经修饰的双链寡核苷酸制造技术

本发明专利技术的一方面涉及能够抑制靶基因表达的双链RNA(dsRNA)试剂。本发明专利技术的其他方面涉及适合治疗用途的包含这些dsRNA分子的药物组合物，以及通过施用这些dsRNA分子来抑制靶基因表达的方法，例如，用于治疗各种疾病病况的方法。法。法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰的双链寡核苷酸
相关申请的交叉引用
[0001]本申请根据35 U.S.C.
§
119(e)，要求2021年1月22日递交的第63/140,714号美国临时申请、2021年2月5日递交的第63/146,115号美国临时申请、2021年2月12日递交的第63/148,991号美国临时申请、2021年2月26日递交的第63/153,983号美国临时申请、2021年3月4日递交的第63/156,476号美国临时申请、2021年3月15日递交的第63/161,313号美国临时申请、2021年3月22日递交的第63/164,467号美国临时申请、2021年4月26日递交的第63/179,607号美国临时申请和2021年4月29日递交的第63/181,748号美国临时申请的权益，其中每项的内容均通过引用整体并入本文中。
专利

[0002]本专利技术涉及具有有利于抑制靶基因表达的特定基序的dsRNA分子，以及适合治疗用途的dsRNA试剂组合物。另外，本专利技术提供了通过施用这些dsRNA试剂抑制靶基因表达的方法，例如，用于治疗各种疾病的方法。背景
[0003]RNA干扰或“RNAi”是Fire及其同事最初创造的术语，用于描述双链RNAi(dsRNA)可以阻断基因表达的观察结果(Fire等人，(1998)Nature 391,806
‑
811；Elbashir等人，(2001)Genes Dev.15,188
‑
200)。短dsRNA指导包括脊椎动物在内的许多生物体中的基因特异性转录后沉默，并为研究基因功能提供了新的工具。RNAi由RNA诱导沉默复合体(RISC)介导，RISC是一种序列特异性的多组分核酸酶，其破坏与沉默触发物同源的信使RNA。已知RISC含有来源于双链RNA触发物的短RNA(约22个核苷酸)，但这种活性的蛋白质组分仍然未知。
[0004]本领域仍然需要dsRNA分子的有效核苷酸或化学基序，其有利于抑制靶基因表达。本专利技术针对这一努力。概述
[0005]本专利技术提供了有利于抑制靶基因表达的dsRNA分子的有效的核苷酸或化学基序，以及适合治疗用途的RNAi组合物。
[0006]除了其他内容之外，专利技术人已发现至少在有义链的第10位处具有2
’‑
氟代核苷酸的双链RNA(dsRNA)分子出人意料地且令人惊奇地具有改善的体外效力，即增加的RNA干扰(RNAi)活性。因此，在一方面，本文提供了双链RNA(dsRNA)分子，其包含有义链和反义链，每条链独立地具有15
‑
35个核苷酸的长度，并且其中从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第10位处包含2
’‑
氟代核苷酸。
[0007]注意到所述有义链还可以包含一个或多个(例如1、2、3、4或5个)另外的2
’‑
氟代核苷酸。因此，在一些实施方案中，所述有义链包含1、2、3、4或5个另外的2
’‑
氟代核苷酸。所述另外的2
’‑
氟代核苷酸可以位于所述有义链中的任何地方。因此，在一些实施方案中，从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第8、9、11或12位处还包含2
’‑
氟代核苷酸。例如，从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第9位处还包含2
’‑
氟代核苷酸。换言之，从所述有义链
的5
’
端计起，所述有义链在第9和10位处包含2
’‑
氟代核苷酸。在另一实例中，从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第11位处还包含2
’‑
氟代核苷酸。例如，从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第10和11位处包含2
’‑
氟代核苷酸。
[0008]在一些实施方案中，从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第9、10和11位处包含2
’‑
氟代核苷酸。在一些其他的实施方案中，从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第8、9和10位处包含2
’‑
氟代核苷酸。在一些其他的实施方案中，从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第10、11和12位处包含2
’‑
氟代核苷酸。
[0009]在任一方面的一些实施方案中，从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处不包含2
’‑
氟代核苷酸。例如，从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处包含2
’‑
OMe核苷酸。
[0010]本文所述的dsRNA分子的反义链可包含一个或多个2
’‑
脱氧，例如，2
’‑
H核苷酸。例如，所述反义链包含1、2、3、4、5、6个或更多个2
’‑
脱氧核苷酸。在一些实施方案中，所述反义链包含2、3、4、5或6个2
’‑
脱氧核苷酸。2
’‑
脱氧核苷酸可位于所述反义链中的任何地方。例如，从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第2、5、7、12、14和16中的1、2、3、4、5或6个位置处包含2
’‑
脱氧核苷酸。在一些实施方案中，从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第2和12位处包含2
’‑
脱氧核苷酸。在一些实施方案中，从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第5和7位处包含2
’‑
脱氧核苷酸。在一些实施方案中，从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第2、5、7和12位处包含2
’‑
脱氧核苷酸。
[0011]在一些实施方案中，所述反义链可包含一个或多个(例如，1、2、3、4、5或更多个)2
’‑
氟代核苷酸。例如，从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链可在第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸。
[0012]在一些实施方案中，从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸，并且在第16位处包含除2
’‑
脱氧或2
’‑
氟代以外的核苷酸。例如，从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸，并且在第16位处包含除2
’‑
脱氧或2
’‑
氟代以外的核苷酸。
[0013]在一些实施方案中，从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第2和12位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，并且在第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸。在一些实施方案中，从所述反义链的5
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.dsRNA试剂，其包含有义链和反义链，每条链独立地具有15
‑
35个核苷酸的长度，其中每个核苷酸独立地被修饰或未经修饰，其中从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第10位处包含2
’‑
氟代核苷酸，和从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第2、5、7和12位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，以及其中：(i)从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸，并且在第16位处包含除2
’‑
脱氧或2
’‑
氟代核苷酸以外的核苷酸；或者(ii)从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第14或16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，并且从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代核苷酸以外的核苷酸。2.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第11位处还包含2
’‑
氟代核苷酸。3.如权利要求1或2所述的dsRNA试剂，其中从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第9位处还包含2
’‑
氟代核苷酸。4.如权利要求中1
‑
3任一项所述的dsRNA，其中从所述有义链的5端计起，所述有义链在第9和11位处还包含2
’‑
氟代核苷酸。5.如权利要求1
‑
4中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述有义链的5端计起，所述有义链在第8和9位处包含2
’‑
氟代核苷酸。6.如权利要求1
‑
5中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述有义链的5端计起，所述有义链在第11和12位处包含2
’‑
氟代核苷酸。7.如权利要求1
‑
6中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代以外的核苷酸。8.如权利要求1
‑
7中任一项所述的dsRNA，其中从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第9、10和11位处包含2
’‑
氟代核苷酸，并且在第7位处包含除2
’‑
氟以外的核苷酸。9.如权利要求1
‑
8中任一项所述的dsRNA试剂，其中所述有义链包含至少一个2
’‑
OMe核苷酸。10.如权利要求1
‑
9中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处包含2
’‑
OMe核苷酸。11.如权利要求1
‑
10中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第9、10和11位处包含2
’‑
氟代核苷酸，并且在第7位处包含2
’‑
OMe核苷酸。12.如权利要求1
‑
11中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在所述反义链的第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸，并且在第16位处包含除2
’‑
脱氧或2
’‑
氟代核苷酸以外的核苷酸。13.如权利要求1
‑
12中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第2、5、7和12位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，在第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸，并且在第16位处包含除2
’‑
脱氧或2
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氟代核苷酸以外的核苷酸。14.如权利要求1
‑
13中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第16位处包含2
’‑
OMe核苷酸。15.如权利要求1
‑
14中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第2、5、7和12位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，在第14位处包含2
’‑
氟代核苷酸，并且在第
16位处包含2
’‑
OMe核苷酸。16.如权利要求1
‑
11中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在所述反义链的第14位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，并且从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代核苷酸以外的核苷酸。17.如权利要求1
‑
11或16中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在所述反义链的第14位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，并且从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处包含2
’‑
OMe核苷酸。18.如权利要求1
‑
11或16
‑
17中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在所述反义链的第2、5、7、12和14位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，并且从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代核苷酸以外的核苷酸。19.如权利要求1
‑
18中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在所述反义链的第16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，并且从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代核苷酸以外的核苷酸。20.如权利要求1
‑
19中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在所述反义链的第16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，并且从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处包含2
’‑
OMe核苷酸。21.如权利要求1
‑
20中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在所述反义链的第2、5、7、12和16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，并且从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代以外的核苷酸。22.如权利要求1
‑
11或16
‑
21中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在所述反义链的第2、5、7、12、14和16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，并且从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代以外的核苷酸。23.如权利要求1
‑
11或16
‑
22中任一项所述的dsRNA试剂，其中所述反义链在第2、5、7、12、14和16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，并且从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代以外的核苷酸。24.如权利要求1
‑
15或19
‑
20中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第2、5、7、12和16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，并且在所述反义链的第14位处包含2
’‑
氟代，并且从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处包含除2
’‑
氟代以外的核苷酸。25.如权利要求1
‑
15、19
‑
20或24中任一项所述的dsRNA试剂，其中从所述反义链的5
’
端计起，所述反义链在第2、5、7、12和16位处包含2
’‑
脱氧核苷酸，并且在所述反义链的第14位处包含2
’‑
氟代，并且从所述有义链的5
’
端计起，所述有义链在第7位处包含2
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OMe核苷酸。26.如权利要求1
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25中任一项所述的dsRNA试剂，其中所述dsRNA试剂包含配体。27.如权利要求1
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26中任一项所述的dsRNA试剂，其中所述有义链包含配体。28.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：马克，
申请(专利权)人：阿耐拉姆制药公司，
类型：发明
国别省市：