一种基于重组酶聚合酶扩增技术的田鼠巴贝虫检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于重组酶聚合酶扩增技术的田鼠巴贝虫检测方法，所述检测方法根据田鼠巴贝虫18SrRNA基因片段进行靶序列筛选，设计并筛选出一对特异性RPA引物和一条探针，如SEQ ID NO:1

【技术实现步骤摘要】
一种基于重组酶聚合酶扩增技术的田鼠巴贝虫检测方法


[0001]本专利技术涉及分子检测
，具体涉及一种基于重组酶聚合酶扩增技术的田鼠巴贝虫检测方法。

技术介绍

[0002]巴贝虫(Babesia.spp)是寄生于人或其它哺乳动物红细胞内的血液原虫，可引起人兽共患巴贝虫病(Zoonotics Babesiosis)。目前已经从野生动物和家畜分离鉴定出一百多种巴贝虫虫种，发现其中7种可寄生于人体红细胞引起巴贝虫病，主要包括田鼠巴贝虫(Babesia microti)，分歧巴贝虫(B.divergens)，邓肯巴贝虫(B.duncani)，猎人巴贝虫(B.venatorum)，牛巴贝虫(B.bovis)和犬巴贝虫(B.canis)，其中以田鼠巴贝虫为最常见的病原体。人巴贝虫病的临床表现严重程度差异很大，在健康人群中，大多呈现隐性感染，或一过性的发热等类似感冒症状，而在免疫缺陷病人中，如脾切除、HIV患者、老人或孩子等则会病情严重甚至死亡。
[0003]巴贝虫病的主要传播途径包括：感染蜱虫叮咬，输血传播，以及母婴垂直传播。在我国针对巴贝虫自本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于重组酶聚合酶扩增技术的田鼠巴贝虫检测方法，其特征在于，所述检测方法根据田鼠巴贝虫基因片段进行靶序列筛选，设计并筛选出一对特异性RPA引物和一条探针，提取血液样本中的DNA并构建荧光RPA反应体系，进行荧光RPA检测，包括以下步骤：S1、根据田鼠巴贝虫基因序列设计如下所示的特异性RPA引物及探针：上游引物：5'
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TTCGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGAAACG
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3'，如SEQ ID NO:1所示；下游引物：5'
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CTGCAACAACTTTAATATACGCTATTGGAG
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3'，如SEQ ID NO:2所示；探针：CGCAAATTACCCAATCCTGACACAGGGAGG/i6FAMdT//idSp/G/iBHQdT/GACAAGAA ATAAC
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C3 Spacer，如SEQ ID NO:3所示；S2、提取待测血液样本中的总组DNA，得到DNA模板；S3、荧光RPA反应体系的构建：将S1中设计得到的上游引物、下游引物和探针加至含酶冻干粉的RPA反应管中，再向RPA反应管中加入缓冲液、去离子水、S2中得到的DNA模板和醋酸镁溶液，构建荧光RPA反应体系，所述酶冻干粉包括噬菌体重组酶、DNA聚合酶、单链DNA结合蛋白、dNTP和核酸外切酶；S4、荧光RPA检测：将构建好的荧光RPA反应体系，放置于荧光定量PCR仪中，进行荧光RPA检测。2.根据权利要求1所述的基于重组酶聚合酶扩增技术的田鼠巴贝虫检测方法，其特征在于，所述田鼠巴贝虫基因片段为田鼠巴贝虫18SrRNA基因片段。3.根据权利要求1所述的基于重组酶聚合酶扩增技术的田鼠巴贝虫检测方法，其特征在于，所述探针的5'端带有FA...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑彬，徐斌，强焜，胡薇，蔡玉春，陈军虎，俞铖航，梁家瑞，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心，
类型：发明
国别省市：