一种血清同型半胱氨酸测定试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种同型半胱氨酸测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：三羟甲基氨基甲烷

【技术实现步骤摘要】
一种血清同型半胱氨酸测定试剂盒


[0001]本专利技术涉及生化试剂测定
，特别涉及一种同型半胱氨酸测定试剂盒，还涉及所述同型半胱氨酸测定试剂盒制备方法和应用。

技术介绍

[0002]同型半胱氨酸(HCY)是人们日常饮食中的蛋白类物质在体内转化、代谢过程所产生的一种中间产物，它通过甲基化和转硫途径进行代谢，维持着人体的甲基化和抗氧化两大能力。
[0003]HCY具有重要的临床意义：1、HCY与心血管系统疾病；同型半胱氨酸自1931年被Vincent du Vigneaud发现，1969年McCully首次提出高水平的同型半胱氨酸浓度是引起血管病变的原因，从此，HCY逐渐引起研究者的注意，到目前为止，大量对HCY的研究表明HCY是心脑血管疾病的独立危险因素，危险度随着浓度的升高而增加。高浓度的HCY与未来的冠心病和导致的死亡有重要的相关性。对国人来说，HCY浓度＞9.47μmol/L，心血管患病率增加2.3倍；HCY浓度＞11.84μmol/L，死亡增加2.4倍。2、HCY与妊娠期相关疾病；孕产妇HCY水平升高影响胎儿生长发育的原因：母亲高HCY会引起胎盘血管内皮细胞损伤、血管硬化，减少胎盘血流灌注，致使供氧、营养物质不足，影响胎儿发育。影响胎儿对蛋氨酸的利用，从而影响到胎儿的生长发育。HCY水平升高是叶酸缺乏的表现，叶酸是合成DNA的重要辅酶，在胎儿生长发育中起到重要作用。血浆中HCY水平升高与习惯性流产、妊娠高血压综合征、胎盘早剥、胎儿生长受限、胎儿畸形、死胎、早产、低体重儿等的发生密切相关。孕妇妊娠期缺乏叶酸及Vit B将可能发生高同型半胱氨酸血症，从而对母儿造成危害。3、HCY与糖尿病；高HCY血症是引起糖尿病慢性并发症的又一重要危险因素(如糖尿病肾病，动脉斑块，糖尿病视网膜病变等)。4、HCY与老年痴呆；血浆HCY水平升高对于发展为痴呆和老年性痴呆是一个强大的、独立的危险因子。血浆HCY升高5μmol/L，患老年性痴呆的危险性增加40％。
[0004]临床或实验室诊断方法有比色法、色谱法、同位素法等。目前检测同型半胱氨酸的方法主要是生化试剂中的比色法，该方法具有特异性高，操作简单快捷、安全、可自动化分析、成本较低的优点。目前生化试剂有双试剂和三试剂的水解酶法和胱硫醚法，胱硫醚法准确度差，水解酶法稳定性差，成本较高。本专利技术针对现有水解酶法同型半胱氨酸试剂盒的缺点进行改进以满足临床检测以及化学分析的要求。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术提供一种同型半胱氨酸测定试剂盒及其制备方法和应用，该试剂盒是一种稳定性强，灵敏度高，重复性好的液体试剂盒。
[0006]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0007]一种同型半胱氨酸测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；
[0008]试剂R1中含有以下成分：
[0009][0010]试剂R2中含有以下成分：
[0011][0012]优选地，所述试剂R1和R2的缓冲液选自三羟甲基氨基甲烷
‑
盐酸缓冲液。
[0013]优选地，所述试剂R1的pH为8.5
‑
9.5，更优选地为8.8；试剂R2的pH为7.5
‑
8.5，更优选地为8.0。
[0014]优选地，所述试剂R2试剂中的表面活性剂选自吐温系列、司盘系列、曲拉通系列和聚氧丙烯硬脂酸酯中的一种或多种，更优选地为聚氧丙烯硬脂酸酯和司盘20。
[0015]优选地，所述试剂R1和R2试剂中的防腐剂为叠氮钠、proclin300、MIT、硫柳汞和硫酸庆大霉素中的一种或多种，更优选地为叠氮钠。
[0016]优选地，所述试剂R1与试剂R2的体积比为1～5:1。更优选地，所述试剂R1与试剂R2的体积比为4:1。
[0017]上述所述的同型半胱氨酸测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：试剂R1、R2均先加入三羟甲基氨基甲烷
‑
盐酸缓冲液，用盐酸或氢氧化钠调节pH，试剂R1的pH值为8.8，R的pH值为8.0，再按照比例添加其他物质溶解，制成同型半胱氨酸测定试剂盒。
[0018]本专利技术还公开了同型半胱氨酸测定试剂盒的应用，用于非疾病的诊断和治疗目的测定血清中同型半胱氨酸的浓度。
[0019]本专利技术试剂盒采用比色法，其反应原理为基于小分子捕获技术(SMT)的S
‑
腺苷同型半胱氨酸水解酶。同型半胱氨酸被转化为游离型后，通过与共价底物反应，循环放大，同时产生腺苷。腺苷立即水解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使NADH转化为NAD,样本中的同型半胱氨酸浓度与NADH转化速率成正比。反应具有特异性，使用全自动生化仪进行检测，操作简单、自动化程度高，可减少人为误差，试剂稳定，适合大多数临床实验室应用。
[0020]有益效果
[0021]1)本专利技术稳定的同型半胱氨酸测定试剂盒为液体双试剂，无需复溶配制，开瓶可以直接使用。
[0022]2)通过在试剂R1中加亚硫酸钠，有效地降低试剂中TCEP的氧化，且降低了干扰物质对TCEP的影响，大大增强试剂的分析灵敏度，提高试剂性能。
[0023]3)通过在试剂R2中加入聚氧丙烯硬脂酸酯和司盘20，两种成分共同作用，可以有效地降低多种酶的相互作用，防止多种酶的相互聚沉，提高试剂的准确性和稳定性。
[0024]4)该试剂的准确度、稳定性、分析灵敏度等性能指标卓越，价格便宜，使用方便，有利于该试剂在市场中进一步推广。
附图说明
[0025]图1为实施例1试剂和对比例1试剂的相关性曲线；
[0026]图2为实施例1试剂线性的相关性曲线；
[0027]图3为实施例1试剂和对比例1、3、4、5试剂进行稳定性试验的浓度变化。
具体实施方式
[0028]下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步说明：
[0029]本实施例所述试剂盒，在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的迈瑞800全自动生化分析仪，利用速率法进行测定，检测主波长为340nm，操作如下：
[0030]加入生理盐水、样本或校准品12μL，再加入240μL的R1试剂，预孵育5min后，记录吸光度值A1；
[0031]再加入60μL的R2试剂，混匀，反应5min后，记录吸光度值A2，并计算ΔA。
[0032]同型半胱氨酸含量(umol/L)＝(ΔA样本
÷
ΔA校准品)
×
校准品浓度。
[0033]样本要求：
[0034]1.不溶血血清。
[0035]2.样本稳定性：标本2～8℃保存可稳定3天，
‑
20℃保存可稳定2周。
[0036]实施例1
[0037]一种常规的同型半胱氨酸测定试剂盒，它包括试剂R1和试剂R2。
[0038]试剂R1中含有以下成分：
[0039][0040][0041]试剂R2中含有以下成分：
[0042][0043]本实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同型半胱氨酸测定试剂盒，其特征在于，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：试剂R2中含有以下成分：2.根据权利要求1所述的单胺氧化酶测定试剂盒，其特征在于，所述试剂的缓冲液体系为三羟甲基氨基甲烷
‑
盐酸缓冲液、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、哌嗪
‑
1,4
‑
二乙磺酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、N
‑
氨基甲酰甲基乙磺酸缓冲液和2
‑
(N
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吗啉代)乙磺酸缓冲液中的一种。3.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的pH为8.5
‑
9.5，试剂R2的pH为7.5
‑
8.5。4.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R2试剂中的表面活性剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡书祥，刘明霞，隗勇，
申请(专利权)人：中科梅奥山东医学检验有限公司中金进出口有限公司中拓医学检验有限公司，
类型：发明
国别省市：