一种细胞膜纳米粒及其制备方法与用途技术

本发明专利技术公开了一种细胞膜纳米粒及其制备方法与用途。本发明专利技术合成了可体内搭载CD4

【技术实现步骤摘要】
一种细胞膜纳米粒及其制备方法与用途


[0001]本专利技术涉及药物
，具体涉及一种细胞膜纳米粒及其制备方法与用途。

技术介绍

[0002]细胞膜包载纳米粒，在保留原有内核纳米粒性质的基础上，能增加原细胞的相关生理功能，如依靠细胞膜表面的蛋白增强浸润病灶部位或吸附细胞因子等。此外，细胞膜纳米粒可通过表面的蛋白如CD47和CD24，延长体内循环时间防止被内吞。
[0003]通过物理结合或化学修饰的方法在细胞膜上引入额外的蛋白能增加细胞膜纳米粒的功能。修饰额外蛋白可以通过连接剂，将目的蛋白化学连接至细胞膜表面，但这种方法可能会影响原有膜表面蛋白的功能。也可将目的蛋白与亲脂碳链如DSPE等进行连接，利用亲脂碳链的疏水性插入细胞膜的磷脂双分子层。基因工程化技术通过对目的细胞进行基因改造，使其表达某种特定的蛋白，已被应用于细胞膜纳米粒的研究中。这种方法不仅保留了原有细胞膜的功能，还可使目的蛋白稳定表达在细胞膜表面。如通过慢病毒感染构建表达α4蛋白的工程化细胞，与细胞膜表面原有的β1蛋白组成炎症受体迟现抗原
‑
4(Very late appearing antigen
‑
4，VLA
‑
4)，提取细胞膜制备纳米粒，靶向炎症部位的血管细胞黏附分子
‑
1(Vascular cell adhesion molecule
‑
1，VCAM
‑
1)用于治疗肺炎。还有研究通过基因工程化使T细胞过表达程序性死亡受体
‑<br/>1(Programmed cell death protein 1，PD
‑
1)，制备成细胞膜纳米粒后，通过阻断肿瘤细胞的细胞程序性死亡
‑
配体1(Programmed cell death 1ligand 1，PD
‑
L1)发挥抗肿瘤疗效。
[0004]免疫细胞具有天然的炎症靶向能力，如中性粒细胞、巨噬细胞、T细胞等。在早期炎症中，CD4
+
T辅助1(Th1)细胞和中性粒细胞浸润损伤部位并释放促炎细胞因子。在炎症晚期，调节性T(Treg)细胞和Th2细胞增殖，通过产生抗炎细胞因子来抑制炎症进程，如转化生长因子
‑
β(TGF
‑
β)和IL
‑
10。在关节炎和结肠炎中，均有大量的CD4
+
T细胞浸润炎症组织。但如果炎症不受控制，过度激活的免疫细胞，如巨噬细胞等，会分泌促炎细胞因子，如TNF
‑
α、IL
‑
1β和IL
‑
6等，进一步召集外周血中的免疫细胞到达炎症部位，恶化炎症程度，进而形成了一个高活性氧(Reactive oxygen species，ROS)的微环境。因此，利用免疫细胞在炎症部位的深层组织穿透能力，能提高纳米载体对炎症组织的靶向性和渗透性。本专利技术由此而来。

技术实现思路

[0005]为了解决本专利技术
技术介绍
中的技术问题至少之一，本专利技术提供了细胞膜纳米粒及其制备方法与用途。
[0006]本专利技术的技术方案是：本专利技术的一个目的在于提供一种细胞膜纳米粒的制备方法，包括以下步骤：
[0007]载药纳米粒制备：通过活性氧敏感的铜缩硫醇交联剂将MTX和Dasa分别链接至透明质酸，合成HA
‑
TK
‑
MTX或HA
‑
TK
‑
Dasa聚合物，所述聚合物在生理盐水中自组装成载药纳米粒；细胞膜制备：使用基因工程技术，构建细胞表面可稳定表达aCD4单链抗体scFv的巨噬细
胞株，感染流程将巨噬细胞极化为M1型，随后提取细胞膜，得到CD4靶向的细胞膜；细胞膜纳米粒制备：将细胞膜和载药纳米粒共挤出，制得细胞膜纳米粒。需要说明的是，该步中的载药纳米粒为HA
‑
TK
‑
MTX和HA
‑
TK
‑
Dasa。
[0008]本专利技术的另一个目的在于提供一种不同的细胞膜纳米粒的制备方法，包括以下步骤：
[0009]载药纳米粒制备：通过活性氧敏感的铜缩硫醇交联剂将MTX和Dasa分别链接至透明质酸，合成HA
‑
TK
‑
MTX或HA
‑
TK
‑
Dasa聚合物，所述聚合物在生理盐水中自组装成载药纳米粒；细胞膜制备：将巨噬细胞极化为M1型，提取细胞膜，然后用NHS功能化的DSEP
‑
PEG与CD4单克隆抗体反应得DSPE
‑
PEG
‑
aCD4，并将DSPE
‑
PEG
‑
aCD4插入M1型细胞膜中，得到CD4靶向的细胞膜；细胞膜纳米粒制备：将细胞膜和载药纳米粒共挤出，制得细胞膜纳米粒。需要说明的是，该步中的载药纳米粒为HA
‑
TK
‑
MTX和HA
‑
TK
‑
Dasa。
[0010]本专利技术还有一个目的在于提供了一种根据上述所述的制备方法制备得到的细胞膜纳米粒TaCD4M1
‑
NP。
[0011]本专利技术还有另外一个目的在于提供了一种根据上述所述的细胞膜纳米粒用于制备治疗炎症性疾病药物中的用途。
[0012]本专利技术筛选出具有协同抑炎功效的新药物组合，运用治疗白血病的达沙替尼治疗炎症性疾病，老药新用。创新应用甲氨蝶呤与达沙替尼的药物组合治疗炎症性疾病。也创新设计可搭载内源性CD4
+
T细胞的药物递送体系，利用CD4
+
T细胞的体内分布特性和对炎症部位的趋化性能，实现药物的靶向递送，高效治疗炎症性疾病如类风湿关节炎和溃疡性肠炎，为炎症性疾病的治疗提供了新方法和新思路。
附图说明
[0013]图1为本专利技术实施例的细胞膜纳米粒的合成流程及作用机理示意图(图1A为合成路线；图1B为作用机制图)；图2为MTX和Dasa对免疫细胞的体外抑制数据(数据表示为平均值
±
标准差(n＝3))；图3为MTX和Dasa联合给药在胶原诱导的关节炎(Collagen induced arthritis，CIA)小鼠中的抗炎效果示意图(图3A为实验流程图；图3B为足爪肿胀图；图3C为关节炎指数数据；图3D为小鼠体重曲线图；
[0014]图3E为血清IL
‑
6浓度；图3F为血清IL
‑
1β浓度；图3G为血清TNF
‑
α浓度；数据表示平均值
±
标准差(n＝4
‑
5)，ns为无显著性差异，*P&lt;0.05，**P&lt;0.01，***P&lt;0.001，****P&lt;0.0001)；图4为MTX和Dasa联合给药在脂多糖诱导的急性炎症小鼠模本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞膜纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：载药纳米粒制备：通过活性氧敏感的铜缩硫醇交联剂将MTX和Dasa分别链接至透明质酸，合成HA
‑
TK
‑
MTX或HA
‑
TK
‑
Dasa聚合物，所述聚合物在生理盐水中自组装成载药纳米粒；细胞膜制备：使用基因工程技术，构建细胞表面可稳定表达aCD4单链抗体scFv的巨噬细胞株，感染流程将巨噬细胞极化为M1型，随后提取细胞膜，得到CD4靶向的细胞膜；细胞膜纳米粒制备：将细胞膜和载药纳米粒共挤出，制得细胞膜纳米粒。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，细胞膜制备的具体方法步骤如下：设计目的基因，由mCD8αleader、anti
‑
mCD4 scFv片段clone 2C11、mCD28 hinge、mCD28TM、P2A和标签蛋白Thy1.1串联后构成，基因序列如SEQ ID NO：1，插入质粒载体中，构建病毒，然后利用病毒感染J774A.1细胞，构建稳定表达aCD4蛋白的工程化细胞。3.一种细胞膜纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：载药纳米粒制备：通过活性氧敏感的铜缩硫醇交联剂将MTX和Dasa分别链接至透明质酸，合成HA
‑
TK
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MTX或HA
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TK
‑
Dasa聚合物，所述聚合物在生理盐水中自组装成载药纳米粒；细胞膜制备：将巨噬细胞极化为M1型，提取细胞膜，然后用NHS功能化的DSEP
‑
PEG与CD4单克隆抗体反应得DSPE
‑
PEG
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aCD4，并将DSPE
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PEG
‑
aCD4插入M1型细胞膜中，得到CD4靶向的细胞膜；细胞膜纳米粒制备：将细胞膜和载药纳米粒共挤出，制得细胞膜纳米粒。4.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，HA
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TK
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MTX的合成方法步骤如下：HA去离子水超声溶解，加入EDC和NHS，室温搅拌1h活化羧基；加入TK
‑
NH2，避光、氮气保护，室温搅拌...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑毅然，赵磊，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：