空白血液基质、干血片及其制备和在检测靶标中的应用制造技术

本发明专利技术涉及检测领域，具体涉及一种空白血液基质，为包含血红蛋白、血清蛋白、pH调节剂、稳定剂、表面活性剂、磷酸盐缓冲液的混合溶液；其中，血红蛋白的浓度为20％

【技术实现步骤摘要】
空白血液基质、干血片及其制备和在检测靶标中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种空白血液基质。

技术介绍

[0002]液相色谱
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串联质谱法具有特异性强、灵敏度高、线性范围宽和一次进样可检测多种化合物等突出优势，作为一种重要的检测技术被广泛应用与临床检测和药物研发。干血片(Dried Blood Spot，DBS)是一种将采集简单、运输便捷和可长期储存的血液样本采集方法。对于婴幼儿、不能大量和频繁采血的患者，液相色谱
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串联质谱法对干血片的临床检测有重大优势，但是液相串联质谱技术检测对干血片的研究并不如对血清、血浆、尿液等基质的多，究其原因，除了高灵敏度仪器还需更新迭代外，不存在人源性空白血液基质，也是很大的挑战。
[0003]人源性血液与待测生物具有相同的生物特性，可做人疾病检测试剂盒和检测方法中的校准品和质控品的理想基质。但是人源性空白血液存在一定的限制性，一方面，人血的采集在世界范围内都严格受控，且运输和储存成本高昂。同时，我国法律严格禁止人血液(指用于临床的全血、成分血和用于血液制品生产的原料血浆)买卖；另一方面，对于外源性物质的检测，可以使用正常人的样本作为空白基质，但是对于内源性物质的检测，就很难获得人源性空白基质用于标准曲线和质控的配制。现有临床检测方法和体外诊断试剂盒校准品和质控品基质多采用对人全血和动物全血进行处理，合成血液替代基质，该方法可有效去除血浆中的内源性物质，存在于血红细胞中的内源性物质还是不能去除，较高的基底值用做校准品和质控品，就不能在临床需要覆盖的检测浓度范围内得到准确的测定结果。空白血液基质的难获得一定程度上限制了干血片临床检测方法的开发和体外诊断试剂盒的生产。
[0004]因此，寻找具有相似生物特性且有极低内源物基底的可替代人全血的空白血液基质具有重要意义。

技术实现思路

[0005]针对现有人全血的空白血液基质存在较大基质效应和内源性物质不可消除的基底，以及靶标测试准确性不理想的问题，本专利技术第一目的在于，提供一种能够有效模拟人全血并具有超低基质效应全复配型空白血液基质。
[0006]本专利技术第二目的在于，提供包含所述空白血液基质的干血片。
[0007]本专利技术第三目的在于，提供所述的空白血液基质或干血片在制备检测靶标的体外诊断试剂盒中的应用。
[0008]为了更好地模拟全血特点，行业内常通过吸附、离心等手段对全血进行分离的方式获得基质，现有方法得到的基质仍存在较大的基质效应和内源性物质不可消除的基底，靶标测试的准确性、回收率并不理想。针对该问题，本专利技术跳脱出行业内认知，在行业内首次提供了一种全配制获得空白基质的思路，然而，研究发现，为了实现该全新的思路，需要
解决难于有效模拟全血特点以及难于实现有效测定等技术难题，针对本专利技术思路面临的技术难题，本专利技术经过深入研究，提供以下解决方案：
[0009]一种空白血液基质，为包含血红蛋白、血清蛋白、pH调节剂、稳定剂、表面活性剂、磷酸盐缓冲液的混合溶液；
[0010]其中，血红蛋白的浓度为20％
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60％(m/v)，血清蛋白的浓度为≤20％(m/v)、稳定剂的浓度≤10％(m/v)、表面活性剂的浓度≤0.5％(m/v)、pH调节剂浓度≤0.5％(m/v)。
[0011]本专利技术提供了一种全复配的空白血液基质，其基于成分以及比例的联合控制，能够实现协同，能够很好地模拟全血，且其基本不含氨基酸、肉碱、有机酸、激素、脂肪酸、维生素、神经递质或药物等内源性靶标物质，使其兼顾了优异的全血模拟以及低基质效应特点。
[0012]本专利技术中，所述的血红蛋白为牛血红蛋白或猪血红蛋白或人血红蛋白中的至少一种。
[0013]本专利技术中，所述的pH调节剂包括酸性物质和/或碱性物质；
[0014]所述的酸性物质包括甲酸、乙酸、氟化铵、盐酸中的至少一种；
[0015]所述的碱性物质包括氨水、氢氧化钠中的至少一种。
[0016]本专利技术中，所述的稳定剂为海藻糖、甘露醇中的至少一种。
[0017]在所述方法中，所述稳定剂是基质有保护作用的成分；
[0018]本专利技术中，所述的表面活性剂为吐温
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20、吐温
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80中的至少一种。
[0019]在所述方法中，所述表面活性剂有增溶扩散的作用；
[0020]本专利技术中，所述的磷酸盐缓冲液为PBS缓冲液，进一步可以为100mM磷酸钠；9.0％NaCl；pH 6.8
±
0.1(25℃)的PBS缓冲液。
[0021]本专利技术中，可根据需要，进一步通过超纯水调控各成分的浓度。
[0022]本专利技术所述的空白血液基质为模拟全血的空白血液基质。
[0023]优选地，所述的血红蛋白为牛血红蛋白或猪血红蛋白的至少一种，牛血红蛋白或猪血红蛋白更易获得。
[0024]优选地，所述的空白血液基质中，所述血红蛋白的浓度为30％
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50％(m/v)；
[0025]所述血清蛋白的浓度为2％
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10％(m/v)；
[0026]所述pH调节剂的浓度为0.1～0.5％(m/v)；
[0027]所述稳定剂的浓度为1％
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10％(m/v)；
[0028]所述表面活性剂的浓度为0.1％
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0.5％(v/v)；
[0029]溶剂为PBS缓冲溶液和水的混合溶剂；
[0030]更进一步优选，空白血液基中，所述血红蛋白的浓度为40％
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45％(m/v)；
[0031]所述血清蛋白的浓度为3％
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5％(m/v)；
[0032]所述pH调节剂的浓度为0.3～0.5％(m/v)；
[0033]所述稳定剂的浓度为4％
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6％(m/v)；
[0034]所述表面活性剂的浓度为0.3％
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0.5％(v/v)；
[0035]溶剂为体积比为5～15:85～95的PBS缓冲溶液和水的混合溶剂。
[0036]本专利技术还提供了一种所述的空白血液基质的制备方法，将各成分混合均匀即得。
[0037]例如，本专利技术典型的制备过程为：获得血红蛋白、血清蛋白，磷酸盐缓冲溶液和酸性/碱性物质，取血红蛋白和血清蛋白，加入酸性/碱性物质和磷酸盐缓冲溶液及超纯水，及
加入海藻糖和吐温
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20，使用混匀器充分混匀，即得用于空白基质的空白血液基质。
[0038]本专利技术还提供了一种空白血液干血片，其包括载体及其负载的本专利技术所述的空白血液基质的干物质。
[0039]本专利技术中，所述的载体为纸基材料，进一步为滤纸，进一步可以为903#滤纸片。
[0040]本专利技术中，所述的空白血液干血片的制备方法例如为：将空白血液基质滴加在载体中，随后经干燥处理，即得。例如，使用移液器吸取上一步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种空白血液基质，其特征在于，为包含血红蛋白、血清蛋白、pH调节剂、稳定剂、表面活性剂、磷酸盐缓冲液的混合溶液；其中，血红蛋白的浓度为20％
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60％(m/v)，血清蛋白的浓度为≤20％(m/v)、稳定剂的浓度≤10％(m/v)、表面活性剂的浓度≤0.5％(m/v)、pH调节剂浓度≤0.5％(m/v)。2.如权利要求1所述的空白血液基质，其特征在于，所述的血红蛋白为牛血红蛋白或猪血红蛋白或人血红蛋白中的至少一种。3.如权利要求1所述的空白血液基质，其特征在于，所述的pH调节剂包括酸性物质和/或碱性物质；所述的酸性物质包括甲酸、乙酸、氟化铵、盐酸中的至少一种；所述的碱性物质包括氨水、氢氧化钠中的至少一种。4.如权利要求1所述的空白血液基质，其特征在于，所述的稳定剂为海藻糖、甘露醇中的至少一种。5.如权利要求1所述的空白血液基质，其特征在于，所述的表面活性剂为吐温
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20、吐温
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80中的至少一种。6.如权利要求1所述的空白血液基质，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液为PBS缓冲液；优选地，所述的空白血液基质中，所述血红蛋白的浓度为30％
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50％(m/v)；所述血清蛋白的浓度为2％
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10％(m/v)；所述pH调节剂的浓度为0.1％～0.5％(m/v)；所述稳定剂的浓度为1％
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【专利技术属性】
技术研发人员：蔡露露，陈湘悦，张玉，肖锐，
申请(专利权)人：浙江博圣生物技术股份有限公司杭州杰毅麦特医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：