一种光响应控释一氧化氮的脂质体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种光响应控释一氧化氮的脂质体及其制备方法和应用，所述脂质体包含陆森黑盐和总脂质；所述总脂质由磷脂、胆固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺

【技术实现步骤摘要】
一种光响应控释一氧化氮的脂质体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及药物控制释放和生物材料
，具体涉及一种光响应控释一氧化氮的脂质体，还涉及所述制备方法和应用。

技术介绍

[0002]一氧化氮(nitric oxide,NO)是一种半衰期较短的气体信使分子，参与调节许多细胞活动，包括血管生长、平滑肌舒张、免疫应答、细胞凋亡和突触信息传递等。NO在生物体内可由一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)以L
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精氨酸(L
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arginine，L
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arg)为底物催化反应生成。外源性NO在疾病的预防、治疗以及生理学功能的研究方面具有重要意义。而NO在生物体中的作用高度依赖于其浓度和作用时间。例如在肿瘤领域，NO存在明显的“双刃剑”效应，即低浓度的NO可促进肿瘤生长，高浓度的NO具有抗肿瘤作用。因此，控制气体分子的按需释放是实现NO治疗的基础，而如何可控的释放NO是一个难题。
[0003]理想的NO供体最主要的特点是自体稳定和按需可控释放。陆森黑盐(Roussin
’
s black salt,RBS)是第一种原子团簇化合物，分子式为NH4[Fe4S4(NO)7]，具有良好的水溶性和耐高温特性。RBS可在光照条件下释放NO，且因单分子中NO基团数量较多，所以具有非常优秀的调控释放量的潜力。另外，RBS和H2O2在偏酸的肿瘤微环境中可发生反应产生具有细胞毒性的NO和活性氧物质(ROS)，进一步导致癌细胞内DNA损伤、线粒体膜电位下降和脂质过氧化，进而诱导肿瘤细胞死亡。但是，RBS自身缺乏靶向性，并且在体内循环过程中与蛋白结合产生副作用。因此，迫切需要载体将其递送到治疗部位，以达到有效的治疗效果。
[0004]脂质体(Liposome)是利用磷脂双分子层形成的囊泡结构。由于生物体质膜的基本结构也是磷脂双分子层膜，脂质体具有与生物体细胞相类似的结构，因此有很好的生物相容性和生物可降解性，除此之外，脂质体制备相对简单，制备脂质体所用到的材料毒性极小，生物相溶性好，没有免疫反应，并且可以同时包裹脂溶性药物和水溶性药物。因此亟需研发一种适用于包封RBS的脂质体(Lipo
‑
RBS)，用以增加药物在体内的浓度及保护药物不被降解，延长循环时间，提高药物作用时间；同时也可精准靶向于肿瘤部位，减少对正常部位血管的损害。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种制备光响应控释一氧化氮的脂质体的方法；本专利技术的目的之二在于所述方法制备得到光响应控释一氧化氮的脂质体；本专利技术的目的之三在于提供所述光响应控释一氧化氮的脂质体在制备治疗胰腺癌和乳腺癌的药物中的应用。
[0006]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]1、一种制备光响应控释一氧化氮的脂质体的方法，包含如下步骤：
[0008](1)称取陆森黑盐粉末溶解在蒸馏水中制备陆森黑盐水溶液；
[0009](2)称取磷脂、胆固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000，加入无水乙醇
中溶解得到脂质溶液；
[0010](3)将步骤(1)和(2)制备得到的溶液混合，在磁力搅拌下水浴加热反应得到粗脂质体；
[0011](4)将粗脂质体在保持温度的情况下依次通过孔径为400nm、200nm、100nm的聚碳酸酯膜得到纳米脂质体；
[0012](5)将纳米脂质体溶液过G
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25葡聚糖凝胶柱，收集到的黄褐色液体即为光响应控释一氧化氮的脂质体。
[0013]本专利技术优选的，步骤(2)中，所述磷脂为二棕榈酰磷脂酰胆碱或二硬脂酰磷脂酰胆碱或氢化大豆卵磷脂。
[0014]本专利技术优选的，步骤(2)中，所述胆固醇的摩尔分数低于50％，二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000摩尔分数低于5％，余量为磷脂。
[0015]本专利技术优选的，步骤(1)中陆森黑盐粉末和步骤(2)中磷脂、胆固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000总脂质的质量比为1:6～11。
[0016]本专利技术优选的，步骤(1)中陆森黑盐粉末和步骤(2)中磷脂、胆固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇2000总脂质的质量比为1：8，总脂质中胆固醇的摩尔分数为20％。
[0017]本专利技术优选的，步骤(3)中，所述水浴加热反应为水浴加热至60～70℃，反应30min。
[0018]2、所述方法制备得到光响应控释一氧化氮的脂质体。
[0019]3、所述光响应控释一氧化氮的脂质体在制备治疗胰腺癌和乳腺癌的药物中的应用。
[0020]本专利技术优选的，所述脂质体的药物包封率大于60％，药物负载率大于8％。
[0021]本专利技术优选的，所述脂质体的水合粒径为130～150nm，表面电势为
‑
28mV。
[0022]本专利技术的有益效果在于：
[0023]本专利技术的光响应控释一氧化氮的脂质体是将RBS分子包封在脂质体中，提高药物稳定性，利用RBS的光/pH/过氧化氢响应特性实现NO的可控释放，同时利用脂质体纳米颗粒的EPR效应实现实体肿瘤的靶向性。RBS为水溶性药物，可以包封在脂质体中心空腔中，避免与其它生物活性分子(如血清蛋白)结合，显著降低药物的毒副作用。本专利技术研究了RBS脂质体的合成制备参数，测量了粒径、包封率等指标，对NO控释特性及其肿瘤抑制效果进行了探究，为NO供体类药物的研发和应用奠定了基础。
附图说明
[0024]为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：
[0025]图1为陆森黑盐与脂质的比例(药脂比)对包封率和负载率的影响；
[0026]图2为胆固醇含量对包封率和负载率的影响；
[0027]图3为本专利技术最优配方的物理化学参数；
[0028]图4为陆森黑盐脂质体的电镜图；
[0029]图5为陆森黑盐脂质体在PBS溶液中的分散稳定性；
[0030]图6为中性和酸性条件对陆森黑盐脂质体和游离陆森黑盐稳定性的影响；
[0031]图7为陆森黑盐脂质体和陆森黑盐溶液的光响应控释一氧化氮特性；
[0032]图8为陆森黑盐脂质体在KPC细胞内光响应释放一氧化氮；
[0033]图9为陆森黑盐脂质体在KPC和MCF
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7细胞上的细胞毒性和IC50值。
具体实施方式
[0034]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0035]实施例1
[0036]一种制备光响应控释一氧化氮的脂质体的方法，所述方法采用乙醇注入法制备，具体包括以下步骤：
[0037](1)制备陆森黑盐水溶液：将0.5mg的陆森黑盐粉末溶解在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备光响应控释一氧化氮的脂质体的方法，其特征在于，包含如下步骤：(1)称取陆森黑盐粉末溶解在蒸馏水中制备陆森黑盐水溶液；(2)称取磷脂、胆固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000，加入无水乙醇中溶解得到脂质溶液；(3)将步骤(1)和(2)制备得到的溶液混合，在磁力搅拌下水浴加热反应得到粗脂质体；(4)将粗脂质体在保持温度的情况下依次通过孔径为400nm、200nm、100nm的聚碳酸酯膜得到纳米脂质体；(5)将纳米脂质体溶液过G
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25葡聚糖凝胶柱，收集到的黄褐色液体即为光响应控释一氧化氮的脂质体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述磷脂为二棕榈酰磷脂酰胆碱或二硬脂酰磷脂酰胆碱或氢化大豆卵磷脂。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述胆固醇的摩尔分数低于50％，二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000摩尔分数低于5％，余量为磷脂。4.根据权利要求1所述的光响应控释一氧化氮的...

【专利技术属性】
技术研发人员：田甘，张潇，马焕焕，陈天晴，
申请(专利权)人：金凤实验室，
类型：发明
国别省市：