一种具有抗结肠癌活性的多肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及药物化学领域，涉及一种具有抗结肠癌活性的多肽及其应用。在红曲霉菌发酵液中分离得到一种新型小分子肽化合物并通过化学合成的方法进行合成，经检测，其可以抑制人结肠癌HT29细胞的增值，有新型抗结肠癌药物开发的价值。发的价值。发的价值。

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗结肠癌活性的多肽及其应用


[0001]本专利技术涉及药物化学领域，涉及一种具有抗结肠癌活性的小分子肽，以及其对抑制人结肠癌HT29细胞的增值作用。

技术介绍

[0002][0003]传统的微生物次级代谢产物挖掘常借助发酵的方法，但是微生物菌株中大量的合成基因簇在实验室培养条件下的表达量很低，要分离提纯一定质量的某一特定的天然产物分子需要进行大规模的发酵并经历漫长的分离和纯化过程，花费大量时间、精力和金钱。随着人们化学合成能力的提高，通过从微生物发酵液中分离鉴定出某一天然产物的结构后，通过化学合成的方法可以实现天然产物的大量合成以便进行后续的实验。
[0004]红曲霉菌是一种丝状真菌，其次级代谢产物种类丰富、活性多样，包括胆固醇合成抑制剂、降血压物质、抑菌物质及其它多种生理活性物质。第一个上市的靶向降胆固醇药物洛伐他汀就是红曲霉菌最具代表性的代谢产物之一。本专利技术在一株生产洛伐他汀的红色红曲霉菌的发酵液中分离到一个天然产物分子，经鉴定其为环状的多肽分子，再通过化学合成得到该分子，最后进行活性表征，发现其对结肠癌细胞的增值具有抑制效果。

技术实现思路

[0005]为加速天然产物的挖掘和丰富药物先导化合物天然产物分子库，本专利技术通过化学合成了一种来自于红曲霉菌发酵液的小分子肽，经检测该小分子肽对结肠癌细胞的增值具有抑制效果。
[0006]一种具于抗结肠癌活性的多肽，化学式为C
32
H
48
N8O6(化合物1)，结构式如下：
[0007][0008]化合物1
[0009]所述具有抗结肠癌活性多肽可应用于制备抗结肠癌药物
[0010]所述多肽对结肠癌细胞的增值具有抑制效果。
[0011]本专利技术的有益效果：本专利技术从一株生产洛伐他汀的红色红曲霉菌发酵液中分离鉴
定了一个小分子肽并进行了化学合成。对该化合物进行抗癌实验发现，其对结肠癌细胞的增值具有抑制效果。因此，该化合物有望成为抗结肠癌药物的先导化合物并具有良好的开发前景。
附图说明
[0012]图1是本专利技术抗结肠癌化合物正离子质谱图
[0013]图2是本专利技术抗结肠癌化合物HPLC谱图
[0014]图3是本专利技术化合物的抑癌活性效果图
具体实施方式
[0015]本专利技术结合附图和实施例作进一步的说明。实施例中所使用的细胞培养基成分：DMEM培养液，使用前每500ml DMEM加入5ml的L
‑
谷氨酰胺和青霉素
‑
链霉素双抗，再加25ml的胎牛血清。在37℃、5％二氧化碳浓度条件下培养细胞。
[0016]本专利技术的小分子肽根据其结构式可以直接通过全化学合成多肽技术制得，本实施例仅提供其一种具体合成思路作为说明，并非对其的限制：从固相树脂上从C端开始5个氨基酸逐一接上去，依次是Fmoc
‑
Trp
‑
OH，Fmoc
‑
Ile
‑
OH，Fmoc
‑
Val
‑
OH，Fmoc
‑
Asn
‑
OH，Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH，然后把多肽从树脂上切下来同时脱掉Lys主链氨基的Fmoc保护基团，再将Lys主链氨基与Trp主链羧基形成分子内酰胺，最后去除Lys侧链氨基的Boc保护基团。得到的多肽粗品经过HPLC纯化，然后冻干。
[0017](一)化合物的结构分析
[0018]本专利技术抗结肠癌化合物为白色固体，溶于二甲基亚砜，甲醇、水。
[0019]ESI
‑
MS m/e 641.5([M+H]+
)。
[0020]1H NMR(400MHz,DMSO
‑
d6)δ10.16
‑
10.09(s,1H),8.00(s,4H),7.20
‑
7.16(s,4H),6.80(s,
[0021]1H),6.00(s,2H),4.54
‑
4.51(m,3H),2.01(t,2H),1.79
‑
1.75(m,2H),1.29
‑
1.24(m,4H),1.06
‑
1.01(m,12H)。
[0022](二)抗结肠癌活性检测
[0023]1、供试癌细胞
[0024]结肠癌细胞HT29
[0025]2、抑癌活性的测定
[0026]抑癌活性采用CCK
‑
8法。按照细胞传代步骤，消化细胞制成细胞悬浮液，以100μL
[0027]6000个细胞铺在96孔板中，过夜培养。加入浓度梯度的化合物1，每孔10μL，设置三个重复，另在3个孔中各加入10μL DMSO做对照，37℃培养24h。再每孔加入10μLCCK
‑
8溶液，37℃避光孵育4h，最后通过酶标仪检测各孔450nm处的吸光值。
[0028]从图3中可以看出本专利技术的抗癌化合物对结肠癌细胞HT29的增值具有抑制效果。
[0029]本专利技术的内容不限于具体实施方式所列举，本领域普通技术人员通过阅读本专利技术说明书而对本专利技术技术方案采取的任何等效的变换，均为本专利技术的权利要求所涵盖。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具于抗结肠癌活性的多肽，其特征在于，其化学式为C
32
H
48
N8O6，结构式如下：2.如权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：江辉，
申请(专利权)人：江苏曲之源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：