线索性恐惧记忆消退障碍。
[0008]优选地，所述多肽用于阻断Syn2a蛋白与Synaptogyrin
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3蛋白结合，从而恢复神经元突触前膜囊泡释放，使得自发性兴奋性突触后膜电位的频率增加。
[0009]优选地，所述多肽用于促进VAMP2
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Syntaxin
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SNAP25复合物的形成，从而改善突触前膜囊泡的释放。
[0010]优选地，所述多肽的N末端还连接有穿膜肽。
[0011]优选地，所述穿膜肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0012]根据本专利技术的另一方面，提供了一种治疗创伤后应激障碍药物，包括作为活性成分的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽。
[0013]优选地，SEQ ID NO.1所示的多肽的N末端还连接有穿膜肽。
[0014]优选地，所述穿膜肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0015]总体而言，通过本专利技术所构思的以上技术方案与现有技术相比，主要具备以下的技术优点：
[0016](1)本专利技术合成的一个由与Syn2a蛋白竞争性结合到Syngr
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3的氨基酸序列组成的膜渗透性小分子多肽P
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2A，通过运用到在体的小鼠PTSD模型上，有效发挥其阻断Syn2a与Syngr
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3的结合，使神经元的突触前膜囊泡释放部分恢复，从而降低难消退模型小鼠(AtLAS
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鼠)的僵直率，做到治疗PTSD的目的。
[0017](2)本专利技术所涉及的小分子多肽TAT
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P
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2A完全可溶，纯度高，适合腹腔注射，无毒副作用。
[0018](3)本专利技术公开的TAT
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P
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2A多肽，TAT可以携带P
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2A蛋白多肽经血液穿过血脑屏障被神经元摄取，可以转化应用于神经系统，调控恐惧记忆消退行为学，使其具有实际操作的可行性。
附图说明
[0019]图1为在HEK 293T细胞中中打断Syn2a和Syngr3的结合的免疫共沉淀图。
[0020]在HEK 293T细胞中共转染表达EGFP
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Syn2a和HA
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Syngr3的质粒，转染48小时之后，给予0，5，10，20μM TAT
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P
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2A孵育，处理8小时，然后收集细胞蛋白。过表达的Synapsin 2a蛋白为Synapsin 2a和EGFP的融合蛋白，用抗EGFP抗体沉淀细胞蛋白，再用抗HA抗体检测沉淀下来的蛋白，通过NC膜上的黑色印迹表明Syngr3与Syn2a的相互作用。给予10,20μM TAT
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P
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2A后，抗HA的抗体几乎无法检测到NC膜上的相应蛋白，提示10μM TAT
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P
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2A即可打断Syn2a与Syngr3的相互作用。而0μM对照组则明显可检测到HA蛋白，说明10μM TAT
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P
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2A可打断Syn2a和syngr3的结合。
[0021]图2为C57小鼠和AtLAS
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小鼠注射TAT
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P
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2A多肽溶液后进行恐惧记忆消退行为学检测。
[0022]随机选取6只普通C57小鼠和6只AtLAS
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鼠腹腔注射10mg/kg TAT
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P
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2A多肽溶液，其他6只普通C57小鼠和6只AtLAS
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‑
鼠腹腔注射10mg/kg TAT
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S
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2A多肽溶液，连续注射4次(具体见图2中的A)。之后进行恐惧记忆检测结果显示，对于普通C57小鼠给予10mg/kg的TAT
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P
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2A溶液注射的小鼠其恐惧记忆消退僵直率并无明显改变，而在恐惧记忆难消退小鼠(AtLAS
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鼠)给予10mg/kg的TAT
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P
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2A溶液其恐惧记忆消退僵直率明显降低(图2中的B)。
[0023]图3为TAT
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽用于制备治疗创伤后应激障碍药物的应用，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述创伤后应激障碍为恐惧记忆消退障碍。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述恐惧记忆消退障碍为线索性恐惧记忆消退障碍。4.如权利要求1
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3任意一项所述的应用，其特征在于，所述多肽用于阻断Syn2a蛋白与Synaptogyrin
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3蛋白结合，从而恢复神经元突触前膜囊泡释放，使得自发性兴奋性突触后膜电位的频率增加。5.如权利要求1
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3任意一项所述的应用，其特征在于，所述多肽用于促进VAMP2
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【专利技术属性】
技术研发人员：朱铃强，沈细亚，刘丹，张娟，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：