一种药物和基因共载的脂质体复合物在抗肿瘤领域的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种药物和基因共载的脂质体复合物及在抗肿瘤领域的应用。非小细胞肺癌占所有肺癌的85％，是全球癌症相关死亡的主要原因，抗肿瘤药物与siRNA联合给药可以提高治疗效果。本发明专利技术提供了一种药物和基因共载的脂质体复合物，可以实现靶向递送化疗药物和siRNA。根据验证，该脂质体复合物能够有效维持siRNA活性、降低阳离子脂质带来的毒性、发挥更强的抗肿瘤作用。抗肿瘤作用。抗肿瘤作用。

【技术实现步骤摘要】
一种药物和基因共载的脂质体复合物在抗肿瘤领域的应用


[0001]本专利技术属于抗肿瘤药物制剂
，具体涉及一种药物和基因共载的脂质体复合物，所述脂质体的制备方法及其在抗肿瘤领域的应用。

技术介绍

[0002]该
技术介绍
部分记载的信息并不必然被视为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]非小细胞肺癌(Non
‑
small cell lung cancer,NSCLC)占所有肺癌(Lung cancer,LC)的85％，是全球癌症相关死亡的主要原因。近年来，将抗癌药物和小干扰RNA(siRNA)联合应用的治疗方式引起了广泛的关注。小干扰RNA在大多数细胞中对靶向基因的敲除或沉默起着关键作用，在癌症的治疗上有巨大的应用潜力，它可以形成RNA诱导的基因沉默复合物(RISC)，RISC可以切割编码靶基因的信使RNA(mRNA)分子来沉默某些基因表达从而干扰相关蛋白表达，影响细胞周期和细胞凋亡等细胞通路促进肿瘤细胞的死亡，抑制肿瘤的生长。将抗癌药物和siRNA共同装载到同一载体中，可以实现联合给药，提高治疗效果。
[0004]siRNA的高效转运和转染存在许多障碍，如强烈的负电荷、大分子质量、核内体和溶酶体的酶降解等。为了解决这些问题，已经报道了各种纳米载体，包括阳离子聚合物纳米颗粒、阳离子脂质体、二氧化硅基阳离子纳米颗粒(NP)和微球等非病毒载体，用于siRNA的递送。脂质体是一种封闭的磷脂双层囊泡系统，能够包封亲水性和疏水性药物，同时具有较好的生物相容性和生物可降解性，将其作为抗癌药物和siRNA的共载载体具有巨大的优势。

技术实现思路

[0005]基于上述研究背景，本专利技术提供了一种化疗药物与siRNA共递送的药物载体，由于siRNA进入细胞后容易被降解，化疗药物的不均匀分布会在正常健康细胞中导致严重的全身性副作用，因此考虑构建阳离子脂质体，保护siRNA免受降解，并能将药物和基因共同递送到靶细胞中，同时聚
‑
γ
‑
谷氨酸(γ
‑
PGA)是一种优良的环保型高分子材料，具有良好的生物相容性和生物可降解性，在生理条件下带负电，可通过静电作用吸附在阳离子载体表面，γ
‑
PGA电晕可以与肿瘤细胞上与肿瘤相关的γ
‑
谷氨酰转肽酶(GGT)特异性结合，实现肿瘤靶向递送。
[0006]基于上述设计，本专利技术提供了一种采用聚
‑
γ
‑
谷氨酸(γ
‑
PGA)修饰前期构建的阳离子脂质体，以期更好地实现药物和基因的共同递送，具体提供以下技术方案：
[0007]本专利技术第一方面，提供一种药物和基因共载的脂质体复合物，所述脂质体复合物的磷脂双分子层内装载化疗药物，层外通过静电结合siRNA及γ
‑
PGA。
[0008]上述第一方面所述脂质体复合物由卵磷脂、胆固醇及硬脂胺组成；其中，卵磷脂与胆固醇构建磷脂双分子层结构，其表面修饰硬脂胺使得脂质体显示正电荷从而静电作用吸附siRNA及γ
‑
PGA，实现自组装。另外，γ
‑
PGA不仅能够特异性识别肿瘤细胞，还能够降低阳离子脂质体的毒性，提高复合物的安全性。
[0009]优选的，所述siRNA作用于抑制癌细胞凋亡的蛋白，具体的实例中，所述siRNA用于抑制Bcl
‑
2。
[0010]所述Bcl
‑
2siRNA序列的获取包括但不限于基于靶序列进行设计、委托设计或数据库获取，其合成方式也不局限于化学合成、体外转录、长片断dsRNAs经RNase III类降解、siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAs、PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达等。本专利技术提供的一种具体的实施方式中，所述Bcl
‑
2siRNA序列的序列如下：
[0011]Forward:5
’‑
GGGAGAACAGGGUACGAUATT
‑3’
；
[0012]Reverse:5
’‑
UAUCGUACCCUGUUCUCCCTT
‑3’
。
[0013]所述脂质体中包载化疗药物及siRNA，所述化疗药物为抗肿瘤药物，本专利技术验证可行的实施方式中，所述化疗药物为可用于NSCLC治疗的药物，包括但不限于紫杉醇、吉西他滨、顺铂、卡铂或培美曲塞二钠(PMX)中的一种；本专利技术优选的方式中，所述化疗药物为PMX或PMX和二甲双胍的组合。应当说明的是，以PMX或PMX和二甲双胍的组合作为优选方案的原因在于，临床研究表明，与其他化疗药物(如多西他赛)相比，培美曲塞二钠难以提高患者的生存率，治疗效果不佳，剂量过大时又会产生严重的骨髓抑制。本专利技术提供了一种化疗药物与siRNA共递送的方式，能够有效将药物递送至癌细胞，提高治疗效果，对于培美曲塞二钠而言，能够获得更加理想的治疗效果。
[0014]本专利技术第二方面，提供第一方面所述药物和基因共载脂质体复合物的制备方法，包括如下步骤：将化疗药物、卵磷脂、胆固醇及硬脂胺通过薄膜水化法制备含药脂质体；将所述含药脂质体与siRNA混合孵育得到含药脂质体
‑
siRNA复合物，再与γ
‑
PGA混合孵育得到所述药物和基因共载的脂质体复合物。
[0015]优选的，所述含药脂质体的制备方式如下：
[0016]将卵磷脂、胆固醇、硬脂胺溶于有机溶剂中，旋蒸去除有机溶剂获得脂质膜，向脂质膜中加入化疗药物及水；水浴后均质得到含药脂质体。
[0017]进一步的，所述卵磷脂、胆固醇、硬脂胺的质量比为40～45：7～8：4～6。
[0018]进一步的，所述有机溶剂为包括但不限于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚中的一种或几种；具体的，为乙醇。
[0019]进一步的，所述水浴温度为55～65℃，所述水浴时间为15～25min。
[0020]进一步的，所述均质压力为45～55kpsi，匀质4～6次。
[0021]所述含药脂质体
‑
siRNA复合物的制备方法中：
[0022]进一步的，所述siRNA溶解于DEPC水中。
[0023]进一步的，所述含药脂质体与siRNA孵育时间为25～35min，孵育温度为室温。
[0024]进一步的，所述含药脂质体与siRNA的质量比为200～250：1；更进一步的，为220～240：1混合。
[0025]进一步的，所述含药脂质体
‑
siRNA复合物与γ
‑
PGA按照质量比2～4：1进行混合，室温下孵育55～65min。
[0026]本专利技术第三方面，提供第一方面所述γ
‑
PGA
‑
PMX/siRNA
‑
CL复合物在制备抗肿瘤产品中的应用。
[0027]所述应用包括但不限于以下任意一个本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种药物和基因共载的脂质体复合物，其特征在于，所述脂质体复合物的磷脂双分子层内装载化疗药物，层外通过静电结合siRNA及γ
‑
PGA。2.如权利要求1所述药物和基因共载的脂质体复合物，其特征在于，所述磷脂双分子层由卵磷脂、胆固醇及硬脂胺组成。3.如权利要求1所述药物和基因共载的脂质体复合物，其特征在于，所述siRNA作用于抑制癌细胞凋亡的蛋白；优选的，所述siRNA用于抑制Bcl
‑
2；具体的实施方式中，所述Bcl
‑
2siRNA序列的如下：Forward:5
’‑
GGGAGAACAGGGUACGAUATT
‑3’
；Reverse:5
’‑
UAUCGUACCCUGUUCUCCCTT
‑3’
。4.如权利要求1所述药物和基因共载的脂质体复合物，其特征在于，所述化疗药物为包括但不限于紫杉醇、吉西他滨、顺铂、卡铂或培美曲塞二钠中的一种；优选的，化疗药物为PMX或PMX和二甲双胍的组合。5.权利要求1
‑
4任一项所述药物和基因共载脂质体复合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将化疗药物、卵磷脂、胆固醇及硬脂胺通过薄膜水化法制备含药脂质体；将所述含药脂质体与siRNA混合孵育得到含药脂质体
‑
siRNA复合物，再与γ
‑
PGA混合孵育得到所述药物和基因共载的脂质体复合物。6.权利要求5所述药物和基因共载脂质体复合物的制备方法，其特征在于，所述含药脂质体的制备方式如下：将卵磷脂、胆固醇、硬脂胺溶于有机溶剂中，旋蒸去除有机溶剂获得脂质膜，向脂质膜中加入化疗药物及...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄桂华，黄小雨，冯瑞华，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：