一种芒果果实的几丁质酶过敏原及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种芒果果实的几丁质酶过敏原及其应用，涉及生物技术相关技术领域。所述几丁质酶过敏原的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明专利技术所述几丁质酶过敏原为第Ⅳ类几丁质酶蛋白，是芒果中鉴定到的第一个拥有完整分子信息和致敏性数据的过敏原，与现有芒果几丁质酶存在两个氨基酸差异，两个氨基酸差异位置有高于现有芒果几丁质酶的预测表位得分(0.503(85Val)和0.461(193Lys))，且具有高于现有芒果几丁质酶的IgE结合能力，对过敏原的潜在致敏性存在影响。该几丁质酶过敏原可被用于制备治疗或预防过敏症的药物，或者用于制备过敏原检测的试剂盒。过敏原检测的试剂盒。过敏原检测的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
一种芒果果实的几丁质酶过敏原及其应用


[0001]本专利技术涉及生物技术相关
，特别是涉及一种芒果果实的几丁质酶过敏原及其应用。

技术介绍

[0002]芒果是世界上最重要的水果作物之一，随着芒果消费量的增加，其引发的过敏问题也愈加严重。芒果引发的过敏可分为三类，分别是由IgE介导的Ⅰ型速发型过敏反应，由免疫细胞介导的Ⅳ型迟发型过敏反应，以及蛋白质接触过敏，其中由IgE介导的速发型超敏反应近年来的发生率持续增长。而目前临床上用芒果提取物对患者进行体内和体外诊断的效率低下，漏诊率较高，存在安全隐患。
[0003]过敏原组分的应用能够大大提高临床诊断的精确度和灵敏度，已经成为过敏性疾病诊断的发展趋势。而芒果果实过敏原分子鉴定的研究远远落后于其它水果。很多研究中利用患者血清免疫印迹显示，芒果中存在14kDa、17kDa、30kDa、40kDa、50kDa、60kDa和67kDa等多个过敏原，但目前为止，仅有两种过敏原分子得到鉴定，分别是14kDa的抑制蛋白以及37kDa的3
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磷酸甘油醛脱氢酶，然而这两种过敏原以前并没有被纳入国际过敏原命名委员会(WHO/IUIS Allergen Nomenclature Home Page)，也没有应用于芒果过敏的诊断中。国内外的研究表明，芒果过敏常伴随着蒿花粉，桦树花粉，以及乳胶、胡萝卜、芹菜等的过敏。免疫抑制实验表明，芒果与蒿花粉、桦树花粉、乳胶之间均存在交叉反应，其中14kDa，27kDa，40kDa和67kDa的过敏原能够引起芒果与蒿花粉之间的交叉反应，而桦树花粉中的病程相关蛋白第10家族过敏原Bet v 1以及35kDa，40kDa，67kDa的过敏原能够引发与芒果之间的交叉反应。结合蛋白质组学及质谱技术，有研究鉴定到抑制蛋白，几丁质酶，β
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葡聚糖酶等是芒果果实中潜在的过敏原，尤其是几丁质酶。
[0004]而已发表的研究中所报道的几丁质酶均只包含部分序列，N
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端和C
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端都不完整(NCBI序列号为ACD69683)，N
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端缺少27个氨基酸，C
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端缺少11个氨基酸(图1)，用不完整序列重组生产的过敏原对蛋白质的结构和IgE结合表位都有影响，无法应用于临床诊断。目前芒果中几丁质过敏原的完整分子信息还未得到表征，过敏原组分的缺乏使芒果过敏的临床诊断存在很大问题，国内外的研究均表明，使用芒果提取物(如ImmunoCAP系统)进行诊断时，其阳性检出率均不足30％，因此亟需对芒果果实过敏原信息进行表征并将其应用于组分诊断，以此提高诊断效率。

技术实现思路

[0005]为解决现有技术中的不足，本专利技术提供了一种芒果果实的几丁质酶过敏原及其应用。
[0006]本专利技术的技术方案如下：
[0007]本专利技术提供了一种芒果果实的几丁质酶过敏原，几丁质酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，属于第Ⅳ类几丁质酶。
[0008]本专利技术又提供了编码上述几丁质酶过敏原的DNA分子，核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
[0009]本专利技术还提供了包含上述DNA分子的重组表达载体。所述重组表达载体可以为各种用于蛋白表达的质粒。
[0010]本专利技术还提供了包含上述DNA分子或包含上述重组表达载体的宿主生物体。所述宿主生物体可以为用于原核表达的大肠杆菌、用于真核表达的酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞(如CHO细胞)等各种蛋白表达系统。
[0011]本专利技术还提供了上述几丁质酶过敏原或上述DNA分子在制备治疗或预防芒果过敏症的药物中的应用。
[0012]本专利技术还提供了一种用于治疗或预防芒果过敏症的药物，包含上述几丁质酶过敏原或上述DNA分子中的至少一种。
[0013]优选的，所述药物可为脱敏免疫疫苗。
[0014]有效治疗过敏症的传统方法是特异性免疫治疗或脱敏，即以递增的剂量对过敏患者皮下注射天然过敏原提取物。
[0015]本专利技术还提供了上述几丁质酶过敏原或上述DNA分子在制备过敏原检测的试剂盒中的应用。
[0016]本专利技术还提供了一种用于过敏原检测的试剂盒，包含上述几丁质酶过敏原或上述DNA分子中的至少一种。
[0017]对于过敏症患者，一个重要的手段是检查出引起过敏的过敏原，通过有针对性的减少与过敏原的接触可有效预防过敏的发生。本专利技术所述几丁质酶过敏原或所述DNA分子可以用于单独或者与其他过敏原一起使用，制备成用于筛查过敏症患者的过敏原的试剂盒。
[0018]本专利技术一种芒果果实的几丁质酶过敏原，为第Ⅳ类几丁质酶蛋白，是芒果中鉴定到的第一个拥有完整分子信息和致敏性数据的过敏原，与现有芒果几丁质酶存在两个氨基酸差异，两个氨基酸差异位置有高于现有芒果几丁质酶的预测表位得分(0.503(85Val)和0.461(193Lys))，且具有高于现有芒果几丁质酶的IgE结合能力，对过敏原的潜在致敏性存在影响。该几丁质酶过敏原可被用于制备治疗或预防过敏症的药物，或者用于制备过敏原检测的试剂盒。
附图说明
[0019]图1为芒果两种几丁质酶序列比对图。
[0020]图2为实施例1中芒果果实提取物电泳和免疫印迹图，a图为果实提取物电泳图，ME表示果实提取物；图b为芒果果实提取物与过敏患者血清免疫印迹图，1
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5代表不同的阳性血清与提取物的结合，N代表阴性对照。
[0021]图3为实施例3芒果天然几丁质酶的纯化图；图a表示分子筛纯化曲线，箭头所指的峰包含天然几丁质酶；图b
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c表示天然几丁质酶电泳检测和免疫印迹；图d表示纯化后的天然几丁质酶的二级质朴结果，高亮部分为质谱匹配肽段。
[0022]图4为芒果果实天然几丁质酶分子量质谱图。
[0023]图5为重组几丁质酶电泳检测图。
[0024]图6为重组几丁质酶二级质谱图，高亮部分代表质谱匹配肽段。
具体实施方式
[0025]芒果果实“凯特”：采集自湛江。
[0026]芒果过敏阳性血清：来源于浙江大学医学院附属第二医院以及科研合作的山西省大同市第三人民医院临床病例，山西医科大学附属第一医院，伦理批号No.2020
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050，2015
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001，2019K
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K0007。所有患者都同意并签有知情同意书。
[0027]实施例1
[0028]提取“凯特”芒果(Mangifera indica)果实总蛋白。蛋白提取纯化方法：取1g液氮研磨后的果实粉末用5mL预冷的丙酮在4℃下脱脂三次，每次1h，离心后加入5mL的PBS缓冲液在4℃下提取3h，离心取上清并用0.22μm Millipore膜过滤即为芒果果实蛋白。SDS
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PAGE电泳对提取物进行检测，BCA法测定总蛋白含量。
[0029]将提取物好的芒果果实蛋白用12％浓度的SDS
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PAGE电泳分离本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种芒果果实的几丁质酶过敏原，其特征在于，几丁质酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。2.编码如权利要求1所述几丁质酶过敏原的DNA分子，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。3.包含如权利要求2所述DNA分子的重组表达载体。4.包含如权利要求2所述DNA分子或包含如权利要求3所述重组表达载体的宿主生物体。5.如权利要求1所述几丁质酶过敏原或如权利要求2所述DNA分子在制备治疗或预防芒果过敏症的药物中...

【专利技术属性】
技术研发人员：高中山，赵岚，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：