【技术实现步骤摘要】
近平滑念珠菌唑类耐药相关的新突变位点及其应用
[0001]本申请涉及真菌耐药机制以及耐药快速检测的
,更具体地说,涉及近平滑念珠菌唑类耐药相关的新突变位点及其应用。
技术介绍
[0002]近平滑念珠菌是一种全球范围内引起侵袭性念珠菌病的临床重要致病性真菌。唑类药物是预防或治疗侵袭性念珠菌病的常用药物。近平滑念珠菌对唑类药物的耐药情况严重且逐年增加,耐药率在全球部分地区甚至高达50%,给近平滑念珠菌感染的预防和治疗构成了严峻挑战。
[0003]念珠菌对唑类药物的耐药最常见途径是麦角甾醇生物合成机制的改变,主要为药物靶点14
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去甲基化酶Erg11或后期合成关键酶Erg3突变或过度表达。药物外排泵包括ATP转运蛋白家族(Cdr1和Cdr2)和蛋白外排超家族(Mdr1)表达上调是念珠菌产生对唑类药物的耐药性的另一关键因素,多由其对应的转录因子TAC1和MRR1发生功能获得性突变所介导。但是目前针对近平滑念珠菌的唑类耐药机制研究尚缺乏。虽然已有研究表明存在一些突变与耐药获得潜在相关,但其功能仍待验证。
[0004]临床上对微生物耐药的检测有以表型或基因型为鉴定对象的两类检测方法,目前临床常规检测方法主要为传统表型检测方法,包括纸片扩散法、浓度梯度稀释法和肉汤稀释法,但耗时均较长。快速表型药敏检测通过检测抗菌药物存在下病原菌的生长阻滞情况,来判断其耐药性或检测药物敏感性。但这类方法操作耗时、所需设备昂贵、存在放射性危害,且较难实现快速高效的筛查。基因型耐药性检测方
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种近平滑念珠菌唑类耐药相关MRR1基因的新突变位点,其特征在于:所述突变位于MRR1基因在如SEQ ID NO 1所示的碱基序列的第1873位,发生的点突变为碱基C替换为碱基A(C1873A);对应地,编码的Mrr1蛋白在如SEQ ID NO 15所示的氨基酸序列上的第625位氨基酸由谷氨酰胺变为赖氨酸(Q625K)。2.一种近平滑念珠菌唑类耐药相关TAC1基因的新突变位点,其特征在于:所述突变位于TAC1基因在SEQ ID NO 2所示的碱基序列第1318位,发生的点突变为碱基G突变为T(G1318T),对应地,编码的Tac1蛋白在SEQ ID NO 17所示的氨基酸序列的第440位氨基酸由天冬氨酸替换为酪氨酸(D440Y);和/或,所述突变位于TAC1基因的第1475位,发生的点突变为碱基C突变为碱基T(C1475T),对应地,编码的Tac1蛋白在如SEQ ID NO 17所示的氨基酸序列上的第440位氨基酸由苏氨酸替换为蛋氨酸(T492M)。3.一种检测近平滑念珠菌唑类耐药相关突变碱基的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括用于检测权利要求1所述的MRR1基因的第1873位点和/或权利要求2所述的TAC1基因的第1318位点和/或第1475位点是否发生碱基突变的特异性寡核苷酸探针;优选地,所述用于检测权利要求1所述的MRR1基因的第1873位点是否发生碱基突变的特异性寡核苷酸探针包含如SEQ ID NO 3所示的碱基序列;和/或,所述用于检测权利要求2所述的TAC1基因的第1318位点是否发生碱基突变的特异性寡核苷酸探针包含如SEQ ID NO 4所示的碱基序列;和/或,所述用于检测权利要求2所述的TAC1基因的第1475位点是否发生碱基突变的特异性寡核苷酸探针包含如SEQ ID NO 5所示的碱基序列。4.一种检测近平滑念珠菌唑类耐药相关突变碱基的微流控芯片,其特征在于,所述试剂盒包括用于检测权利要求1所述的MRR1基因的第1873位点和/或权利要求2所述的TAC1基因的第1318位点和/或第1475位点是否发生碱基突变的特异性寡核苷酸探针;优选地,所述用于检测权利要求1所述的MRR1基因的第1873位点是否发生碱基突变的特异性寡核苷酸探针包含如SEQ ID NO 3所示的碱基序列;和/或,所述用于检测权利要求2所述的TAC1基因的第1318位点是否发生碱基突变的特异性寡核苷酸探针包含如SEQ ID NO 4所示的碱基序列;和/或,所述用于检测权利要求2所述的TAC1基因的第1475位点是否发生碱基突变的特异性寡核苷酸探针包含如SEQ ID NO 5所示的碱基序列。5.一种权利要求1所述的近平滑念珠菌唑类耐药相关MRR1基因的新突变位点、权利要求2所述的近平滑念珠菌唑类耐药相关TAC1基因的新突变位点、权利要求3所述的检测近平滑念珠菌唑类耐药相关突变碱基的试剂盒或权利要求4所述的检测近平滑念珠菌唑类耐药相关突变碱基的微流控芯片在快速检测近平滑念珠菌耐药性中的应用,所述应用为非疾病诊断或治疗领域中的应用。6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述耐药性为针对唑类药物的耐药性:所述MRR1基因的C1873A突变(氨基酸突变为Q265K)导致菌株对氟康唑耐药;所述TAC1基因的G1318T突变(氨基酸突变为D440Y)和C1475T突变(氨基酸突变为T492M)均可导致菌株对氟康唑、泊沙康唑和伊曲康唑耐药。7.一种近平滑念珠菌唑类耐药性的快速筛查法,其特征在于,利用微流控芯片技术快速检测近平滑念珠菌MRR1基因第1873位...
【专利技术属性】
技术研发人员:宁雅婷,张丽,徐英春,孙天舒,罗征宇,肖盟,于淑颖,史小伟,张国豪,
申请(专利权)人:中国医学科学院北京协和医院,
类型:发明
国别省市:
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