一种可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料及其制备方法技术

本发明专利技术提出可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料及其制备方法，具体涉及医疗生物敷料材料技术领域,本发明专利技术可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料由羊皮通过脱毛、剖层、消毒、脱细胞、冷冻干燥、灭菌以及与细胞共培养制备而成，保留了皮肤的胶原纤维支架，同时没有细胞毒性，能够为临床提供了一种可以承载细胞的、促进创面愈合的真皮替代物。面愈合的真皮替代物。面愈合的真皮替代物。

【技术实现步骤摘要】
一种可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料及其制备方法


[0001]本专利技术涉及医疗生物敷料
，尤其涉及一种可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料及其制备方法。

技术介绍

[0002]皮肤软组织缺损多发生于创伤、烧伤、瘢痕或肿瘤切除术后以及全身性疾病导致的皮肤慢性溃疡等情况，在严重大面积深度烧伤救治过程中，由于自体皮源不足，往往需要应用各种自体皮肤的代用品覆盖创面，在代用品当中，临床应用效果较好的是异体皮肤，但异体皮来源日趋困难，价格昂贵，使用受到了重重限制。
[0003]目前临床上常用异种脱细胞真皮基质（acellular dermal matrix,ADM）作为真皮替代物，异种皮通过特殊处理后，可去除组织中的具有免疫源性的细胞成分，保留皮肤组织胶原纤维的三维立体结构，可诱导成纤维细胞、血管内皮细胞长入，具有促进组织再生的作用，而目前脱细胞真皮制备处理的方法主要有化学方法、物理方法和生物学方法，其中化学方法通常采用酸碱裂解结合表面活性剂去除细胞，通过戊二醛交联降低免疫源性，但其残留物仍具有细胞毒性作用，针对化学方法制备残留的细胞毒性，也有选用物理方法制备脱细胞真皮基质，物理方法通常使用反复冻融的方法，将皮片反复交替置于
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80℃和37℃环境下，通过冷冻过程形成冰晶，膨胀破坏细胞，以达到去除细胞的目的，但该方法脱细胞效果不佳，细胞碎片不易完全去除，生物学方法常使用分散酶和胰酶消化皮片组织，但细胞消化不完全，免疫源性物质残留较多，而通过这两种方法进行以制备的脱细胞真皮基质，仍具有细胞毒性，或者细胞去除不干净，获得的脱细胞真皮基质的组织生物相容性差，细胞无法生长，针对这些制备脱细胞真皮基质方法的不足之处，急需改善改进制备方法，制备出免疫原性低，组织相容性好，能够支持细胞生长的脱细胞真皮基质。
[0004]鉴于此，本专利技术提出一种可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料及其制备方法，在具有较好的相容性同时免疫原性低。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术提出一种可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料及其制备方法。
[0006]本专利技术通过以下技术方案实现：本专利技术提出一种可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料制备方法，包括以下步骤：S1.获取3
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6月龄的新鲜绵羊皮肤，采用皂液浸润羊皮表层，将羊皮表层的羊毛剔除干净；S2.将剔除羊毛的羊皮取出皮下组织，得到厚度为0.5
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0.8毫米的皮片，随后利用第一蒸馏水对皮片进行冲洗，采用新吉尔灭溶液浸泡30min，重复至少两次，再使用双氧水浸泡30min，重复至少两次得到消毒后的皮片；S3.采用0.25%质量分数的胰酶溶液进行过夜消化，控制温度至37℃并持续12h，次
日利用第二蒸馏水清洗皮片，将清洗后的皮片放入第二蒸馏水中浸泡，每隔12
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24h更换第二蒸馏水；S4.两天后再次采用0.25%质量分数的胰酶溶液进行过夜消化，使用第二蒸馏水再次浸泡，每隔12
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24h更换，浸泡十天左右，直至羊皮的细胞完全去除干净；S5.将去除细胞赶紧的羊皮置于冷冻干燥机中，直至羊皮完全干燥，随后将冻干的羊皮置于超净工作台内，对冻干的羊皮两面进行紫外线照射各3h，得到可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料。
[0007]进一步的，所述新吉尔灭溶液的质量分数为0.1%。
[0008]进一步的，所述双氧水的质量分数为3%。
[0009]进一步的，所述第二蒸馏水为含有1%双抗素的灭菌蒸馏水。
[0010]进一步的，所述双抗素为100U/mL青霉素和100U/mL链霉素。
[0011]进一步的，所述S4步骤中完全去除羊皮的细胞步骤包括：取不同部位的羊皮做H&E染色，观察细胞是否完全去除干净，若未去除干净，则重复采用0.25%质量分数的胰酶溶液过夜消化，直至细胞完全去除。
[0012]进一步的，所述第一蒸馏水采用灭菌蒸馏水。
[0013]一种可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料，所述可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料由羊皮通过脱毛、剖层、消毒、脱细胞、冷冻干燥、灭菌以及与细胞共培养制备而成。
[0014]本专利技术的有益效果：本专利技术提出的可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料去除了其中原有的具有免疫原性的细胞成分，还保留了皮肤的胶原纤维支架，没有细胞毒性，在冷冻干燥后的羊脱细胞真皮，胶原纤维支架的空隙增大，细胞可以进入至胶原纤维支架内部，为临床提供一种可以承载细胞的、促进创面愈合的真皮替代物。
附图说明
[0015]图1为本专利技术的可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料的H&E染色结果下未除去细胞的羊皮；图2为本专利技术的可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料H&E染色结果除去细胞的羊皮；图3为本专利技术的可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料羊皮完全干燥后的示意图；图4为本专利技术的可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料实施例1的细胞毒性检测结果图；图5为本专利技术的可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料实施例2的共同培养图；图6为本专利技术的可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料实施例2的共同培养的H&E染色结果；图7为本专利技术的可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料实施例3的复合结果示意图；本申请为目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
[0016]为了更加清楚完整的说明本专利技术的技术方案，下面结合附图对本专利技术作进一步说
明。
[0017]请参考图1
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图7，本专利技术提出可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料制备方法，包括以下步骤：S1.获取3
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6月龄的新鲜绵羊皮肤，采用皂液浸润羊皮表层，将羊皮表层的羊毛剔除干净；S2.将剔除羊毛的羊皮取出皮下组织，得到厚度为0.5
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0.8毫米的皮片，随后利用第一蒸馏水对皮片进行冲洗，采用新吉尔灭溶液浸泡30min，重复至少两次，再使用双氧水浸泡30min，重复至少两次得到消毒后的皮片；S3.采用0.25%质量分数的胰酶溶液进行过夜消化，控制温度至37℃并持续12h，次日利用第二蒸馏水进行清洗皮片，将清洗后的皮片放入第二蒸馏水中进行浸泡，每隔12
‑
24h更换含有第二蒸馏水；S4.两天后再次采0.25%用胰酶溶液进行过夜消化，使用第二蒸馏水再次浸泡，每隔12
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24h更换，浸泡十天左右，直至羊皮的细胞完全去除干净；S5.将去除细胞赶紧的羊皮置于冷冻干燥机中，直至羊皮完全干燥，随后将冻干的羊皮置于超净工作台内，对冻干的羊皮两面进行紫外线照射各3h，得到可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料。
[0018]在本实施方式中，可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料由羊皮通过脱毛、剖层、消毒、脱细胞、冷冻干燥、灭菌以及与细胞共培养制备而成，所述第一蒸馏水采用灭菌蒸馏水，所述第二蒸馏水为含有1%双抗素的灭菌蒸馏水，第一蒸馏水和第二蒸馏水的区别在于第二蒸馏水含有1%的双抗100U/mL青霉素和100U本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.获取3
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6月龄的新鲜绵羊皮肤，采用皂液浸润羊皮表层，将羊皮表层的羊毛剔除干净；S2.将剔除羊毛的羊皮取出皮下组织，得到厚度为0.5
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0.8毫米的皮片，随后利用第一蒸馏水对皮片进行冲洗，采用新吉尔灭溶液浸泡30min，重复至少两次，再使用双氧水浸泡30min，重复至少两次，得到消毒后的皮片；S3.采用0.25%质量分数的胰酶溶液进行过夜消化，控制温度至37℃并持续12h，次日利用第二蒸馏水清洗皮片，将清洗后的皮片放入第二蒸馏水中浸泡，每隔12
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24h更换第二蒸馏水；S4.两天后再次采用0.25%质量分数的胰酶溶液进行过夜消化，使用第二蒸馏水再次浸泡，每隔12
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24h更换，浸泡十天左右，直至羊皮的细胞完全去除干净；S5.将去除细胞赶紧的羊皮置于冷冻干燥机中，直至羊皮完全干燥，随后将冻干的羊皮置于超净工作台内，对冻干的羊皮两面进行紫外线照射各3h，得到可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料。2.根据权利要求1所述的可复合细胞的羊脱细胞真皮生物敷料制备方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李芳，王凌峰，符雪，曹胜军，李全，
申请(专利权)人：内蒙古包钢医院，
类型：发明
国别省市：