一种核酸污染去除剂及其使用方法技术

本发明专利技术提供一种核酸污染去除剂，包括以下重量份的原料：A液含广谱核酸酶0.005KU

【技术实现步骤摘要】
一种核酸污染去除剂及其使用方法


[0001]本专利技术涉及核酸污染去除剂
，特别涉及一种核酸污染去除剂及其使用方法。

技术介绍

[0002]随着分子生物学的发展，核酸编辑、扩增、测序、鉴定等以核酸为中心的技术变得越来越先进和方便。尤其是DNA/RNA测序、数字PCR和转基因技术的出现，使得核酸技术应用越来越广泛，灵敏度也越来越高。核酸是脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的总称，是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子化合物。核酸检测是一项具有高度准确性的科学实验，实验室阳性对照、质控、阳性样本等污染是一个不可避免的难题，其中实验环境导致的污染既是最容易产生的污染，也是最难消除的污染，核酸污染极易造成假阳性结果，有效清除PCR实验室污染，成了一个实验室必须解决的难题。现有技术的核酸清理都是以消毒剂成分，如过氧化物为过氧化氢、过氧化钠和过氧乙酸中的一种或几种；或者氯离子为主要消毒成分的核酸清除剂，利用过氧化物、裂解液等强氧化剂的氧化功能，把实验室残留的核酸裂解掉，从而降低实验室环境中的核酸，强氧化剂大多都有不愉快的气味和强酸性，长期使用会腐蚀实验室仪器、设备和设施，对实验室操作人员有一定的危害性，并且长期使用消毒剂成分不可能清除干净，会造成实验室二次污染。

技术实现思路

[0003]为了解决上述技术问题，本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种核酸污染去除剂，包括以下重量份的原料：A液含广谱核酸酶0.005KU
‑
1KU/ml,缓冲液0.001%
‑
2%、Glycerol10%
‑
50%，金属离子盐0.001%
‑
1%；B液含缓冲液0.01％
‑
1％、金属离子盐0 .01％
‑
0.1％和去离子水；C液含氯试剂0 .2％
‑
2％、表面活性剂0.5%
‑
3%、缓冲剂0.01%
‑
1%、蛋白变性剂0.5%
‑
3%、醋酸钾（KAC）0.01%
‑
1%及去离子水。
[0004]作为优选方案，所述广谱核酸酶为为冻干粉剂，所述广谱核酸酶的纯度 ≥98% 、活性 ≥ 1.0 x 106U/ml 、比活≥ 1.0 x 106U/mg（蛋白），使用广谱核酸酶冻干粉剂制备A液1000ml，称量广谱核酸酶冻干粉0.01ug
‑
15ug加入到容器中，用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.01ml
‑
0.2ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，称配1克
‑
5克金属离子盐加入到容器内，称量100ml
‑
500mlGlycerol加入到容器中，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30
‑
60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调PH值7.5
‑
8.5，加去离子水至1000ml，备用，如A液的包装规格1ml/瓶，分装成1000瓶，
‑
20
°
冷冻保存。
[0005]作为优选方案，所述广谱核酸酶为无菌液体酶，所述广谱核酸酶的纯度 ≥90% 、活性 ≥ 2.5 x 105U/ml、比活≥≥ 1.5
×
106U/mg（蛋白）；使用无菌液体酶作为A液的原料制备A液1000ml，配制方法如下：移液枪取广谱核酸酶无菌液0.4ml
‑
60ml加入到容器中，用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐1ml
‑
20ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，再用移液
枪吸取1克
‑
5克金属离子盐加入到容器内，称量100ml
‑
500mlGlycerol加入到容器中，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30
‑
60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调PH值7.5
‑
8.5，加去离子水至1000ml，备用；如A液的包装规格1ml/瓶，分装成1000瓶，
‑
20
°
冷冻保存使用时复溶至室温。
[0006]作为优选方案，所述B液为稀释液，常温保存，制备1000mlB液稀释剂配制方法如下：用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.1ml
‑
2ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，称取0.1g
‑
10g金属离子盐加入到容器内，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30
‑
60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调PH值7.5
‑
8.5，加去离子水至1000ml。
[0007]作为优选方案，所述C液为含氯离子的消毒剂，制备1000mlC液的方法如下：用移液枪吸取含氯试剂2ml
‑
20ml，加入到容器内，再用移液枪吸取5ml
‑
30ml表面活性剂加入到容器内，用移液枪吸取缓冲剂0.1ml
‑
10ml加入到容器内，称量5ml
‑
30m蛋白质变性剂加入到容器中，再称量醋酸钾0.1g
‑
10g加入到容器内，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30
‑
60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调PH值7.5
‑
8.5，加去离子水至1000ml，备用。
[0008]作为优选方案，所述A液的广谱核酸酶包括但不限于野生型、各种基因改造的广谱核酸外切酶、野生型、各种基因改造的广谱核酸内切酶，包含从3
′
端
→5′
端外切酶端开始逐个水解核苷酸和从5
′
端
→3′
端逐个水解的外切酶以及广谱核酸内切酶包括水解5
′
磷酸二酯键，把磷酸基团留在3
′
位置上的5
′‑
内切酶、水解3
′‑
磷酸二酯键，把磷酸基团留在5
′
位置上的3
′‑
内切酶以及对磷酸酯键一侧的碱基有高度专一性核酸内切酶；所述A液的缓冲液包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、SDS以及Triton X100。
[0009]作为优选方案，所述B液的缓冲液包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、SDS以及Triton X100，B液的金属离子包括但不限于氯化钾、氯化钠、氯化镁、氯化钙以及钾、钠、镁、钙所成的盐类化合物。
[0010]8.根据权利要求1所述的核酸污染去除剂，其特征在于，所述C液的含氯试剂包括但不限于次氯酸钠、次氯酸以及含有次氯酸根的化合物，C液的缓冲剂包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、SDS以及Triton X100，C液的蛋白变性剂包括但不限于过氧化物、十二烷基硫酸钠、胍盐、尿素；一种核酸污染去除剂的使用方法，实验台面、超净工作台、设备及仪器表面的清洁本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸污染去除剂，其特征在于，包括以下重量份的原料：A液含广谱核酸酶0.005KU
‑
1KU/ml,缓冲液0.001%
‑
2%、Glycerol10%
‑
50%，金属离子盐0.001%
‑
1%；B液含缓冲液0.01％
‑
1％、金属离子盐0 .01％
‑
0.1％和去离子水；C液含氯试剂0 .2％
‑
2％、表面活性剂0.5%
‑
3%、缓冲剂0.01%
‑
1%、蛋白变性剂0.5%
‑
3%、醋酸钾（KAC）0.01%
‑
1%及去离子水。2.根据权利要求1所述的核酸污染去除剂，其特征在于，所述广谱核酸酶为为冻干粉剂，所述广谱核酸酶的纯度 ≥98% 、活性 ≥ 1.0 x 10
6 U/ml 、比活≥ 1.0 x 10
6 U/mg（蛋白），使用广谱核酸酶冻干粉剂制备A液1000ml，称量广谱核酸酶冻干粉0.01ug
‑
15ug加入到容器中，用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.01ml
‑
0.2ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，称配1克
‑
5克金属离子盐加入到容器内，称量100ml
‑
500mlGlycerol加入到容器中，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30
‑
60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调PH值7.5
‑
8.5，加去离子水至1000ml，备用，如A液的包装规格1ml/瓶，分装成1000瓶，
‑
20
°
冷冻保存。3.根据权利要求1所述的核酸污染去除剂，其特征在于，所述广谱核酸酶为无菌液体酶，所述广谱核酸酶的纯度 ≥90% 、活性 ≥ 2.5 x 10
5 U/ml、比活≥≥ 1.5
×
106U/mg（蛋白）；使用无菌液体酶作为A液的原料制备A液1000ml，配制方法如下：移液枪取广谱核酸酶无菌液0.4ml
‑
60ml加入到容器中，用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐1ml
‑
20ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，再用移液枪吸取1克
‑
5克金属离子盐加入到容器内，称量100ml
‑
500mlGlycerol加入到容器中，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30
‑
60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调PH值7.5
‑
8.5，加去离子水至1000ml，备用；如A液的包装规格1ml/瓶，分装成1000瓶，
‑
20
°
冷冻保存使用时复溶至室温。4.根据权利要求1所述的核酸污染去除剂，其特征在于，所述B液为稀释液，常温保存，制备1000mlB液稀释剂配制方法如下：用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.1ml
‑
2ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，称取0.1g
‑
10g金属离子盐加入到容器内，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30

【专利技术属性】
技术研发人员：王风滩，王兰兰，王秀兰，李娜，
申请(专利权)人：菏泽德康医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：