重组蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术提出了一种重组蛋白及其应用，该重组蛋白包括：下列中的至少之一：D4

【技术实现步骤摘要】
重组蛋白及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体地，涉及重组蛋白及其应用，更具体地，涉及重组蛋白、核酸分子、表达载体、重组细胞、组合物、所述重组蛋白、核酸分子、表达载体、重组细胞或组合物在制备药物中的用途、药物。

技术介绍

[0002]免疫检查点抑制剂(如抗CTLA
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4、抗PD
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1/PD
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L1、抗LAG
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3、抗CD47/SIRPα)靶向天然免疫稳态途径驱使更强的免疫应答对抗肿瘤，已成为一线晚期肿瘤的治疗策略，免疫检查点的封锁将克服肿瘤微环境中的免疫耐受性并增强抗肿瘤免疫力，诱发持续的肿瘤缓解。因此阻断抑制性信号，重新激活免疫功能已成为治疗癌症的有效手段，2011年，美国FDA批准CTLA
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4抗体用于黑色素瘤的治疗，2014年批准PD
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1抗体用于黑色素瘤及其它癌症治疗。虽然免疫阻断疗法具有特异性强、稳定性高的优势，但长期注射治疗易诱导机体产生抗抗体及补体介导的细胞毒作用：ADCC(抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用)及CDC(补体依赖的细胞毒作用)效应，其非特异性激活免疫系统引起的离散毒性则会引起相应器官出现炎症症状，称之为免疫相关不良反应(immune
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related adverse events，irAEs)，irAEs可涉及多系统、多器官，发生时间无规律、治疗期间或治疗停止后的任何时间段都会发生，因此对irAEs的早期处理和护理是免疫检查点抑制剂安全使用的重要内容。
[0003]此外，在肿瘤微环境中也存在多种免疫抑制机制，即便阻断PD
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L1、CTLA
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4通路也不足以重新恢复免疫系统。虽然PD
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1或PD
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L1抗体改变了许多晚期癌症患者的格局，包括黑色素瘤、肺癌、乳腺癌、肾癌等取得了良好的长期效果。然而仅对部分患者有效，且可能产生毒性作用。同时，基因疗法虽然是治疗遗传疾病的潜在有效方法，但基因治疗的寡核苷酸和质粒DNA其大小、电荷和稳定性等因素不能被细胞有效的吸收，会严重影响疗效。因此，仍需进一步研发针对肿瘤免疫抑制的产品。

技术实现思路

[0004]本申请旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种商业选择。
[0005]本申请中，专利技术人设计了多种针对肿瘤模型的外源性注射蛋白，经过大量实验筛选后，获得优势重组蛋白，所述重组蛋白可以有效解决免疫应答抑制等问题，且相较于短肽具有体内半衰期较长的特点。更进一步地，专利技术人将所述编码所述重组蛋白的基因组装入肿瘤特异性T细胞，T细胞在肿瘤组织中持续表达分泌免疫检查点抑制性短肽，有效避免了短肽注射的组织穿透不足的问题，且避免了全身免疫系统激活，对肿瘤患者有着非常重要的受益作用。
[0006]因此，在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种重组蛋白。根据本专利技术的实施例，包括下列中的至少两种：D4
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2、C25、TPP
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1、PPL
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C和ERY2
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4。专利技术人通过大量实验对多种免疫检查点抑制肽进行重新组合和筛选，获得了多种优势重组蛋白，根据本专利技术实施例的所述重组蛋白可以有效阻断表达免疫检查点的肿瘤细胞与免疫细胞之间的相互作用，能够有
效解决免疫应答抑制的问题，且相较于短肽具有更长的体内半衰期，可以有效治疗或预防癌症，抗肿瘤效果得到显著提升。
[0007]在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种核酸。根据本专利技术的实施例，所述核酸编码第一方面所述的重组蛋白。根据本专利技术实施例的核酸编码的重组蛋白可以有效阻断表达免疫检查点PD
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1/PD
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L1、LAG
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3、CTLA
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4或CD47/SIRPα的肿瘤细胞与免疫细胞之间的相互作用，能够有效解决免疫应答抑制的问题，且相较于短肽具有更长的体内半衰期，可以有效治疗或预防癌症，抗肿瘤效果得到显著提升。
[0008]在本专利技术的第三方面，本专利技术提出了一种表达载体。根据本专利技术的实施例，所述表达载体包括：第二方面所述的核酸分子。所述表达载体可包括可选的控制序列，所述控制序列与所述核酸分子可操作地连接。其中，所述控制序列为可指导所述核酸分子在宿主中表达的一个或多个控制序列，这些控制序列可以直接来自于载体本身，也可以是外源性的，即并非来自于载体本身。本专利技术实施例所提出的表达载体可在适合的宿主细胞中高效表达所述重组蛋白，所述重组蛋白可以有效阻断表达免疫检查点PD
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1/PD
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L1、LAG
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3、CTLA
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4或CD47/SIRPα的肿瘤细胞与免疫细胞之间的相互作用，能够有效解决免疫应答抑制的问题，且相较于短肽具有更长的体内半衰期，可以有效治疗或预防癌症，抗肿瘤效果得到显著提升。
[0009]在本专利技术的第四方面，本专利技术提出了一种制备第一方面所述的重组蛋白的方法。根据本专利技术的实施例，包括：将第三方面所述的表达载体导入到细胞中；将所述细胞在适于蛋白表达和分泌的条件下进行培养，以便获得所述重组蛋白。根据本专利技术实施例的方法所获得的重组蛋白可以有效阻断表达免疫检查点PD
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1/PD
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L1、LAG
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3、CTLA
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4或CD47/SIRPα的肿瘤细胞与免疫细胞之间的相互作用，能够有效解决免疫应答抑制的问题，且相较于短肽具有更长的体内半衰期，可以有效治疗或预防癌症，抗肿瘤效果得到显著提升。
[0010]在本专利技术的第五方面，本专利技术提出了一种重组细胞。根据本专利技术的实施例，所述重组细胞携带第二方面所述的核酸、第三方面所述的表达载体或表达第一方面所述的重组蛋白。根据本专利技术实施例的重组细胞在一定条件下表达分泌所获得的重组蛋白可以有效阻断表达免疫检查点PD
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1/PD
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L1、LAG
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3、CTLA
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4或CD47/SIRPα的肿瘤细胞与免疫细胞之间的相互作用，可以有效解决免疫应答抑制的问题，且所述重组蛋白相较于免疫检查点抑制短肽具有更长的体内半衰期，可以有效治疗或预防癌症，抗肿瘤效果得到显著提升。
[0011]在本专利技术的第六方面，本专利技术提出了一种组合物。根据本专利技术的实施例，包括：第一方面所述的重组蛋白、第二方面所述的核酸、第三方面所述的表达载体或第五方面所述的重组细胞。如前所述，根据本专利技术实施例的重组蛋白可以有效阻断表达免疫检查点PD
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1/PD
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L1、LAG
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3、CTLA
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4或CD47/SIRPα的肿瘤细胞与免疫细胞之间的相互作用，能够有效解决免疫应答抑制的问题，且所述重组蛋白相较于免疫检查点抑制短肽具有更长的体内半衰期，因此，包含所述重组蛋白的组合物，如食品组合物、药物组本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组蛋白，其特征在于，包括下列中的至少两种：D4
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2、C25、TPP
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1、PPL
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C和ERY2
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4。2.根据权利要求1所述的重组蛋白，其特征在于，包括D4
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2、C25、TPP
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1、PPL
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C和ERY2
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4。3.根据权利要求2所述的重组蛋白，其特征在于，所述D4
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2的C端与所述C25的N端相连，所述C25的C端与所述TPP
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1的N端相连，所述TPP
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1的C端与所述PPL
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C的N端相连，所述PPL
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C的C端与所述ERY2
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4的N端相连。4.根据权利要求1所述的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白具有SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列具有至少95％、90％、85％同一性的氨基酸序列。5.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1
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4任一项所述的重组蛋白。6.根据权利要求5所述的核酸，其特征在于，所述核酸具有SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列。7.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括权利要求5或6所述的核酸。8.一种制备权利要求1
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4任一项所述的重组蛋白的方法，其特征在于，包括：将权利要求7所述的表达载体导入到受体细胞中；将携带有所述表达载体的受体细胞在适于蛋白表达和分泌的条件下进行培养，以便获得所述重组蛋白。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述受体细胞包括真核细胞；任选地，所述真核细胞包括哺乳动物细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：于肖飞，李雪，张慧洁，
申请(专利权)人：伯桢生物科技杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：