一种链霉亲和素阻断剂和检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种链霉亲和素阻断剂和检测试剂盒，涉及免疫检测技术领域。本发明专利技术提供的链霉亲和素阻断剂选自以下物质中的至少一种：链霉亲和素的交联产物、链霉亲和素的化学失活产物、链霉亲和素的热灭活产物以及链霉亲和素的活性位点突变产物。本发明专利技术提供的链霉亲和素阻断剂，在检测体系中会与链霉亲和素磁珠共同竞争样本中的ASA，有效阻断免疫检测中链霉亲和素引起的干扰，而不会影响到检测体系内的其他成份，能更加有效的检测出待测物的真实含量，提高检测结果的准确性。本发明专利技术提供的试剂盒包含上述链霉亲和素阻断剂，会与链霉亲和素磁珠共同竞争样本中的ASA，能够有效降低链霉亲和素的干扰，使检测结果更准确。使检测结果更准确。

【技术实现步骤摘要】
一种链霉亲和素阻断剂和检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，尤其涉及一种链霉亲和素阻断剂和检测试剂盒。

技术介绍

[0002]链霉亲和素(streptavidin，SA)是由链霉菌分泌的一种蛋白质，分子量为65KD，由4条相同的肽链组合而成的结构对称的四聚体形态。一个链霉亲和素可以和四个生物素结合，而且结合能力远远高于其他非共价结合的相互作用力，基于这一特殊的原因，链霉亲和素
‑
生物素体系常用在免疫检测中以提高检测灵敏度。
[0003]免疫检测是当前医疗机构、科研院所最常用的分析物检测手段之一，对免疫检测结果的准确性具有非常高的要求。在医疗机构中，检测结果偏高或者偏低，都会对医疗机构或者患者造成非必要的损害，严重的更会引起医疗纠纷。链霉亲和素
‑
生物素体系在免疫检测中使用广泛，因此对于该体系的干扰也要引起足够的重视，生物素的干扰目前已经得到非常高的重视，但是链霉亲和素的干扰目前还没有非常好的手段预防，而链霉亲和素的干扰也确确实实发生在医学检测的案例上，Verougstraete等阐述链霉亲和素的干扰在免疫检测中并不是罕见案例(ClinChemLabMed.2020Sep25；58(10):1673
‑
1680)。
[0004]因此，如何降低链霉亲和素的干扰，是免疫诊断链霉亲和素
‑
生物素体系面临的重要问题之一。Ishikawa等(ThyroidRes.2021Jul10；14(1):17.)报道关于链霉亲和素的案例以及样本前处理的方法，可以降低链霉亲和素的干扰。但是该方法在实际应用上具有非常大的局限性：首先是样本前处理的过程，必须是明确此例样本的检测结果已经不准确，然后才能做处理，这样导致整个检测时间以及过程延长；其次是聚乙二醇的前处理方法存在局限性，该方法能沉降检测中的大分子蛋白质，因此适用于小分子检测项目，如FT3和FT4等，但是对于大分子项目而言，沉降法同时也会导致检测蛋白的沉降，从而导致检测结果不准确。
[0005]鉴于此，亟需开发出一种能够有效降低链霉亲和素的干扰，提高检测效率，确保检测结果可靠性的方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题是现有的免疫检测中，检测体系存在链霉亲和素，会干扰检测结果的准确性，提供一种有效降低链霉亲和素干扰的阻断剂以及检测试剂盒。
[0007]为了解决上述问题，本专利技术提出以下技术方案：
[0008]本专利技术提供一种链霉亲和素阻断剂，所述阻断剂选自以下物质中的至少一种：链霉亲和素的交联产物、链霉亲和素的化学失活产物、链霉亲和素的热灭活产物以及链霉亲和素的活性位点突变产物。
[0009]其进一步地技术方案为，所述链霉亲和素的交联产物是由如下方法制得：将链霉亲和素与戊二醛溶液、二(磺基琥珀酰亚胺)辛二酸酯溶液、或EDC
‑
NHS溶液进行交联反应得到。
[0010]其进一步地技术方案为，所述戊二醛溶液的质量分数为0.1％
‑
2％；所述二(磺基琥珀酰亚胺)辛二酸酯溶液的质量分数为0.1％
‑
2％；所述EDC
‑
NHS溶液的质量分数为0.1％
‑
1％。
[0011]更优选地，所述戊二醛溶液的质量分数为1.25％；所述二(磺基琥珀酰亚胺)辛二酸酯溶液的质量分数为0.5％；所述EDC
‑
NHS溶液的质量分数为0.2％。
[0012]其进一步地技术方案为，所述链霉亲和素的交联产物是由如下方法制得：将链霉亲和素与戊二醛溶液在温度为25
‑
37℃下交联4小时～48小时；优选在37℃下交联24小时。
[0013]其进一步地技术方案为，所述链霉亲和素的交联产物是由如下方法制得：将链霉亲和素与二(磺基琥珀酰亚胺)辛二酸酯溶液在温度为4
‑
25℃下交联2小时～8小时；优选在4℃下交联4小时。
[0014]其进一步地技术方案为，所述链霉亲和素的交联产物是由如下方法制得：将链霉亲和素与EDC
‑
NHS溶液在温度为4
‑
25℃下交联2小时～8小时；优选在4℃下交联4小时。
[0015]其进一步地技术方案为，所述链霉亲和素的化学失活产物是由如下方法制得：将链霉亲和素与2
‑
6mol/L盐酸溶液或2
‑
6mol/L氢氧化钠溶液在常温下透析8小时～18小时，优选12小时。
[0016]更优选地，所述盐酸溶液的浓度为4mol/L；所述氢氧化钠溶液的浓度为4mol/L。
[0017]其进一步地技术方案为，所述链霉亲和素的热灭活产物是由如下方法制得：将链霉亲和素于50
‑
80℃，保持该温度30分钟
‑
12小时；优选以50℃，保持该温度8小时，获得链霉亲和素的热灭活产物。
[0018]其进一步地技术方案为，所述链霉亲和素的活性位点突变产物是指链霉亲和素氨基酸序列的第79、80、120、121号中的至少一个色氨酸
‑
赖氨酸的活性位点突变后的产物。
[0019]本专利技术还提供一种检测试剂盒，包括所述的链霉亲和素阻断剂，在所述检测试剂盒中，所述链霉亲和素阻断剂的浓度为10μg/mL～500μg/mL，优选100μg/mL。
[0020]与现有技术相比，本专利技术所能达到的技术效果包括：
[0021]本专利技术提供的链霉亲和素阻断剂，在检测体系中会与链霉亲和素磁珠共同竞争样本中的ASA，有效阻断免疫检测中链霉亲和素引起的干扰，而不会影响到检测体系内的其他成份，能更加有效的检测出待测物的真实含量，提高检测结果的准确性。
[0022]本专利技术提供的试剂盒包含上述链霉亲和素阻断剂，会与链霉亲和素磁珠共同竞争样本中的ASA，能够有效降低链霉亲和素的干扰，使检测结果更准确。
具体实施方式
[0023]下面将对实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，以下将描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]应当理解，当在本说明书和所附权利要求书中使用时，术语“包括”和“包含”指示所描述特征、整体、步骤、操作、元素和/或组件的存在，但并不排除一个或多个其它特征、整体、步骤、操作、元素、组件和/或其集合的存在或添加。
[0025]实施例1
[0026]本专利技术实施例提供提供一种链霉亲和素阻断剂，所述阻断剂为链霉亲和素的交联产物。
[0027]所述链霉亲和素的交联产物是由如下方法制得：将链霉亲和素与戊二醛溶液、二(磺基琥珀酰亚胺)辛二酸酯溶液、或EDC
‑
NHS溶液进行交联反应得到。
[0028]本实施例中，所述戊二醛溶液的质量分数为1.25％；所述二(磺基琥本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种链霉亲和素阻断剂，其特征在于，所述阻断剂选自以下物质中的至少一种：链霉亲和素的交联产物、链霉亲和素的化学失活产物、链霉亲和素的热灭活产物以及链霉亲和素的活性位点突变产物。2.如权利要求1所述的链霉亲和素阻断剂，其特征在于，所述链霉亲和素的交联产物是由如下方法制得：将链霉亲和素与戊二醛溶液、二(磺基琥珀酰亚胺)辛二酸酯溶液、或EDC
‑
NHS溶液进行交联反应得到。3.如权利要求2所述的链霉亲和素阻断剂，其特征在于，所述戊二醛溶液的质量分数为0.1％
‑
2％；所述二(磺基琥珀酰亚胺)辛二酸酯溶液的质量分数为0.1％
‑
2％；所述EDC
‑
NHS溶液的质量分数为0.1％
‑
1％。4.如权利要求3所述的链霉亲和素阻断剂，其特征在于，所述链霉亲和素的交联产物是由如下方法制得：将链霉亲和素与戊二醛溶液在温度为25
‑
37℃下交联4小时～48小时。5.如权利要求3所述的链霉亲和素阻断剂，其特征在于，所述链霉亲和素的交联产物是由如下方法制得：将链霉亲和素与二(磺基琥珀酰亚胺)辛二酸酯溶液在温度为4
‑
25℃下交联2...

【专利技术属性】
技术研发人员：翟天龙，王旭亮，郑旻亮，杨乾康，李雪，周彦含，姚彤，刘保，
申请(专利权)人：中元汇吉生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：