一种高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR检测核酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR检测核酸的方法，属于痕量检测技术领域。本发明专利技术提供了一种高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR检测核酸的方法，包括以下步骤：根据待测核酸设计特异性引物和至少1条探针，利用所述待测核酸、特异性引物和至少1条探针构建高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR体系，进行高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR反应。本发明专利技术成功建立一种高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR检测方法，重复性良好，且检测灵敏度高，特异性好。特异性好。特异性好。

【技术实现步骤摘要】
ID No.6所示的ASFV
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Probe
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190
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R。
[0013]本专利技术还提供了一种高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR检测非洲猪瘟病毒的方法，包括以下步骤：利用待测样品的核酸与上述引物探针组构建反应体系，进行TaqMan荧光定量PCR扩增反应，能检测到扩增曲线证明所述待测样品中包含非洲猪瘟病毒；
[0014]所述TaqMan荧光定量PCR扩增反应的程序，包括：95℃5min；95℃10s，60℃30s，40个循环。
[0015]优选的，所述TaqMan荧光定量PCR扩增反应的反应体系以20μL计，包括：TaqMan qPCR Mix 10μL，ASFV
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U
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F、ASFV
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U
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R各0.4μL，待测样品核酸2μL，探针各0.2μL，和余量的ddH2O。
[0016]优选的，所述ASFV
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U
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F和ASFV
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U
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R的浓度均为10μmol/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR检测核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：根据待测核酸设计特异性引物和至少1条探针，利用所述待测核酸、特异性引物和至少1条探针构建高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR体系，进行高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR反应。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，在所述特异性引物的上游引物和下游引物之间设计所述探针，并在每条探针上修饰荧光基团和淬灭基团。3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，所述待测核酸在进行高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR反应前，还可以进行超滤富集。4.一种高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR检测核酸的试剂盒，其特征在于，包括根据待测核酸设计的特异性引物和至少1条探针，和/或超滤富集核酸的试剂；所述探针设计在所述特异性引物的上游引物和下游引物之间。5.一组特异性检测非洲猪瘟病毒的引物探针组，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的引物ASFV
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U
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F和SEQ ID No.2所示的引物ASFV
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U
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R；还包括以下探针中的至少一条：核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的ASFV
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Probe
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109
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R、SEQ ID No.4所示的ASFV
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Probe
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40
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F、SEQ ID No.5所示的ASFV
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Probe
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118
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F和SEQ ID No.6所示的ASFV
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Probe
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190
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R。6.一种高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR检测非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：利用待测样品的核酸与权利要求5所述引物探针组构建反应体系，进行TaqMan荧光定量PCR扩增反应，能检测到扩增曲线证明所述待测样品中包含非洲猪瘟病毒；所述TaqMan荧光定量PCR扩增反应的程序，包括：95℃5min；95℃10s，60℃30s，40个循环。7.一种核酸富集结合高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR检测非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：对含病毒核酸的待测样品进行病毒核酸的超滤富集，得模板；利用所述模板与权利要求5所述引物探针组构建反应体系，进行TaqMan荧光定量PCR扩增反应，...

【专利技术属性】
技术研发人员：董伟仁，颜焰，金玉兰，彭曦冉，顾金燕，周继勇，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：