一种D-二聚体和FDP复合质控品及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种D

【技术实现步骤摘要】
一种D
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二聚体和FDP复合质控品及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种D
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二聚体和FDP复合质控品及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]D
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二聚体(D
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Dimer)和纤维蛋白降解产物(FDP)是纤维蛋白(原)溶解后，人体内的纤维蛋白或纤维蛋白原在纤溶酶的作用下产生的降解产物，其涉及凝血激活和纤维蛋白(原)溶解两个过程。当凝血系统激活后，切割纤维蛋白原形成纤维蛋白单体，纤维蛋白单体在活化凝血因子XIII的催化下转化为交联的纤维蛋白。纤溶酶原在纤溶酶原激活剂的作用下转化为纤溶酶，纤溶酶溶解纤维蛋白(原)，产生各种可溶片段，形成FDP。而D
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二聚体是FDP的组成成分之一，是纤维蛋白单体经活化凝血因子XIII交联，形成稳定的交联纤维蛋白后，再经纤溶酶水解所产生的，包含Y链相连两个D片段的终末产物，是反映体内血浆高凝和纤溶激活的首选的分子标志物。
[0003]近年来，D
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二聚体已经成为临床凝血检查的常规检验项目，因检测方法具有高度敏感性和预测能力，使其在许多疾病，如静脉血栓，弥散性血管内凝血，妊娠高血压综合征，恶性肿瘤的鉴别诊断以及病情的进展，溶栓药物治疗监测和预后方面有重要的价值。当血栓发生时，纤溶系统也被激活，此时纤溶酶可降解纤维蛋白原和纤维蛋白单体形成较小的片段即FDP，所以FDP既是纤溶系统活性的筛选指标之一，也是体内凝血系统继发性纤溶时检测指标，常和D
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二聚体联合，在临床上应用于一些与凝血和纤溶失衡有关的疾病，例如在鉴别原发性和继发性纤溶亢进，弥散性血管内凝血，恶性肿瘤，心血管疾病，肝脏疾病，妊高症及先兆子痫的鉴别诊断，病情严重程度以及病情发展和治疗，预后监测中有中重要的意义。
[0004]虽然D
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二聚体和FDP检测在临床上已被广泛使用，检测方法的多样化使得不同方法间可比性较差，且目前仍没有统一的国际标准品和国家标准品，在连续动态检测过程中水平的确定也一直未能建立统一标准，影响临床检测结果的准确性。医疗机构临床实验室应当对开展的检测项目进行室内质量控制，其目的在于监测检测过程，评价检验结果的可靠性，决定检验报告是否能正常发出，是保证高质量操作的必要措施。而在室内质量控制的过程中，质控品的好坏是质量控制的关键。目前，D
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二聚体和FDP质控品由各个厂家自制，但质量层次不齐，同一厂家不同批次间存在差异，且各个厂家相互之间也无法通用。由于缺少国际和国家标准品，各临床实验室的检测项目的质量监控存在很多问题。因此建立实验室内部的质控品有助于我们在日常临床实验中对D
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二聚体和FDP检测结果进行质量监测。
[0005]专利CN201410619619.0公开了一种D
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二聚体和FDP复合质控品的制备方法，包括以下步骤：在钙离子存在的条件下在血浆中加入凝血酶，使血浆完全凝固；随后捣碎凝固的血浆，加入酶溶液(含有纤溶酶原和葡激酶)以降解纤维蛋白，反应完全后终止酶解反应，用保护液对得到的D
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二聚体和FDP复合母液进行稀释，获得D
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二聚体和FDP复合质控品，进行批间差检测的各质控品间差异在10％以内，稳定性检测中，开瓶后7天内组间差异保持在
5％以内，2
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8℃密封保存24个月内，组间差异保持在10％以内，符合质控品要求；专利CN201710861687.1也公开了一种D
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二聚体和FDP复合质控品的制备方法，将新鲜血液倒入放置玻璃珠的玻璃容器内，得到白色纤维蛋白原，复溶后用蛋白酶酶解，得到D
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二聚体和FDP复合母液，用保护液进行稀释，得到D
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二聚体和FDP复合质控品，进行批间差检测的各质控品间差异在5％以内，稳定性检测中，开瓶后7天内组间差异保持在5％以内，2
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8℃密封保存14个月内，组间差异也保持在5％以内，符合质控品要求。但以上D
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二聚体和FDP复合质控品的制备方法中，加凝血酶促凝会导致因动物源的差异，凝血酶原的切割位点差异，形成相近的异构体，静置凝血速度过慢，形成纤维蛋白时交联不均匀，且D
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二聚体和FDP复合质控品一般在2
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8℃或者低温冷冻保存，常温条件下有效成分不稳定，导致产品有效期极短(10h以内)，对产品的贮存和运输带来了极大的不便。由此提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]为解决上述技术问题，本专利技术公开了一种D
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二聚体和FDP复合质控品的制备方法，其避免了影响检测结果的异构体的形成，成品品质稳定，在低温、常温乃至高温下均有优异的稳定性，组间差异保持在5％以内。
[0007]本专利技术的第一个目的是提供一种D
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二聚体和FDP复合质控品的制备方法，包括以下步骤：
[0008]S1、将血浆与凝血激活剂混合，使血浆凝固；
[0009]S2、对凝固血浆进行酶解，得到D
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二聚体和FDP复合母液；其中，酶解所用的酶包括组织型纤溶酶原激活物(t
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PA)、葡激酶(SAK)和肝素；
[0010]S3、用保护液将D
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二聚体和FDP复合母液稀释，得到所述D
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二聚体和FDP复合质控品。
[0011]进一步地，所述凝血激活剂包括钙离子、磷脂和组织因子。
[0012]进一步地，磷脂包括但不限于天然磷脂、合成磷脂等。
[0013]进一步地，天然磷脂可选自豆磷脂或兔脑磷脂。
[0014]进一步地，合成磷脂通过脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、胆固醇中至少两种物质合成得到。
[0015]进一步地，凝血激活剂的组成为：钙离子不限于氯化钙0.5
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5％w/v，0.5
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5％乳酸钙，磷脂不限于0.1mg/L
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50mg/L的豆磷脂，0.5mg/L
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100mg/L的兔脑磷脂，0.2mg/L
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20mg/L的合成磷脂，激活剂不限于10ug/L
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200ug/L的兔脑组织因子，5ug/L
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80ug/L的胚胎组织因子，2ug/L
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60ug/L的合成组织因子。
[0016]进一步地，酶解体系中含有10
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100ug/L组织型纤溶酶原激活物(t
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PA)、20
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200ug/L葡激酶和500
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1500U/L肝素。
[0017]进一步地，肝素的重均分子量为1.2kD
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40kD范围内。
[0018]进一步地，保护液的成分包括：缓冲液、稳定剂、防腐剂和表面活性剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种D
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二聚体和FDP复合质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将血浆与凝血激活剂混合，使血浆凝固；S2、对凝固血浆进行酶解，得到D
‑
二聚体和FDP复合母液；其中，酶解所用的酶包括组织型纤溶酶原激活物、葡激酶和肝素；S3、用保护液将D
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二聚体和FDP复合母液稀释，得到所述D
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二聚体和FDP复合质控品。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述凝血激活剂包括钙离子、磷脂和组织因子。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：酶解体系中含有10
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100ug/L组织型纤溶酶原激活物、20
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200ug/L葡激酶和500
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1500U/L肝素。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：保...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢进辉，闫秋婷，潘仁斌，杨科，李帆，戴利娟，
申请(专利权)人：希肯生物技术苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：