经修饰的双链寡核苷酸制造技术

技术编号:38865164 阅读:57 留言:0更新日期:2023-09-17 10:05
本发明专利技术的一方面涉及能够抑制靶基因表达的双链RNA(dsRNA)试剂。本发明专利技术的其他方面涉及适合治疗用途的包含这些dsRNA分子的药物组合物,以及通过施用这些dsRNA分子来抑制靶基因表达的方法,例如,用于治疗各种疾病病况的方法。法。法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰的双链寡核苷酸
相关申请的交叉引用
[0001]本申请根据35 U.S.C.
§
119(e),要求2021年1月22日递交的第63/140,714号美国临时申请、2021年2月5日递交的第63/146,115号美国临时申请、2021年2月12日递交的第63/148,991号美国临时申请、2021年2月26日递交的第63/153,983号美国临时申请、2021年3月4日递交的第63/156,476号美国临时申请、2021年3月15日递交的第63/161,313号美国临时申请、2021年3月22日递交的第63/164,467号美国临时申请、2021年4月26日递交的第63/179,607号美国临时申请和2021年4月29日递交的第63/181,748号美国临时申请的权益,其中每项的内容均通过引用整体并入本文中。
专利

[0002]本专利技术涉及具有有利于抑制靶基因表达的特定基序的dsRNA分子,以及适合治疗用途的dsRNA试剂组合物。另外,本专利技术提供了通过施用这些dsRNA试剂抑制靶基因表达的方法,例如,用于治疗各种疾病的方法。背景
[0003]RNA干扰或“RNAi”是Fire及其同事最初创造的术语,用于描述双链RNAi(dsRNA)可以阻断基因表达的观察结果(Fire等人,(1998)Nature 391,806

811;Elbashir等人,(2001)Genes Dev.15,188

200)。短dsRNA指导包括脊椎动物在内的许多生物体中的基因特异性转录后沉默,并为研究基因功能提供了新的工具。RNAi由RNA诱导沉默复合体(RISC)介导,RISC是一种序列特异性的多组分核酸酶,其破坏与沉默触发物同源的信使RNA。已知RISC含有来源于双链RNA触发物的短RNA(约22个核苷酸),但这种活性的蛋白质组分仍然未知。
[0004]本领域仍然需要dsRNA分子的有效核苷酸或化学基序,其有利于抑制靶基因表达。本专利技术针对这一努力。概述
[0005]本专利技术提供了有利于抑制靶基因表达的dsRNA分子的有效的核苷酸或化学基序,以及适合治疗用途的RNAi组合物。
[0006]除了其他内容之外,专利技术人已发现至少在有义链的第10位处具有2
’‑
氟代核苷酸的双链RNA(dsRNA)分子出人意料地且令人惊奇地具有改善的体外效力,即增加的RNA干扰(RNAi)活性。因此,在一方面,本文提供了双链RNA(dsRNA)分子,其包含有义链和反义链,每条链独立地具有15

35个核苷酸的长度,并且其中从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第10位处包含2
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氟代核苷酸。
[0007]注意到所述有义链还可以包含一个或多个(例如1、2、3、4或5个)另外的2
’‑
氟代核苷酸。因此,在一些实施方案中,所述有义链包含1、2、3、4或5个另外的2
’‑
氟代核苷酸。所述另外的2
’‑
氟代核苷酸可以位于所述有义链中的任何地方。因此,在一些实施方案中,从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第8、9、11或12位处还包含2
’‑
氟代核苷酸。例如,从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第9位处还包含2
’‑
氟代核苷酸。换言之,从所述有义链
的5

端计起,所述有义链在第9和10位处包含2
’‑
氟代核苷酸。在另一实例中,从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第11位处还包含2
’‑
氟代核苷酸。例如,从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第10和11位处包含2
’‑
氟代核苷酸。
[0008]在一些实施方案中,从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第9、10和11位处包含2
’‑
氟代核苷酸。在一些其他的实施方案中,从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第8、9和10位处包含2
’‑
氟代核苷酸。在一些其他的实施方案中,从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第10、11和12位处包含2
’‑
氟代核苷酸。
[0009]在任一方面的一些实施方案中,从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处不包含2
’‑
氟代核苷酸。例如,从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处包含2
’‑
OMe核苷酸。
[0010]本文所述的dsRNA分子的反义链可包含一个或多个2
’‑
脱氧,例如,2
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H核苷酸。例如,所述反义链包含1、2、3、4、5、6个或更多个2
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脱氧核苷酸。在一些实施方案中,所述反义链包含2、3、4、5或6个2
’‑
脱氧核苷酸。2
’‑
脱氧核苷酸可位于所述反义链中的任何地方。例如,从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第2、5、7、12、14和16中的1、2、3、4、5或6个位置处包含2
’‑
脱氧核苷酸。在一些实施方案中,从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第2和12位处包含2
’‑
脱氧核苷酸。在一些实施方案中,从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第5和7位处包含2
’‑
脱氧核苷酸。在一些实施方案中,从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第2、5、7和12位处包含2
’‑
脱氧核苷酸。
[0011]在一些实施方案中,所述反义链可包含一个或多个(例如,1、2、3、4、5或更多个)2
’‑
氟代核苷酸。例如,从所述反义链的5

端计起,所述反义链可在第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸。
[0012]在一些实施方案中,从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸,并且在第16位处包含除2
’‑
脱氧或2
’‑
氟代以外的核苷酸。例如,从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸,并且在第16位处包含除2
’‑
脱氧或2
’‑
氟代以外的核苷酸。
[0013]在一些实施方案中,从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第2和12位处包含2
’‑
脱氧核苷酸,并且在第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸。在一些实施方案中,从所述反义链的5
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.dsRNA试剂,其包含有义链和反义链,每条链独立地具有15

35个核苷酸的长度,其中每个核苷酸独立地被修饰或未经修饰,其中从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第10位处包含2
’‑
氟代核苷酸,和从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第2、5、7和12位处包含2
’‑
脱氧核苷酸,以及其中:(i)从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸,并且在第16位处包含除2
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脱氧或2
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氟代核苷酸以外的核苷酸;或者(ii)从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第14或16位处包含2
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脱氧核苷酸,并且从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代核苷酸以外的核苷酸。2.如权利要求1所述的dsRNA试剂,其中从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第11位处还包含2
’‑
氟代核苷酸。3.如权利要求1或2所述的dsRNA试剂,其中从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第9位处还包含2
’‑
氟代核苷酸。4.如权利要求中1

3任一项所述的dsRNA,其中从所述有义链的5端计起,所述有义链在第9和11位处还包含2
’‑
氟代核苷酸。5.如权利要求1

4中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述有义链的5端计起,所述有义链在第8和9位处包含2
’‑
氟代核苷酸。6.如权利要求1

5中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述有义链的5端计起,所述有义链在第11和12位处包含2
’‑
氟代核苷酸。7.如权利要求1

6中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代以外的核苷酸。8.如权利要求1

7中任一项所述的dsRNA,其中从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第9、10和11位处包含2
’‑
氟代核苷酸,并且在第7位处包含除2
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氟以外的核苷酸。9.如权利要求1

8中任一项所述的dsRNA试剂,其中所述有义链包含至少一个2
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OMe核苷酸。10.如权利要求1

9中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处包含2
’‑
OMe核苷酸。11.如权利要求1

10中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第9、10和11位处包含2
’‑
氟代核苷酸,并且在第7位处包含2
’‑
OMe核苷酸。12.如权利要求1

11中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述反义链的5

端计起,所述反义链在所述反义链的第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸,并且在第16位处包含除2
’‑
脱氧或2
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氟代核苷酸以外的核苷酸。13.如权利要求1

12中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第2、5、7和12位处包含2
’‑
脱氧核苷酸,在第14位处包含2
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氟代核苷酸,并且在第16位处包含除2
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脱氧或2
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氟代核苷酸以外的核苷酸。14.如权利要求1

13中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第16位处包含2
’‑
OMe核苷酸。15.如权利要求1

14中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第2、5、7和12位处包含2
’‑
脱氧核苷酸,在第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸,并且在第
16位处包含2
’‑
OMe核苷酸。16.如权利要求1

11中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述反义链的5

端计起,所述反义链在所述反义链的第14位处包含2
’‑
脱氧核苷酸,并且从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代核苷酸以外的核苷酸。17.如权利要求1

11或16中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述反义链的5

端计起,所述反义链在所述反义链的第14位处包含2
’‑
脱氧核苷酸,并且从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处包含2
’‑
OMe核苷酸。18.如权利要求1

11或16

17中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述反义链的5

端计起,所述反义链在所述反义链的第2、5、7、12和14位处包含2
’‑
脱氧核苷酸,并且从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代核苷酸以外的核苷酸。19.如权利要求1

18中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述反义链的5

端计起,所述反义链在所述反义链的第16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸,并且从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代核苷酸以外的核苷酸。20.如权利要求1

19中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述反义链的5

端计起,所述反义链在所述反义链的第16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸,并且从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处包含2
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OMe核苷酸。21.如权利要求1

20中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述反义链的5

端计起,所述反义链在所述反义链的第2、5、7、12和16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸,并且从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代以外的核苷酸。22.如权利要求1

11或16

21中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述反义链的5

端计起,所述反义链在所述反义链的第2、5、7、12、14和16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸,并且从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代以外的核苷酸。23.如权利要求1

11或16

22中任一项所述的dsRNA试剂,其中所述反义链在第2、5、7、12、14和16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸,并且从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处包含除2
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氟代以外的核苷酸。24.如权利要求1

15或19

20中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第2、5、7、12和16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸,并且在所述反义链的第14位处包含2
’‑
氟代,并且从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代以外的核苷酸。25.如权利要求1

15、19

20或24中任一项所述的dsRNA试剂,其中从所述反义链的5

端计起,所述反义链在第2、5、7、12和16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸,并且在所述反义链的第14位处包含2
’‑
氟代,并且从所述有义链的5

端计起,所述有义链在第7位处包含2
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OMe核苷酸。26.如权利要求1

25中任一项所述的dsRNA试剂,其中所述dsRNA试剂包含配体。27.如权利要求1

26中任一项所述的dsRNA试剂,其中所述有义链包含配体。28.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员:马克
申请(专利权)人:阿耐拉姆制药公司
类型:发明
国别省市:

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