一种具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用。本发明专利技术的一种具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌株(Bacillusvelezensis)，所述的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌株的保藏名称为BacillusvelezensisYC2177，保藏编号：CCTCCNO：M20211635。本发明专利技术能够提高生产效率与产品质量，减少真菌类病害发病率，从而在生物防治的过程中达到良好的效果，在施用基肥的同时对多种真菌病害进行防控，有效替代化学农药的使用，绿色环保，减少环境污染，提高作物安全性。全性。全性。

【技术实现步骤摘要】
一种具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及微生物应用
，具体涉及一种具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]烟草真菌性病害是烟草在一定环境条件下受到病原菌寄生而引起的，在烟草种植的苗期、大田期以及采收期均有出现，并对其根茎叶各部分都造成不同程度的损害。常见的烟草真菌性病害包括：立枯病、根腐病、蛙眼病、炭疽病、黑胫病等；病害发生的原因在于：首先，多数烟草病害的病原菌能在土壤中或病残体中越冬，成为第二年的初侵染源，烟草生长期又借助风雨、昆虫、流水、土杂肥及农事操作传播，引起再侵染。其次，苗床及大田期高温多雨、重茬高湿的烟地以及种植过密，偏施氮肥和管理粗放等原因也会导致烟草真菌性病害的频发。且又由于目前我国种植的烤烟品种较为单一，耕地复种指数高，难以休闲轮换以及长期的大量施用化肥农药，导致土壤板结及土壤理化性状发生改变，土壤中有益微生物种群和数量骤减，自身修复能力降低，从而导致土传病菌和真菌的数量加剧，烟株抗逆性下降，严重影响和制约了烟草生产。
[0003]预防烟草真菌类病害的发生，一方面，要合理施肥，科学轮作换茬，选育优良抗病品种以及加强植株栽培管理，避免或减少烟草真菌性病害的侵染；另一方面，通过对多种烟草真菌性病害的发病特点和规律进行研究，从而得到一种具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂及其配套使用方法，用于烟草种植的绿色防控，有效替代化学农药的使用，减少环境污染，增加植株安全性，从而提高经济效益。
[0004]目前，市售的各类菌剂产品存在功效较差，防控对象单一，但价格昂贵，且对生态环境不友好等诸多问题。
[0005]目前，缺乏一种绿色环保的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于针对现有技术的不足而提供一种绿色环保的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用。
[0007]为达到上述目的，本专利技术采用了下列技术方案：本专利技术的一种具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌株(Bacillus velezensis)，所述的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌株的保藏名称为Bacillus velezensis YC2177，保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏单位地址为中国武汉武汉大学，保藏日期：2021年12月17日；保藏编号：CCTCC NO：M 20211635。
[0008]进一步地，所述的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌株的ITS基因序列为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。
[0009]本专利技术所述的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂。
[0010]进一步地，其活性成分为如下(a)(b)(c)中的至少一种：
[0011](a)所述的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂的发酵培养物；
[0012](b)所得具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂的孢子悬液；
[0013](c)所得具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂细胞的超声裂解沉淀。
[0014]本专利技术所述的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂的制备方法，包括如下步骤：(1)菌种活化，将
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85℃下保存的贝莱斯芽孢杆菌在LB固体培养基上进行活化，采用划线培养的方式，于35℃
‑
37℃条件下培养24
‑
48h，挑取单菌落在固体培养基上继续进行划线培养，在35℃
‑
37℃条件下培养24
‑
48h，得到活化的菌株；
[0015](2)种子液制备，用无菌接种环刮取第一步中已活化的菌株接种到50ml的LB液体培养基中，在温度35℃、转速150rpm条件下培养24h，得到该菌株的种子液；
[0016](3)发酵液制备，将活化培养的种子液按照1
‰‑5‰
的比例接种到发酵罐中的发酵培养液中，在温度为35℃
‑
38℃，转速为100
‑
150rpm/min条件下培养48h
‑
60h，得到发酵液；所述的发酵液的有效活菌数大于2.0
×
109cfu/mL；
[0017](4)菌粉制备，将发酵液导入离心机中，离心后排除上层清液，得到菌种浓缩液，并使菌种浓缩液中的贝莱斯芽孢杆菌YC2177的有效活菌数不小于1
×
10
10
cfu/mL；将菌种浓缩液进行喷雾干燥制得芽孢杆菌菌粉，包括如下过程：将菌种浓缩液加入搅拌罐中，加入10％
‑
13％的辅料，通过0.9Pa的压力将所述的菌种浓缩液压至旋转喷头，并使喷头保持在转速为20000r/min下喷雾，同时在干燥塔中通入150℃、4000m3/h的热风进行干燥，得到有效活菌数不小于1
×
10
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cfu/g菌粉。
[0018]进一步地，在步骤(1)中，所述的LB固体培养基由如下组分组成：细菌学蛋白胨20g，酵母提取粉10g，琼脂粉10g，水2L。
[0019]进一步地，在步骤(3)中，所述的LB液体培养基由如下组分组成：细菌学蛋白胨20g，酵母提取粉10g，琼脂粉10g，水2L。
[0020]更进一步地，在步骤(3)中，所述的发酵培养液包括按重量份计的如下组分组成：牛肉膏1
‑
3份、黄豆粉2
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4份、蔗糖0.5
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1份、蛋白胨2
‑
3份、玉米粉2
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3份、碳酸钙0.8
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1.5份、硫酸铵0.5
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1份、硫酸镁0.5
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1份、鱼粉1
‑
2份、磷酸二氢钾0.05
‑
0.1份、磷酸氢二钾0.05
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0.1份、氯化钠1
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5份、消泡剂0.1
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0.3份，水1000份，采用盐酸、氢氧化钠调节pH至7.0
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7.5。
[0021]进一步地，在步骤(4)中，所述的喷雾干燥的辅料包括按重量份计的如下组分组成：硅藻土55
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65份，碳酸钙15
‑
25份，淀粉15
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25份。
[0022]本专利技术所述的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌株在生产用于防治烟草真菌病制剂中的应用。
[0023]本专利技术的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂与有机肥料混合制成生物有机肥的制备方法，包括如下步骤：
[0024](1)有机肥料的发酵：按照重量份数计称取菜籽枯750份、菊花渣50份、活化腐植酸100份、腐熟剂5份，均匀混合后，发酵物料的C/N为25
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30:1，调节物料的水份的质本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌株（Bacillus velezensis），其特征在于：所述的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌株的保藏名称为Bacillus velezensis YC2177，保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏单位地址为中国武汉 武汉大学，保藏日期：2021年12月17日；保藏编号：CCTCC NO：M 20211635。2.根据权利要求1所述的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌株，其特征在于：所述的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌株的ITS基因序列为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。3.权利要求1所述的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂。4.根据权利要求3所述的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂，其活性成分为如下（a）（b）（c）中的至少一种：（a）权利要求1所述的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂的发酵培养物；（b）权利要求1所得具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂的孢子悬液；（c）权利要求1所得具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂细胞的超声裂解沉淀。5.权利要求4所述的具有兼防多种烟草真菌病害的贝莱斯芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）菌种活化，将
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85℃下保存的贝莱斯芽孢杆菌在LB固体培养基上进行活化，采用划线培养的方式，于35℃
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37℃条件下培养24
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48h，挑取单菌落在固体培养基上继续进行划线培养，在35℃
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37℃条件下培养24
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48h，得到活化的菌株；（2）种子液制备，用无菌接种环刮取第一步中已活化的菌株接种到50ml的LB液体培养基中，在温度35℃、转速150rpm条件下培养24h，得到该菌株的种子液；（3）发酵液制备，将活化培养的种子液按照1
‰‑5‰
的比例接种到发酵罐中的发酵培养液中，在温度为35℃
‑
38℃，转速为100
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150rpm/min条件下培养48h
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60h，得到发酵液；所述的发酵液的有效活菌数大于2.0
×
109cfu/mL；（4）菌粉制备，将发酵液导入离心机中，离心后排除上层清液，得到菌种浓缩液，并使菌种浓缩液中的贝莱斯芽孢杆菌YC2177的有效活菌数不小于1
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cfu/mL；将菌种浓缩液进行喷雾干燥制得芽孢杆菌菌粉，包括如下过程：将菌种浓缩液加入搅拌罐中，加入10%
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13%的辅料，通过0.9Pa的压力将所述的菌种浓缩液压至旋转喷头，并使喷头保持在转速为20000r/min下喷雾，同时在干燥塔中通入150℃、4000m3/h的热风进行干燥，得到有效活菌数不小于1
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【专利技术属性】
技术研发人员：曹毅，陆宁，阳显斌，曾陨涛，陈兴江，孟建玉，汪汉成，
申请(专利权)人：贵州省烟草科学研究院，
类型：发明
国别省市：