一种蛋白桑叶中蛋白质处理方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种蛋白桑叶中蛋白质处理方法及应用，首先对蛋白桑叶中蛋白质进行提取，然后对提取得到的蛋白质进行酶解，本发明专利技术选择通过超声辅助碱提酸沉法提取蛋白桑叶蛋白，探究、优化得到最佳工艺条件为：氢氧化钠浓度0.125mol/L、提取温度40℃、提取时间40min和液料比37：1mL/g。在此优化条件下，得到蛋白质提取率实际值为49.59％，所得蛋白等电点为pH＝3.5，吸水性为6.49g/g，吸油性为2.59g/g，乳化活性为7.40m2/g，乳化稳定性为72.48％。通过进一步对蛋白桑叶蛋白的酶解及体外降血糖活性检测得出，不同蛋白酶酶解物的体外降血糖活性不同，其中中性蛋白酶酶解物对α

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白桑叶中蛋白质处理方法及应用


[0001]本专利技术属于中草药
，具体涉及一种蛋白桑叶中蛋白质处理方法及应用。

技术介绍

[0002]桑(Morus alba L.)为桑科桑树落叶乔木或灌木，广泛分布于亚洲和欧洲。桑叶是桑的主要产物，由于其含有丰富的营养价值，在1993年被我国卫生部列为药食两用的农产品，具有防治糖尿病等功效，作为绿色、健康食品被推广。基于桑叶广泛的应用价值，近年来我国科研人员通过人工选择与杂交育种，培育出抗逆性品系——蛋白桑。据报道，蛋白桑干桑叶粉中粗蛋白含量在25％～35％之间，含有18种氨基酸，种类齐全，其中动物必需氨基酸占总氨基酸质量分数的43％，是优质的蛋白质资源。关于桑叶蛋白的提取加工方法有较广泛的研究，目前桑叶蛋白的提取方式有直接加热法、酸碱沉淀法、盐析法、乳酸发酵法以及泡沫分离等技术，其中酸碱沉淀法由于其廉价、高效的特性，最为工业化生产常用。超声波作为一种辅助提取的技术，其在传播过程中产生的超声效应可使介质的形态、结构等发生一定变化，可大大提高蛋白质的提取率，改善蛋白质功能特性。研究发现，超声辅助提取桑叶蛋白质，提取率可达9％以上，然而目前大多研究多采用水或盐溶液作为提取溶剂，基于酸碱沉淀及超声波辅助提取两种高效提取方法联用的工艺优化研究较少。
[0003]糖尿病是人类健康的重要威胁，α
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葡糖苷酶抑制剂可以延长碳水化合物的消化时间，由此降低餐后血糖，是最具临床价值的降血糖药物之一。多肽由于具有降血糖活性好、副作用少等优点，被认为是目前最广泛研究的潜在治疗剂。目前从骆驼乳清、鹰嘴豆、蜂王浆、辣木籽中提取分离得到的多肽均有抑制α
‑
葡萄糖苷酶活性，起到辅助降低血糖的作用。
[0004]桑叶是产量大、蛋白质含量高的“药食同源”产品，蛋白桑作为桑中蛋白质优势新资源，具有更加广阔的研究空间。关于桑叶的活性成分提取及活性分析研究，目前主要集中于黄酮、生物碱等次生代谢物，其蛋白质及活性肽方面则少有关注。基于蛋白桑本身优异的饲料和药用价值，以及目前我国蛋白质资源高度依赖进口资源的现状，发展蛋白桑蛋白质资源开发与研究利用对于粮食安全、食品安全、饲料安全及医药领域的开发具有重大的战略意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种蛋白桑叶中蛋白质处理方法。
[0006]为了是现实行数目的，本专利技术的技术方案概述如下：
[0007]一种蛋白桑叶中蛋白质处理方法，所述方法包括：
[0008](1)首先对蛋白桑叶中蛋白质进行提取：取一定量蛋白桑叶粉溶于浓度为0.125
‑
0.2mol/L的氢氧化钠溶液中，于25
‑
50℃温度下，提取时间为20
‑
60min，将收集到的桑叶蛋白溶液用1mol/L盐酸调节体系pH值调节至等电点3.5，静置30min，6000r/min离心10min，收集沉淀，蒸馏水洗涤，冷冻干燥，得到桑叶蛋白粉，所述氢氧化钠溶液液和蛋白桑叶粉的液料比为20∶1
‑
60∶1mL/g；
[0009](2)然后对提取得到的蛋白质进行酶解：采用中性蛋白酶对蛋白桑叶中蛋白质进行酶解。
[0010]优选地，本专利技术最佳的对蛋白桑叶中蛋白质进行提取工艺为：所述氢氧化钠浓度0.125mol/L，温度为40℃，提取时间40min和液料比37∶1mL/g。
[0011]优选地，在提取过程中，可以采用超声辅助提取，超声功率为480W。
[0012]本专利技术还公开了上述提取工艺提取的蛋白质在体外降血糖中的应用，实际使用时可以根据情况制备成药物，所述药物为片剂、颗粒剂、口服液、分散剂或胶囊剂等。
[0013]优选地，本专利技术以体外α
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葡萄糖苷酶抑制率为评价指标，就不同蛋白桑蛋白酶酶解产物体外α
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葡萄糖苷酶抑制活性进行研究，6种蛋白酶酶解物中，中性蛋白酶酶解物对α
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葡萄糖苷酶抑制能力最强，具有较好的研究潜力，通过单因素实验及正交实验，确定最优酶解条件为选择中性蛋白酶，酶解温度45℃，酶解pH为7，酶解时间3h，底物浓度3％，酶添加量5％，酶解液对α
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葡萄糖苷酶抑制率为99.84％。
[0014]本专利技术的优点：
[0015]本研究选择通过超声辅助碱提酸沉法提取蛋白桑叶蛋白，探究、优化得到最佳工艺条件为：氢氧化钠浓度0.125mol/L、提取温度40℃、提取时间40min和液料比37：1mL/g。在此优化条件下，得到蛋白质提取率实际值为49.59％，所得蛋白等电点为pH＝3.5，吸水性为6.49g/g，吸油性为2.59g/g，乳化活性为7.40m2/g，乳化稳定性为72.48％。
[0016]通过进一步对蛋白桑叶蛋白的酶解及体外降血糖活性检测得出，不同蛋白酶酶解物的体外降血糖活性不同，其中中性蛋白酶酶解物对α
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葡萄糖苷酶抑制效果最佳，为蛋白桑叶蛋白质及多肽资源在降血糖等领域的进一步开发利用提供理论依据。
附图说明
[0017]图1是氢氧化钠浓度对蛋白质提取率的影响；
[0018]注：图中a，b，c等字母代表数据显著性差异，不同字母之间代表差异性显著(P＜0.05)，同一个字母之间代表差异不显著(P＞0.05)，图2、3、4同。
[0019]图2是提取温度对蛋白质提取率的影响；
[0020]图3是提取时间对蛋白质提取率的影响；
[0021]图4是液料比对蛋白质提取率的影响；
[0022]图5是蛋白桑叶蛋白等电点的测定结果；
[0023]图6是不同蛋白酶对蛋白桑叶蛋白酶解物α
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葡萄糖苷酶抑制率影响；
[0024]图7是样品色谱图；
[0025]图8是总离子流色谱图。
具体实施方式
[0026]下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但下述实施例中所涉及的具体实验方法如无特殊说明，均为常规方法或按照制造厂商说明书建议的条件实施。
[0027]若未特别指明，实施例中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下述实施例中的试验方法，如无特别说明，均为常规方法。如无特殊说明，所采用的试剂及材
料，均可以从市场中购买获得。
[0028]除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本专利技术中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
[0029]1材料与方法
[0030]1.1材料与仪器
[0031]蛋白桑叶采收于2021年9月，由北京市大兴区黎明村农业生态园提供；Bradford蛋白质定量试剂盒(包含考马斯亮蓝染色剂，1mg/mL牛血清白蛋白溶液)天根生化科技(北京)有限公司；大豆油(批准文号：膳食药准字F2009009)江西益普生药业有限公司；风味本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛋白桑叶中蛋白质处理方法，其特征在于，所述方法包括：(1)首先对蛋白桑叶中蛋白质进行提取：取一定量蛋白桑叶粉溶于浓度为0.125
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0.2mol/L的氢氧化钠溶液中，于25
‑
50℃温度下，提取时间为20
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60min，将收集到的桑叶蛋白溶液用1mol/L盐酸调节体系pH值调节至等电点3.5，静置30min，6000r/min离心10min，收集沉淀，蒸馏水洗涤，冷冻干燥，得到桑叶蛋白粉，所述氢氧化钠溶液液和蛋白桑叶粉的液料比为20∶1
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60∶1mL/g；(2)然后对提取得到的蛋白质进行酶解：采用中性蛋白酶对蛋白桑叶中蛋白质进行酶解。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：李卫东，曹天丽，李宗朔，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：