一种藻蓝胆素-牛血清白蛋白复合物及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种藻蓝胆素

【技术实现步骤摘要】
一种藻蓝胆素
‑
牛血清白蛋白复合物及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种复合物及其制备方法，具体涉及一种藻蓝胆素
‑
牛血清白蛋白复合物及其制备方法，属于生物化学


技术介绍

[0002]藻类是光合自养的低等植物，复杂外部逆境赋予藻类独特的生物活性功能，使藻类具有十分广阔的应用前景，我国历代本草文献所载具有药用价值的食物也常常涉及藻类，例如昆布、紫菜、鹿角菜等。藻蓝蛋白(Phycocyanin，PC)是存在于蓝藻、红藻、隐藻和少数一些甲藻中含有藻蓝胆素(Phycocyanobilin，PCB)的蛋白色素复合物。研究证实PC具有抗炎、抗氧化的功效，同时有研究表明，PCB是PC发挥抗炎、抗氧化作用的主要分子。但是PCB为一种天然色素，存在稳定性差的问题。因此，需要寻找合适的载体以增加PCB的稳定性。
[0003]白蛋白是一种球状蛋白，在维持血浆压力和营养平衡方面起着关键作用。2005年1月7日，FDA批准紫杉醇白蛋白结合纳米粒Abraxane用于治疗联合化疗失败后的转移性乳腺癌，成为全球首个白蛋白纳米粒药物递送技术的成功案例。2012年10月，FDA又批准Abraxane联合卡铂用于不适合治愈性手术或放疗的局部晚期或转移性非小细胞肺癌的一线治疗。由于与人血清白蛋白(HSA)的结构高度相似，牛血清白蛋白(BSA)作为模型蛋白在不同领域被广泛研究。有研究证实，叶酸偶联的不溶性紫杉醇牛血清白蛋白纳米粒可以使紫杉醇的水溶性显著提高，并且可以靶向作用于癌细胞。
[0004]由于BSA易得且价格低，所以是作为PCB载体的合适选择。但由于PCB价格高昂，因此，制备高纯度的天然PCB是构建PCB
‑
BSA复合物的关键技术。
[0005]中国专利技术专利申请：一种中药复方纳米粒的制备方法及应用(申请人：昆明理工大学，申请号：202210924535.2)，以三七、丹参、山楂的提取物为原料，以牛血清白蛋白为载体，以戊二醛为交联剂，制备得到了一种中药复方纳米颗粒。
[0006]中国专利技术专利申请：安罗替尼白蛋白纳米颗粒及其制备和用途、及包含的制剂(申请人：杭州美中疾病基因研究院有限公司，申请号：202110923366.6)，以白蛋白为载体，用白蛋白结合和包裹安罗替尼，其中，白蛋白选自人血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白、α
‑
20巨球蛋白，白蛋白结合和包裹安罗替尼需用到交联剂，所述交联剂选自戊二醛、乙酸酐、二缩水甘油基乙醚、辛二亚氨酸甲酯、1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐、N
‑
羟基琥珀酰亚胺和京尼平。
[0007]中国专利技术专利申请：去氢骆驼蓬碱白蛋白纳米颗粒、制备及应用(申请人：清华大学深圳国际研究生院，申请号：202110925515.2)，以白蛋白为载体，用白蛋白包裹去氢骆驼蓬碱，其中，白蛋白来源于哺乳动物，优选人血清白蛋白，去氢骆驼蓬碱需溶解在有机溶剂中，所述有机溶剂具体为甲醇与氯仿以体积比1：3
‑
6混合而成的混合溶剂。
[0008]前两件中国专利技术专利申请在制备纳米颗粒时，都使用到了戊二醛(作为交联剂)，最后一件中国专利技术专利申请在制备纳米颗粒时，使用到了氯仿(作为溶剂)。无论是戊二醛，还是氯仿，它们均有刺激性气味，且存在不同程度的生理毒性。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的在于提供一种藻蓝胆素
‑
牛血清白蛋白复合物(PCB
‑
BSA复合物)，同时提供一种不使用交联剂、使用生理毒性较小的二甲基亚砜(DMSO)作为PCB的溶剂制备该PCB
‑
BSA复合物的方法。
[0010]为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：
[0011]一种藻蓝胆素
‑
牛血清白蛋白复合物的制备方法，包括以下步骤：
[0012]Step1：将BSA粉末溶解于PBS溶液中，得到BSA溶液，将BSA溶液的pH调至7；
[0013]Step2：将PCB溶解于DMSO中，得到PCB溶液；
[0014]Step3：在磁力搅拌器持续搅拌的条件下，分批向BSA溶液中加入PCB溶液，每批间隔30min，最终BSA与PCB的质量比为1：5，得到pH7PCB
‑
BSA复合物溶液；
[0015]Step4：使用预处理过的透析袋对pH7PCB
‑
BSA复合物溶液进行透析；
[0016]Step5：对透析得到的pH7PCB
‑
BSA复合物溶液进行冷冻干燥，即得到藻蓝胆素
‑
牛血清白蛋白复合物粉末。
[0017]优选的，还包括制备PCB的步骤，具体的：
[0018](1)将PC和甲醇置于圆底烧瓶中，同时加入沸石，然后将圆底烧瓶置于78℃水浴锅中12h，得到裂解溶液；
[0019](2)将裂解所得的裂解溶液用纱布过滤，保留滤液，将所得滤液离心，取上清；
[0020](3)将离心所得的上清液用有机滤膜抽滤多次；
[0021](4)将抽滤所得的溶液于55℃浓缩；
[0022](5)将浓缩所得的溶液用水稀释至甲醇的体积浓度为30
‑
50％，然后置于
‑
80℃冰箱中冻成固体，之后再置于冻干机中冻干；
[0023](6)用氯仿溶解冻干的PCB，然后加入2倍体积的水，在磁力搅拌器上搅拌5min，之后转移至分液漏斗中，静置10min，取下层有机相，反复萃取多次，直至上层水相为浅蓝色；
[0024](7)将萃取所得的下层溶液采用氮吹或真空浓缩的方法除去氯仿，得到PCB纯品。
[0025]优选的，还包括对透析袋进行预处理的步骤，具体的：
[0026](1)称取20g碳酸氢钠和0.292g乙二胺四乙酸溶解于1L水中，得到溶液A，将透析袋裁剪成10cm长，置于溶液A中煮沸10min，用水清洗3次；
[0027](2)称取0.292g乙二胺四乙酸，溶于1L水中，得到溶液B，将清洗后的透析袋置于溶液B中，煮沸10min。
[0028]优选的，在Step4中，透析的过程具体为：
[0029]将预处理后的透析袋的一端用透析夹夹住，由透析袋的另一端将10mL前面制备得到的pH7PCB
‑
BSA复合物溶液转移至透析袋内，将透析袋置于烧杯中，向烧杯中加入1L浓度为0.02M的PBS溶液，加入转子，用铝箔纸将烧杯包裹，将烧杯置于磁力搅拌器上，转速200rpm，透析24h。
[0030]一种由前面任意一项所述方法制备得到的藻蓝胆素
‑
牛血清白蛋白复合物。
[0031]本专利技术的有益之处在于：
[0032](1)本专利技术通过高温回流，从PC上裂解得到了PCB，该PCB是天然PCB，具有抗炎、抗氧化的功效；
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种藻蓝胆素
‑
牛血清白蛋白复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：Step1：将BSA粉末溶解于PBS溶液中，得到BSA溶液，将BSA溶液的pH调至7；Step2：将PCB溶解于DMSO中，得到PCB溶液；Step3：在磁力搅拌器持续搅拌的条件下，分批向BSA溶液中加入PCB溶液，每批间隔30min，最终BSA与PCB的质量比为1：5，得到pH7PCB
‑
BSA复合物溶液；Step4：使用预处理过的透析袋对pH7PCB
‑
BSA复合物溶液进行透析；Step5：对透析得到的pH7PCB
‑
BSA复合物溶液进行冷冻干燥，即得到藻蓝胆素
‑
牛血清白蛋白复合物粉末。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括制备PCB的步骤，具体的：(1)将PC和甲醇置于圆底烧瓶中，同时加入沸石，然后将圆底烧瓶置于78℃水浴锅中12h，得到裂解溶液；(2)将裂解所得的裂解溶液用纱布过滤，保留滤液，将所得滤液离心，取上清；(3)将离心所得的上清液用有机滤膜抽滤多次；(4)将抽滤所得的溶液于55℃浓缩；(5)将浓缩所得的溶液用水稀释至甲醇的体积浓度为30
‑
50％，然后置于
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文军，卢宪文，秦松，王静，王琪，葛保胜，
申请(专利权)人：中国科学院烟台海岸带研究所，
类型：发明
国别省市：